藍(lán)國(guó)兵，何自福，于 琳，湯亞飛，李正剛，鄧銘光，佘小漫

（1.廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所，廣東 廣州 510640；2.廣東省植物保護(hù)新技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510640）

【研究意義】火龍果（Hylocereus undatus）為仙人掌科量天尺屬多年生攀緣性多肉質(zhì)植物，原產(chǎn)于巴西、墨西哥等中美洲地區(qū)［1］。我國(guó)臺(tái)灣于20世紀(jì)90年代初引進(jìn)試種成功后傳入大陸，目前在廣西、廣東、海南、福建、貴州、云南等地均有大面積種植［2-3］?；瘕埞a(chǎn)業(yè)已成為農(nóng)民脫貧致富的重要經(jīng)濟(jì)作物之一?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】隨著火龍果的大面積種植，火龍果種植區(qū)病害發(fā)生也日趨嚴(yán)重?；瘕埞a(chǎn)上報(bào)道為害較大的病害有褐腐病（Neoscytalidium dimidiatum）［4-5］、炭 疽 ?。–ollectotrichum gloeosporioides）［6］、軟腐?。‥nterobacter cloacae）［7］、病毒?。–actus virus X）［8］等，其中由新暗色柱節(jié)孢菌（N.dimidiatum）侵染引起的火龍果褐腐?。ㄓ址Q潰瘍病），是嚴(yán)重威脅火龍果產(chǎn)業(yè)發(fā)展的一種毀滅性真菌病害。該病害已在以色列、馬來西亞、美國(guó)等國(guó)家為害［9-11］，輕則造成果皮“麻點(diǎn)”降低商品價(jià)值，重則導(dǎo)致整條莖稈和果實(shí)腐爛死亡，所造成的平均產(chǎn)量損失一般在20%～30%，嚴(yán)重時(shí)達(dá)50%以上甚至毀園［12］。華南地區(qū)常年高溫高濕的氣候特點(diǎn)有利于火龍果褐腐病的暴發(fā)和流行，火龍果整個(gè)生長(zhǎng)季均可受到該病原菌為害，廣東地區(qū)發(fā)病最嚴(yán)重是每年4—10月。【前人研究進(jìn)展】目前，火龍果褐腐病的防治主要依賴化學(xué)農(nóng)藥，已報(bào)道具較好抑菌效果的有咪鮮胺、戊唑醇、吡唑醚菌酯、苯醚甲環(huán)唑、丙環(huán)唑、氟硅唑、多菌靈等藥劑［13-15］，但相關(guān)藥劑對(duì)火龍果褐腐病的田間防效試驗(yàn)報(bào)道較少［12,16-17］。至2019年8月，在中國(guó)農(nóng)藥信息網(wǎng)（http: //www.chinapesticide.org.cn）上尚未查到已有登記防治火龍果病害的殺菌劑產(chǎn)品，有關(guān)有效藥劑對(duì)火龍果褐腐病菌持效期研究尚未見報(bào)道?！緮M解決的關(guān)鍵問題】為了篩選出防治效果突出的藥劑應(yīng)用于田間生產(chǎn)，本研究采用藥劑瓊脂擴(kuò)散法，測(cè)定了16種殺菌劑產(chǎn)品對(duì)火龍果褐腐病菌的抑菌持效期，并對(duì)抑菌效果好或持效期長(zhǎng)的殺菌劑劑產(chǎn)品開展田間藥效試驗(yàn)，以期為火龍果褐腐病的防控提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試菌株：用于持效期測(cè)定的火龍果褐腐病菌株編號(hào)為DF-CH8，由廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所分離、鑒定和保存。

供試殺菌劑：供試的16種殺菌劑均為市售產(chǎn)品，分別為50%咯菌腈可濕性粉劑（瑞士先正達(dá)作物保護(hù)有限公司）、250 g/L 丙環(huán)唑乳油（瑞士先正達(dá)作物保護(hù)有限公司）、40%丙硫菌唑懸浮劑（江門市大光明農(nóng)化新會(huì)有限公司配制）、430 g/L戊唑醇懸浮劑（拜耳股份公司）、400 g/L氟硅唑乳油（江門市大光明農(nóng)化新會(huì)有限公司）、500 g/L異菌脲懸浮劑（美國(guó)富美實(shí)公司）、450 g/L咪鮮胺水乳劑（美國(guó)富美實(shí)公司）、250 g/L苯醚甲環(huán)唑乳油（瑞士先正達(dá)作物保護(hù)有限公司）、40%腈菌唑可濕性粉劑（美國(guó)陶氏益農(nóng)公司）、50%多菌靈可濕性粉劑（四川國(guó)光股份有限公司）、40%噻菌靈可濕性粉劑（臺(tái)灣雋農(nóng)實(shí)業(yè)股份有限公司）、250 g/L嘧菌酯懸浮劑（先正達(dá)南通作物保護(hù)有限公司）、70%丙森鋅可濕性粉劑（拜耳股份公司）、2%春雷霉素水劑（日本北興化學(xué)工業(yè)株式會(huì)社、75%百菌清可濕性粉劑〔先正達(dá)（蘇州）作物保護(hù)有限公司〕、125 g/L氟環(huán)唑懸浮劑〔巴斯夫植物保護(hù)（江蘇）有限公司〕產(chǎn)品。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 抑菌持效期測(cè)定 菌株活化與含菌培養(yǎng)基制備：將供試菌株于PDA平板上27 ℃活化培養(yǎng)5 d，然后用無菌水洗下孢子，配制成1×107個(gè)孢子/mL孢子懸浮液，用移液槍吸200 μL孢子懸浮液加入到溫度約40℃的PDA培養(yǎng)基中，搖勻后傾入滅菌培養(yǎng)皿（直徑9 cm）中制成含菌的PDA平板。培養(yǎng)皿背面劃“十”字線，距離“十”字線交叉點(diǎn)3 cm處，用直徑為0.7 cm打孔器打孔后備用。

殺菌劑持效期測(cè)定：采用藥劑瓊脂擴(kuò)散法［18］，用無菌水將16種供試殺菌劑配制成有效成分濃度為1 000 mg/kg的稀釋藥液，用移液槍吸取50 μL藥液置于含菌PDA平板孔中，以加等體積的無菌水為空白對(duì)照，置于25 ℃培養(yǎng)箱中黑暗培養(yǎng)。培養(yǎng)后2、3、5、7、9、11、13、15 d分別測(cè)量“十”字線上抑菌圈半徑的大小，并觀察記錄抑菌圈消失時(shí)間。

1.2.2 田間小區(qū)藥效試驗(yàn) 試驗(yàn)于2018年在廣東省紫金縣鳳安鎮(zhèn)回龍村進(jìn)行，供試火龍果品種為紅肉紅皮火龍果，種植已有3年。試驗(yàn)地果園為平地，果園管理水平較差，火龍果褐腐病發(fā)生嚴(yán)重，果園病情壓力比較大。果園采用柱式栽培，每個(gè)水泥柱種植4株火龍果，每667 m2約120個(gè)水泥柱子。

試驗(yàn)設(shè)計(jì)及施藥方法：以本研究篩選出的抑菌持效期較長(zhǎng)或抑菌效果較好的殺菌劑為供試藥劑，設(shè)置100 mg/kg（常規(guī)施藥濃度）和500 mg/kg（偏高施藥濃度）兩種施藥濃度，在火龍果嫩莖剛抽出時(shí)開始施藥，間隔10～13 d施一次藥，連續(xù)施藥3次。每個(gè)處理3次重復(fù)，每個(gè)重復(fù)20株火龍果（5個(gè)水泥柱），隨機(jī)區(qū)組排列。采用背負(fù)式電動(dòng)噴霧器噴霧，每小區(qū)噴藥液量為4 L，對(duì)照區(qū)噴施等量清水，全株噴霧均勻。第1次施藥時(shí)，火龍果植株枝條上有較多褐腐病病斑，尚未有果。

調(diào)查方法：于第3次施藥后7 d和15 d調(diào)查防效，主要調(diào)查嫩莖的發(fā)病情況，并對(duì)藥劑安全性進(jìn)行觀察。每小區(qū)調(diào)查全部水泥柱火龍果，每株火龍果調(diào)查5個(gè)嫩莖。調(diào)查時(shí)按病莖面積所占比例進(jìn)行分級(jí)，統(tǒng)計(jì)病情指數(shù)和計(jì)算防治效果，采用DPS7.05軟件進(jìn)行差異顯著性分析。病情分級(jí)方法如下：0級(jí)，整條嫩莖無病斑；1級(jí)，病斑面積占整條嫩莖面積5%以下；3級(jí)，病斑面積占整條嫩莖面積6%～10%；5級(jí)，病斑面積占整條嫩莖面積11%～20%；7級(jí)，病斑面積占整條嫩莖面積21%～40%；9級(jí)，病斑面積占整條嫩莖面積41%以上。

2 結(jié)果與分析

2.1 殺菌劑抑菌持效期長(zhǎng)短比較

培養(yǎng)2 d后，16種藥劑對(duì)火龍果褐腐病菌DF-CH8菌株的抑菌圈均達(dá)到最大值，爾后隨著培養(yǎng)天數(shù)的增加，抑菌圈逐漸變小或消失。培養(yǎng)2 d后，咯菌腈、丙環(huán)唑、丙硫菌唑、戊唑醇、氟硅唑和異菌脲等6種殺菌劑對(duì)火龍果褐腐病菌的抑菌圈大且明顯，最大抑菌圈半徑分別為2.90、3.00、2.85、2.95、2.98、2.00 cm，培養(yǎng)15 d后抑菌圈半徑分別為1.80、1.30、1.30、1.20、0.70、0.50 cm，抑菌持效期長(zhǎng)。培養(yǎng)2 d后，咪鮮胺、苯醚甲環(huán)唑、腈菌唑等3種殺菌劑對(duì)火龍果褐腐病菌DF-CH8的抑菌圈半徑分別為3.00、2.90、2.80 cm，培養(yǎng)9～11 d后抑菌圈逐漸消失，表現(xiàn)出較長(zhǎng)的抑菌持效期。培養(yǎng)2 d后，多菌靈、嘧菌酯和噻菌靈等3種殺菌劑對(duì)火龍果褐腐病菌DFCH8的抑菌圈半徑分別為3.00、2.50、2.00 cm，培養(yǎng)5～7 d后抑菌圈逐漸消失，抑菌持效期較短。丙森鋅、春雷霉素、百菌清、氟環(huán)唑等4種殺菌劑早期對(duì)火龍果褐腐病菌的抑菌圈較小，最大抑菌圈半徑不足1.25 cm，培養(yǎng)3 d后抑菌圈基本消失，表現(xiàn)出極短的抑菌持效期（表1，圖1）。

2.2 殺菌劑田間防治效果比較

2.2.1 病指比較與安全性觀察 第3次施藥后7 d，咪鮮胺、苯醚甲環(huán)唑、咯菌腈、丙硫菌唑、丙環(huán)唑、氟硅唑、異菌脲、戊唑醇等8種藥劑100 mg/kg施藥濃度處理后，各小區(qū)火龍果嫩莖上褐腐病平均病情指數(shù)分別為9.50、8.42、7.22、6.69、6.06、6.03、5.36和4.69；500 mg/kg施藥濃度處理后，各小區(qū)火龍果嫩莖上褐腐病平均病情指數(shù)分別為 7.17、5.92、5.47、4.00、3.53、4.67、4.20和2.50，空白對(duì)照病情指數(shù)為24.36，顯著高于藥劑處理的病情指數(shù)（表2）。第3次施藥后15 d，咪鮮胺、苯醚甲環(huán)唑、咯菌腈、丙硫菌唑、丙環(huán)唑、氟硅唑、異菌脲、戊唑醇等8種藥劑100 mg/kg施藥濃度處理后，各小區(qū)火龍果嫩莖上褐腐病平均病情指數(shù)分別為21.56、23.31、14.95、10.50、11.45、10.61、9.75和 8.36；500 mg/kg施藥濃度處理后，各小區(qū)火龍果嫩莖上褐腐病平均病情指數(shù)分別為26.56、19.81、11.50、8.94、8.19、8.17、8.28和5.92；空白對(duì)照病情指數(shù)為33.47，顯著高于藥劑處理的病情指數(shù)（表2）。試驗(yàn)中僅觀察到丙環(huán)唑在500 mg/kg施藥濃度下對(duì)火龍果生長(zhǎng)有較明顯的抑制作用，表現(xiàn)為火龍果嫩莖抽出和生長(zhǎng)均較慢，其他7種殺菌劑處理未觀察到產(chǎn)生藥害現(xiàn)象。

表1 16種殺菌劑對(duì)火龍果褐腐病菌抑菌圈半徑大小及持效期Table 1 Radius sizes of inhibition zones and effective duration of 16 fungicides against N. dimidiatum

圖1 不同殺菌劑對(duì)火龍果褐腐病菌的抑制效果（25℃，2 d）Fig. 1 Inhibition effects of different fungicides against N. dimidiatum (25℃，2 d)

2.2.2 常規(guī)施藥濃度防效比較 100 mg/kg施藥濃度處理后，戊唑醇和異菌脲對(duì)火龍果褐腐病表現(xiàn)出較好的防效，第3次施藥后7 d平均防效分別達(dá)到80.79%和77.81%，第3次施藥后15 d平均防效仍分別有75.02%和70.84%，田間防治持效期較長(zhǎng)；氟硅唑、丙環(huán)唑、丙硫菌唑，第3次施藥后7 d對(duì)火龍果褐腐病平均防效分別為75.04%、75.12%和72.38%，第3次施藥后15 d對(duì)火龍果褐腐病防效降低，平均防效分別為68.23%、65.79%和68.70%，田間防治持效期一般；咯菌腈、苯醚甲環(huán)唑、咪鮮胺第3次施藥后7 d對(duì)火龍果褐腐病平均防效分別為70.10%、65.27%和60.89%，第3次施藥后15 d平均防效分別為55.39%、35.48%和30.32%，持效期較短（表2）。

表2 8種殺菌劑對(duì)火龍果褐腐病的田間防效Table 2 Field control effects of 8 fungicides against N. dimidiatum

2.2.3 偏高施藥濃度防效比較 施藥濃度為500 mg/kg時(shí)，供試的8種殺菌劑對(duì)火龍果褐腐病防治效果均有提高。戊唑醇、異菌脲、氟硅唑、丙環(huán)唑、丙硫菌唑等5種殺菌劑對(duì)火龍果褐腐病表現(xiàn)出良好的防效，田間防治持效期較長(zhǎng)，第3次施藥后7 d對(duì)火龍果褐腐病的平均防效分別為89.64%、82.71%、80.77%、85.51% 和 83.43%；第3次藥后15 d平均防效分別為82.15%、75.20%、75.78%、75.50%和73.14%，顯著高于其他3種殺菌劑?？┚?、苯醚甲環(huán)唑、咪鮮胺第3次施藥后7 d的防效比較好，平均防效分別為77.47%、75.84%和70.44%，第3次施藥后15 d的防效比較差，平均防效分別為65.64%、40.72%和20.55%（表2）。

3 討論

火龍果褐腐病是火龍果生產(chǎn)上的毀滅性病害，嚴(yán)重影響火龍果產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展，生產(chǎn)病害防控上主要還是依賴化學(xué)藥劑。該病菌主要為害幼嫩枝條和果實(shí)，在廣東地區(qū)每年4—10月的高溫多雨季節(jié)為害嚴(yán)重。此外，火龍果莖桿表面光滑且臘質(zhì)層厚，一般防治藥劑比較難被植株吸收起作用。具有內(nèi)吸活性強(qiáng)、耐雨水沖刷的殺菌劑才能起到較好防治效果。針對(duì)廣東地區(qū)高溫多雨的氣候特點(diǎn)和火龍果自身的生理結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，篩選出持效期長(zhǎng)且田間防治效果突出的殺菌藥劑在生產(chǎn)上具有重要應(yīng)用價(jià)值。

田間藥效試驗(yàn)選擇在病情壓力比較大的果園進(jìn)行，能較好地比較不同藥劑的防效差別。本研究中篩選到戊唑醇、異菌脲、氟硅唑、丙環(huán)唑、丙硫菌唑等5種藥劑對(duì)火龍果褐腐病表現(xiàn)出良好防效，可以作為防控火龍果褐腐病的重要藥劑。賢小勇等［16］在田間藥效試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)吡唑醚菌酯、嘧菌酯、戊唑醇等也有較好的防效，本研究結(jié)果與該研究結(jié)果基本一致，而氟硅唑防效相對(duì)較差，本研究結(jié)果與該研究結(jié)果不一致。此外，林珊宇等［12］的田間藥效試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)吡唑醚菌酯`氟唑菌酰胺藥劑對(duì)火龍果褐腐病也具有很好防效。

本研究采用藥劑瓊脂擴(kuò)散法，通過觀察抑菌圈的消失時(shí)間研究藥劑持效期，反映的是不同藥劑對(duì)火龍果褐腐病菌孢子萌發(fā)和菌絲生長(zhǎng)的抑制作用，抑菌圈大而干凈，且消失時(shí)間長(zhǎng)，說明藥劑對(duì)病菌的抑菌效果好且持效期長(zhǎng)。而在田間，藥劑的持效期往往還受田間環(huán)境、田間病原菌含量、病菌抗藥性、植物生理特性、藥劑作用方式、藥劑助劑特性等多種因素影響。郭永斌等［19］研究了6種銅制劑對(duì)蘋果樹腐爛病菌抑制作用的持效期及影響因素，證實(shí)光照、降雨、藥劑展著性均對(duì)藥劑持效期產(chǎn)生了影響。吡咯類藥劑咯菌腈對(duì)病菌室內(nèi)離體抑菌持效期長(zhǎng)，但在田間對(duì)火龍果嫩莖的防效比較差，這可能與咯菌腈沒有內(nèi)吸活性以及粉劑不耐雨水沖刷等有關(guān)［20-21］。三唑類藥劑戊唑醇在田間藥效試驗(yàn)中防效比較突出，持效期長(zhǎng)達(dá)15 d以上，這可能與戊唑醇能迅速被植物有生長(zhǎng)力的部分吸收并主要向頂部轉(zhuǎn)移的特性密切相關(guān)［22］。丙環(huán)唑、氟硅唑、丙硫菌唑等具有內(nèi)吸活性的三唑類殺菌劑室內(nèi)抑菌持效期較長(zhǎng)，在田間也表現(xiàn)出較好防效，藥后15 d的平均防效仍有65%以上，持效期也比較長(zhǎng)；而三唑類藥劑苯醚甲環(huán)唑在室內(nèi)抑菌效果好，但離體持效期比較短，田間藥效試驗(yàn)中的早期防效較好，后期防效較差，持效期也較短，室內(nèi)和田間的表現(xiàn)相一致。同樣是三唑類藥劑的苯醚甲環(huán)唑，其防效較差的原因有待進(jìn)一步研究。二羧酰亞胺類藥劑異菌脲在室內(nèi)抑菌效果好，離體持效期長(zhǎng)，田間防效好，持效期也較長(zhǎng)，室內(nèi)和田間相一致。咪唑類藥劑咪鮮胺早期對(duì)火龍果褐腐病均抑菌效果很好，表現(xiàn)為抑菌圈大、圈內(nèi)干凈，但持效期特別短，7 d即失去抑菌作用，在田間防效中同樣表現(xiàn)不好，藥后7 d防效不足61%，藥后15 d基本沒有防效，分析與咪鮮胺藥劑內(nèi)吸活性較差的特性密切相關(guān)［23］。

4 結(jié)論

生產(chǎn)上防治火龍果褐腐病優(yōu)先推薦具有較強(qiáng)內(nèi)吸活性的戊唑醇、異菌脲、氟硅唑、丙硫菌唑、丙環(huán)唑等殺菌劑，注意輪換用藥，延緩病菌產(chǎn)生抗藥性。本團(tuán)隊(duì)研究發(fā)現(xiàn)，火龍果褐腐病的防控同時(shí)應(yīng)結(jié)合清園減少初侵染來源、加強(qiáng)水肥管理培育壯枝、適時(shí)施藥保護(hù)嫩枝老熟等綜合措施控制病害的為害和蔓延?；瘕埞指》揽厮巹┑霓r(nóng)藥殘留情況有待進(jìn)一步研究。