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        廈門地區(qū)低致病性禽流感病毒流行病學(xué)調(diào)查與分析

        2019-03-07 08:43:06,,,,
        關(guān)鍵詞:活禽毒株禽流感

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        禽流感病毒可以感染家禽、野禽甚至哺乳動(dòng)物并致死,不僅給養(yǎng)殖業(yè)造成重大經(jīng)濟(jì)損失,亦危害公共衛(wèi)生安全,是重要的人獸共患病病原。目前禽流感病毒有18個(gè)H亞型(H1 -H18)及11個(gè)N亞型(N1-N11),其中H1-H16亞型的流感病毒均可在水禽中分離到[1],而H17和H18自蝙蝠中檢出[2]。野禽是禽流感病毒的天然宿主,并可通過(guò)遷徙,造成世界范圍的大流行;豬和水禽是禽流感病毒的混合器,可以同時(shí)感染多種不同亞型的流感病毒,并在其體內(nèi)發(fā)生重組,產(chǎn)生新的亞型;家禽活禽市場(chǎng)是禽流感病毒的重要儲(chǔ)存庫(kù),大量不同種屬、不同產(chǎn)地來(lái)源的禽類,高密度的集中在一起,加上管理和消毒不到位,造成禽流感病毒的長(zhǎng)期存在及循環(huán),并可借此途徑感染人。

        禽流感病毒分為高致病性(High Pathogenic Avian Influenza Viruses, HPAIV)和低致病性(Low Pathogenic Avian Influenza Viruses,LPAIV)兩大類。高致病性禽流感因其在禽類中傳播速度快、危害大、致死率高,被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織列為A類動(dòng)物疫病,成為疫病防控的重點(diǎn)。而LPAIV感染家禽后癥狀不明顯,容易被忽視,因此得以長(zhǎng)期、廣泛的分布,周而復(fù)始的循環(huán)及變異使其不斷適應(yīng)當(dāng)下養(yǎng)殖環(huán)境,進(jìn)而演化成為具有耐藥性及跨種屬感染的新型毒株。有些低致病禽流感病毒如H7N9、H6N1、H10N8、H9N2,甚至可以突破宿主屏障感染人并致死[3-6],存在著極大的安全隱患。因此只有同時(shí)加大對(duì)LPAIV的監(jiān)測(cè)力度,掌握本地區(qū)家禽禽流感病毒的真實(shí)帶毒情況,才能科學(xué)有效的防控疫病。

        1 材料與方法

        1.1樣品來(lái)源 選取2016年11月至2017年3月采集的廈門主要幾家活禽交易市場(chǎng)的家禽喉、泄殖腔棉拭子及飼料、水等環(huán)境樣品進(jìn)行禽流感的檢測(cè)及分型鑒定。同批次且相同來(lái)源的樣品為1個(gè)群,共采集75群,534份棉拭子,包括雞25群,265份;鴨24群,152份;環(huán)境26群,117份。

        1.2樣品的保存與運(yùn)輸 保存液PBS購(gòu)自HyClone,頭孢西丁鈉購(gòu)自致君(深圳)制藥有限公司,甘油(分析純)購(gòu)自廈門綠茵試劑玻儀有限公司。PBS使用前,配置為頭孢西丁鈉濃度為0.2%、甘油濃度20%的工作液,分裝在2 mL的EP管中,用于樣品的保存。樣品采集后立即置于含冰塊的泡沫箱中,4 h內(nèi)送實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)或-70 ℃保存,檢測(cè)過(guò)程中避免樣品的反復(fù)凍融。

        1.3檢測(cè)試劑及儀器 HA禽流感病毒通用診斷試劑盒購(gòu)自QIAGEN,H1-H16亞型及N1-N9亞型的分型診斷試劑盒購(gòu)自碩世生物科技有限公司和深圳澳東檢驗(yàn)檢測(cè)科技有限公司,核酸提取試劑(MagMAXTM-97Viral RNA)購(gòu)自Thermo Fisher Scientific。熒光定量PCR儀(Cobas z 480)購(gòu)自RoCho,全自動(dòng)核酸提取儀購(gòu)自瑞士TECAN。

        1.4檢測(cè)及分型鑒定 待檢樣品經(jīng)全自動(dòng)核酸提取儀提取核酸后,用HA禽流感病毒通用診斷試劑盒對(duì)其進(jìn)行檢測(cè),檢測(cè)結(jié)果處于臨界值的可疑樣品,經(jīng)重復(fù)檢測(cè)結(jié)果仍為可疑時(shí)判為陽(yáng)性,用于禽流感病毒檢出率的統(tǒng)計(jì)。從檢出強(qiáng)陽(yáng)性的群中,混合同群的強(qiáng)陽(yáng)性核酸樣品,用亞型分型診斷試劑盒進(jìn)一步進(jìn)行H1-H16及N1-N9的分型鑒定,計(jì)算不同亞型病毒的群檢出率。

        2 結(jié) 果

        2.1禽流感病毒的檢出率 2016年11月至2017年3月,在本地幾家活禽交易市場(chǎng)共抽檢75個(gè)群534份樣品,檢出禽流感病毒陽(yáng)性的群33群,陽(yáng)性樣品216份,群陽(yáng)性率為44.0%,樣品陽(yáng)性率為40.4%。其中抽檢雞群25群265份樣品,檢出陽(yáng)性的雞群15群,陽(yáng)性樣品111份,雞群陽(yáng)性率為60.0%,樣品陽(yáng)性率為41.9%;抽檢鴨群24群152份樣品,檢出陽(yáng)性的鴨群11群,陽(yáng)性樣品65份,鴨群陽(yáng)性率為45.8%,樣品陽(yáng)性率為42.8%;抽檢環(huán)境群26群117份樣品,檢出陽(yáng)性的環(huán)境群7群,陽(yáng)性樣品40份,環(huán)境群陽(yáng)性率為26.9%,樣品陽(yáng)性率為34.2%,詳見(jiàn)表1。

        表1 活禽交易市場(chǎng)禽流感病毒檢出率Tab.1 Detection rate of avian influenza virus in the live poultry market

        2.2禽流感病毒亞型鑒定結(jié)果 從14個(gè)檢出強(qiáng)陽(yáng)性的群中,鑒定出6種HA亞型,不同亞型病毒群檢出率由高到低依次為H9(100%,14/14)、H6(35.7%,5/14)、H11(28.6%,4/14)、H12(21.4%,3/14)、H1(14.3%,2/14)、H3(7.1%,1/14);檢出5種NA亞型,不同亞型病毒群檢出率由高到低依次為N2(92.9%,13/14)、N6(42.9%,6/14)、N3(35.7%,5/14)、N8(28.6%,4/14)、N9(21.4%,3/14);H9亞型,N2亞型檢出率特別高,詳見(jiàn)表2。

        表2 活禽交易市場(chǎng)部分陽(yáng)性樣本HA、NA亞型分型結(jié)果Tab.2 Results of HA and NA subtypes typing of parts of sample in live poultry market

        2.3禽流感病毒混合感染情況 交易市場(chǎng)中環(huán)境樣品中可檢出多種亞型的禽流感病毒。雞群的混合感染不明顯,7個(gè)禽流感陽(yáng)性的雞群中,有6個(gè)群體僅檢出H9N2亞型病毒,混合感染率為14.3%(1/7);而鴨的混合感染情況較為嚴(yán)重,4個(gè)禽流感陽(yáng)性的鴨群中有3個(gè)存在混合感染,混合感染率為75.0%(3/4),并且均是3種亞型以上的混合感染;3個(gè)禽流感陽(yáng)性的環(huán)境群中均同時(shí)4種亞型以上的病毒。

        3 討 論

        家禽的禽流感感染有很強(qiáng)的季節(jié)性,以冬季最高,春秋季次之,因此本研究選取2016年11月—2017年3月的時(shí)間段進(jìn)行抽樣檢測(cè),根據(jù)近幾年來(lái)廈門市禽流感監(jiān)測(cè)結(jié)果,這5個(gè)月中禽流感檢出率最高。選擇活禽交易市場(chǎng)作為研究對(duì)象,是因?yàn)榛钋萁灰资袌?chǎng)是禽流感病毒的重要儲(chǔ)存庫(kù),大量不同種屬、不同產(chǎn)地來(lái)源的禽類,高密度的集中在一起,加上管理和消毒不到位,易造成禽流感病毒的長(zhǎng)期存在及循環(huán),分離到的亞型會(huì)更豐富。目前尚未見(jiàn)到廈門市低致病性禽流感病毒亞型分型情況的報(bào)道,該研究彌補(bǔ)了數(shù)據(jù)的空白,為有效的防控提供科學(xué)依據(jù)。

        研究亞型分型時(shí),篩去檢測(cè)結(jié)果中弱陽(yáng)性和臨界值的陽(yáng)性樣品,選擇具有標(biāo)準(zhǔn)熒光曲線,Ct值小于30的陽(yáng)性樣本進(jìn)行檢測(cè),有利于確保分型結(jié)果的準(zhǔn)確性。結(jié)果提示該時(shí)期廈門市至少存在6種HA亞型和5種NA亞型的低致病性禽流感病毒,HA檢出率由高到低依次為H9、H6、H11、H12、H1、H3;與華東地區(qū)2002-2010年檢出的亞型相比存在較大的差異,華東地區(qū)有8種HA亞型,檢出率由高到低依次為H3、H6、H11、H1、H4、H9、H10、H8,主要流行的亞型有H3、H6、H11、H1、H4幾種,而H9、H10、H8較少檢出[7-9]。兩地亞型情況存在差異,一是廈門市H9亞型檢出率最高,在所有檢測(cè)的禽流感陽(yáng)性禽群及環(huán)境樣品中均檢出H9亞型,而華東地區(qū)H9檢出率不高;二是廈門市未檢測(cè)出H4、H8和H10亞型;三是廈門市在3個(gè)禽群中檢測(cè)到H12亞型,而這種亞型在華東地區(qū)尚未見(jiàn)報(bào)道。廈門市與華東地區(qū)H6亞型的檢出率均高居第二,可見(jiàn)這種亞型廣泛分布在華東和福建地區(qū),仍是目前主要流行毒株。筆者認(rèn)為亞型檢出率差異大的原因主要有以下4點(diǎn):一是研究的年份不同,不同亞型毒株有自身的流行規(guī)律,每隔幾年就會(huì)出現(xiàn)一次大流行;二是不同的地域、氣候、溫濕度條件,都會(huì)影響流感病毒的進(jìn)化及流行情況,有些毒株較適應(yīng)當(dāng)?shù)氐沫h(huán)境,就形成了當(dāng)?shù)氐牧餍卸局?;三是不同地區(qū)家禽的種群結(jié)構(gòu)不同,陸禽和水禽的品種、比例存在差異,飼養(yǎng)模式不同,防疫條件不同,免疫壓力不同,交易市場(chǎng)家禽來(lái)源不同等均會(huì)造成毒株之間的差異;四是不同地區(qū)候鳥(niǎo)的遷徙種類和數(shù)量亦存在差異,因此由候鳥(niǎo)傳播給家禽的毒株亦存在差異。

        研究發(fā)現(xiàn),鴨的感染情況復(fù)雜,多以3種以上亞型的混合感染為主,這增加了防疫的難度。水禽被認(rèn)為是禽流感病毒的儲(chǔ)存庫(kù)和傳染源,可以通過(guò)公用水域與野鳥(niǎo)接觸,隱形感染多種亞型病毒而不發(fā)病,為各亞型的基因重組提供了良好的載體,加快表面蛋白的變異,不斷豐富內(nèi)部基因的重配,最終又可以通過(guò)與陸禽的接觸將變異的新型病毒傳播給陸禽,引起新型病毒的流行與爆發(fā)。因此筆者認(rèn)為水禽的防疫是禽流感防控的重點(diǎn)和難點(diǎn),盡管水禽很少因感染禽流感病毒發(fā)生大規(guī)模的死亡,但因其在禽流感病毒傳播和進(jìn)化中的重要地位,該病的防控絕不能忽視對(duì)水禽的監(jiān)測(cè),同時(shí)應(yīng)盡量避免野生水禽、家養(yǎng)水禽及其它野鳥(niǎo)與陸禽間的相互接觸。

        雞的感染主要以H9N2亞型病毒為主,檢出率位居首位,預(yù)示著未來(lái)防疫的艱巨性。一方面H9N2自身出現(xiàn)毒力增強(qiáng)的趨勢(shì)。H9N2作為弱毒僅造成家禽呼吸道癥狀,通過(guò)進(jìn)化變異成可致死禽類的強(qiáng)毒株,給養(yǎng)殖業(yè)造成巨大損失。另一方面該亞型毒株已突破宿主種間屏障,可感染人發(fā)病。早在1998-1999年香港、廣州地區(qū)就發(fā)生4例人感染H9N2病例[10],隨后江西、長(zhǎng)沙、成都、云南、四川等地均出現(xiàn)H9N2感染人病例的報(bào)道[11-15]。人群H9N2血清學(xué)調(diào)查數(shù)據(jù)也驗(yàn)證了H9N2可感染人的結(jié)論[16]。不僅如此,H9N2還為1997年香港暴發(fā)的感染人H5N1、2013年國(guó)內(nèi)暴發(fā)的感染人H7N9及2014年感染人H10N8等亞型流感病毒提供內(nèi)部基因[17-19],說(shuō)明潛在高致病的毒株可以與H9N2進(jìn)行基因整合,并從H9N2的基因中獲得更適合其生存和致病的基因,產(chǎn)生毒力更強(qiáng),宿主范圍更廣的新型毒株,達(dá)到其進(jìn)化的目的。因此筆者認(rèn)為,在今后的防疫工作中,在兼顧高致病禽流感防控的同時(shí),應(yīng)加大對(duì)H9N2亞型的監(jiān)控,養(yǎng)殖場(chǎng)應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況制定H9N2的免疫計(jì)劃,而活禽市場(chǎng)應(yīng)加強(qiáng)管理消毒,并細(xì)化禽類基本信息,以便溯源,防止該亞型的大流行和傳染人事件的發(fā)生。

        利益沖突:無(wú)

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