段新亞，盧紹蓉，王宏澤

（1.昆明市第三人民醫(yī)院 結(jié)核一科，云南 安寧 650301；2.昆明市第三人民醫(yī)院 呼吸科，云南 昆明 650041；3.77228部隊(duì)醫(yī)院衛(wèi)生連，云南 大理 671000）

肺結(jié)核病以T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫為主，淋巴細(xì)胞在結(jié)核免疫中起著重要作用[1]。結(jié)核病的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸不僅與結(jié)核分枝桿菌的數(shù)量、毒力有關(guān)，而且與宿主細(xì)胞的免疫功能有密切關(guān)系。外周血淋巴細(xì)胞亞群CD4絕對(duì)值測(cè)定是反映機(jī)體免疫功能狀態(tài)的重要指標(biāo)。選擇2015年1月-2016年12月我院收治的120例肺結(jié)核患者，通過(guò)觀察外周血淋巴細(xì)胞CD4絕對(duì)值計(jì)數(shù)的變化，探討淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)水平的變化在肺結(jié)核發(fā)生、發(fā)展中的作用，為臨床免疫干預(yù)提供理論依據(jù)，現(xiàn)報(bào)告如下。

資料與方法 一、一般資料 本組120例，男65例，女55例；年齡18～75歲，平均（42±7）歲。納入患者分為其中初治肺結(jié)核肺部病灶少無(wú)合并癥的70例為一組，復(fù)治耐藥肺結(jié)核20例，亞急性血行播散性肺結(jié)核10例，肺部有廣泛空洞病灶的10例，肺結(jié)核合并有糖尿病、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎10例為一組，各組間在性別、年齡、病程等方面差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。

二、方法 應(yīng)用FACSCalibur四色流式細(xì)胞儀及Muhi TEST IMKKit試劑盒，將10“1CD3FITC/CD8PE/CD45PerCP/CD4APC和10燦13FITC/CD16 PE+56PE/CD45PerCP/CD19APC分另0加入兩個(gè)流式細(xì)胞檢測(cè)管底部，管中分別加入100乙二胺四乙酸（EDTA） 抗凝血與單克隆抗體充分混勻，常溫避光染色15min；裂解紅細(xì)胞，流式細(xì)胞儀分析熒光抗體染色后上機(jī)檢測(cè)，獲取細(xì)胞數(shù)≥15 000個(gè)。應(yīng)用BD公司MULTISET軟件分析淋巴細(xì)胞中CD3+細(xì)胞、CD4+細(xì)胞、CD3+CD8+細(xì)胞、CD4+CD8+細(xì)胞、計(jì)算CD3+CD48CD3+CD8+比值。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以（±s） 表示，采用計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。

表1 初治與其它各組的淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)

表2 肺部病灶單一和廣泛肺結(jié)核2組淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)

結(jié) 果 初治組及其各組間CD3+、CD4+、CD8+絕對(duì)數(shù)及CD4+／CD8+比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），初治組與各組比較：亞急性血行播散性肺結(jié)核及空洞型肺結(jié)核、復(fù)治耐藥肺結(jié)核及肺結(jié)核合并癥組患者外周血CD4+T細(xì)胞絕對(duì)值明顯降低，CD4+／CD8+比例明顯降低，而初治肺結(jié)核肺部病灶少無(wú)合并癥的肺結(jié)核患者CD4+T細(xì)胞絕對(duì)數(shù)基本正常。2組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表1。病變范圍廣泛者（病變＞3個(gè)肺野，伴有空洞） 較病變范圍不廣泛者（病變＜3個(gè)肺野）CD4+計(jì)數(shù)明顯降低，見(jiàn)表2。

討 論 結(jié)核分枝桿菌是一種胞內(nèi)寄生菌。主要存在于感染宿主器官肉芽腫巨噬細(xì)胞中。結(jié)核病的發(fā)病過(guò)程伴隨著結(jié)核分枝桿菌在體內(nèi)慢性、持續(xù)的刺激，使機(jī)體表現(xiàn)為一種持續(xù)性的免疫應(yīng)答，而細(xì)胞免疫應(yīng)答在其中發(fā)揮著重要作用。血液中T細(xì)胞亞群比例及相關(guān)細(xì)胞因子的作用是細(xì)胞免疫中的重要因素[2]。結(jié)核病的免疫是由T細(xì)胞所介導(dǎo)的細(xì)胞免疫反應(yīng)為主。根據(jù)T細(xì)胞表面的分子不同特征可分為兩個(gè)亞群，輔助性T細(xì)胞（CD4+） 和抑制性T細(xì)胞（CD8+），這2種細(xì)胞亞群的動(dòng)態(tài)平衡可影響結(jié)核病的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸。潛伏感染的結(jié)核分枝桿菌在體內(nèi)可能呈非復(fù)制狀態(tài)[3]。一旦免疫反應(yīng)平衡被打破。則可導(dǎo)致結(jié)核分枝桿菌的再活化和復(fù)制，并伴組織壞死和破壞，從而產(chǎn)生了活動(dòng)性結(jié)核病。以往研究顯示：肺結(jié)核患者與健康者比較，外周血的CD4+T細(xì)胞數(shù)明顯減低。研究發(fā)現(xiàn)，CD4+T細(xì)胞在控制結(jié)核感染時(shí)有一定的獨(dú)立性。CD4+／CD8+比值降低是疾病嚴(yán)重的重要指標(biāo)之一[4]。本研究中亞急性血行播散性肺結(jié)核及空洞型肺結(jié)核、復(fù)治耐藥肺結(jié)核及肺結(jié)核合并癥組患者外周血CD4+T細(xì)胞絕對(duì)數(shù)明顯降低，CD4+／CD8+比例明顯降低，而初治肺結(jié)核肺部病灶少無(wú)合并癥的肺結(jié)核患者CD4+T細(xì)胞絕對(duì)數(shù)基本正常。2組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），這與亞血行播散性肺結(jié)核起病緩慢、病程長(zhǎng)、病變范圍廣有關(guān)，進(jìn)一步說(shuō)明抑制性T細(xì)胞與輔助性T細(xì)胞的失衡導(dǎo)致結(jié)核病發(fā)生和發(fā)展，反映了CD4+T細(xì)胞降低程度與疾病的嚴(yán)重程度有一定的相關(guān)性。本研究結(jié)果顯示，繼發(fā)性肺結(jié)核患者中病變范圍廣泛者較病變范圍不廣泛者CD4+T細(xì)胞絕對(duì)數(shù)明顯降低。近年來(lái)，CD8+T細(xì)胞在控制結(jié)核菌感染時(shí)的作用逐漸被重視[5]。CD4+T細(xì)胞在調(diào)節(jié)免疫，發(fā)揮細(xì)胞毒作用，溶解受感染后失去免疫活性的靶細(xì)胞使之調(diào)亡，在促使結(jié)核分枝桿菌暴露及病灶清除方面都有重要作用。結(jié)核病治療藥物對(duì)組織中及細(xì)胞內(nèi)的結(jié)核分枝桿菌都具有強(qiáng)大的殺菌或抑菌效果，盡管給予充分的規(guī)范化療，仍有部分患者治療失敗或治愈后復(fù)發(fā)。一方面是結(jié)核分枝桿菌的耐藥機(jī)制，另一方面則是人體免疫機(jī)制未能有效清除靶細(xì)胞和持留菌（含休眠菌）[6]。有效的化療殺滅大量結(jié)核分枝桿菌后，造成機(jī)體免疫損傷的變態(tài)反應(yīng)狀態(tài)明顯減弱，此時(shí)再給予免疫治療不容易因泛化反應(yīng)加重免疫損傷，而主要誘導(dǎo)保護(hù)性免疫反應(yīng)，有效的免疫治療確實(shí)能增強(qiáng)結(jié)核病化療效果同。在化療的基礎(chǔ)上結(jié)合T細(xì)胞亞群比例的變化給予適當(dāng)?shù)拿庖咧委?，主要誘導(dǎo)保護(hù)性免疫反應(yīng)，結(jié)核病化療和免疫治療可以互相補(bǔ)充，本研究從細(xì)胞免疫角度分析了T細(xì)胞亞群的變化對(duì)結(jié)核病發(fā)生、發(fā)展的影響。