周惠敏，胡志剛（通信作者）

1 江蘇大學(xué)醫(yī)學(xué)院 （江蘇鎮(zhèn)江 212013）；2 無(wú)錫市兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科 （江蘇無(wú)錫 214023）

類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）是一種病因未知以滑膜組織被炎 癥介質(zhì)浸潤(rùn)和骨關(guān)節(jié)損傷為主的慢性全身性自身免疫病。近年來(lái)，RA相關(guān)免疫細(xì)胞和免疫因子的相互調(diào)控受眾多自身免疫學(xué)病者關(guān)注，尤其是RA患者體內(nèi)的炎癥介質(zhì)如IL-6、TNF-α和抑炎癥介質(zhì)IL-10、TGF-β等的分泌水平更是疾病治療研究熱點(diǎn)。人們?cè)缙诰陀醒芯空{(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）和TDC等在自身免疫病中的負(fù)性調(diào)節(jié)作用，但對(duì)B細(xì)胞抑制免疫應(yīng)答了解較晚。1974年，有研究首次報(bào)道了B細(xì)胞具有抑制免疫應(yīng)答的功能，在豚鼠脾臟分離出的B細(xì)胞群中發(fā)現(xiàn)有部分B細(xì)胞可削弱遲發(fā)型超敏反應(yīng)（DTH）[1]，這提示人體也存在一個(gè)特殊免疫抑制功能的B細(xì)胞亞群，即調(diào)節(jié)性B細(xì)胞（Breg）。近年來(lái)，人們逐漸深入研究Breg，發(fā)現(xiàn)其也能產(chǎn)生抑炎癥介質(zhì)IL-10，同樣能調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BM-MSCs）已被證實(shí)對(duì)細(xì)胞具有免疫抑制作用，且被廣泛地應(yīng)用于一些疾病患者的治療，主要為其可以對(duì)人體損傷的炎癥微環(huán)境做出特異性的免疫應(yīng)答，同時(shí) BM-MSCs易于被外界因素刺激后產(chǎn)生一些免疫調(diào)節(jié)因子，如 IDO、 PGE2、 NO、 IL-10、腫瘤壞死誘導(dǎo)基因（TSG6）等[2]。本研究對(duì)IL-10的來(lái)源、功能、與BM-MSCs的相互調(diào)控作用及其對(duì)RA的影響做一綜述。

1 IL-10與類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的關(guān)系

IL-10是一種由 T細(xì)胞、B細(xì)胞、單核-巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞以及樹(shù)突狀細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子，主要發(fā)揮免疫抑制作用，能夠抑制患者自身免疫應(yīng)答，因此對(duì)炎癥和自身免疫病的調(diào)控發(fā)揮重要作用。 Mizoguchi等[3]發(fā)現(xiàn) B細(xì)胞的一個(gè)亞群能釋放 IL-10等抑炎癥介質(zhì)，具有高分泌 IL-10能力的 CD1dhiCD5+CD19hiBreg，又稱(chēng)為 B10細(xì)胞。Liu 等[4]研究發(fā)現(xiàn)伯氏瘧原蟲(chóng)感染C57BL/6小鼠后，可誘導(dǎo)產(chǎn)生B10細(xì)胞，過(guò)繼轉(zhuǎn)移B10細(xì)胞能抑制NK和CD8+T細(xì)胞的募集和腦組織出血，證明了IL-10+Breg細(xì)胞在控制小鼠瘧疾炎癥反應(yīng)中的重要作用。Lee和Kung[5]在做李斯特菌易感性實(shí)驗(yàn)時(shí)也發(fā)現(xiàn)邊緣區(qū)B細(xì)胞是IL-10的主要來(lái)源。因此，我們推測(cè)Breg細(xì)胞增多可能會(huì)引起IL-10的升高。目前有很明顯的證據(jù)顯示Breg細(xì)胞能降低自身免疫病的發(fā)生率且對(duì)疾病發(fā)作有一定的緩解作用[6-7]。

而介導(dǎo)IL-10 發(fā)揮抗感染作用的關(guān)鍵信號(hào)通路是Jak/STAT通路。IL-10與其配體結(jié)合后激活Jak1/STAT3通路，STAT3與IL-10基因啟動(dòng)子結(jié)合后誘導(dǎo)IL-10分泌IL-10通過(guò)減少促炎癥介質(zhì)的釋放，削弱細(xì)胞表面 MHCⅡ類(lèi)分子呈遞抗原到 T細(xì)胞等啟動(dòng)抗感染性級(jí)聯(lián)反應(yīng)和 TNF等細(xì)胞因子的表達(dá)來(lái)抑制免疫應(yīng)答[8]。

RA是一種多發(fā)于骨關(guān)節(jié)滑膜部位的自身免疫性疾病，伴有類(lèi)風(fēng)濕因子（RF）和抗瓜氨酸化蛋白質(zhì)抗體（ACPAs）等自身抗體的大量產(chǎn)生，臨床常表現(xiàn)為手、足小關(guān)節(jié)對(duì)稱(chēng)性的滑膜炎癥。如果不能及時(shí)對(duì)其有效治療將會(huì)導(dǎo)致關(guān)節(jié)部位的不可逆性損傷[9]。免疫學(xué)分析顯示，有多種免疫細(xì)胞及免疫分子參與了RA的調(diào)控，活化的 T細(xì)胞、B細(xì)胞和單核-巨噬細(xì)胞的大量浸潤(rùn)及炎癥介質(zhì)（IL-6、TNF-α等）都在RA發(fā)生發(fā)展中具有重要作用[10-11]。既然IL-10是重要的抑炎癥介質(zhì)，基于此提示IL-10可能對(duì)RA患者有治療價(jià)值。Min等[12]用單純 naive CD4 T 細(xì)胞、B10細(xì)胞、B- ve、 B10（ IL-10-/-）治療膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎小鼠（CIA），發(fā)現(xiàn)僅 B10細(xì)胞對(duì) CIA小鼠有緩解和延遲關(guān)節(jié)炎發(fā)作的作用，且骨關(guān)節(jié)滑膜液中 IL-17水平下降。因?yàn)橐呀?jīng)證實(shí) IL-23、IL-17等炎癥介質(zhì)與慢性自身免疫性疾病關(guān)系密切，同時(shí)體外實(shí)驗(yàn) B10細(xì)胞和 Th17細(xì)胞共培養(yǎng)又強(qiáng)有力地證明 B10是通過(guò)產(chǎn)生 IL-10來(lái)抑制 Th17細(xì)胞的生成。 因此，證實(shí)IL-10能有效阻止炎癥介質(zhì)的分泌，從而改善關(guān)節(jié)炎的發(fā)作。

蔡輝等[13]分析了30例 RA患者和10名健康者發(fā)現(xiàn)，RA活動(dòng)組血漿對(duì)比健康對(duì)照組 IL-10水平有顯著下降（P＜0.05）；RA緩解組IL-10水平較健康對(duì)照組有顯著升高（P＜0.05）。相關(guān)數(shù)據(jù)分析也顯示IL-10可以作為評(píng)價(jià)RA疾病活動(dòng)度的參考指標(biāo)之一。目前，人們?cè)絹?lái)越關(guān)注那些具有不同表型和來(lái)源的能分泌IL-10的B細(xì)胞亞群對(duì)關(guān)節(jié)炎患者的治療作用。Mauri等[14]發(fā)現(xiàn)用膠原和CD40單克隆抗體能夠體外激活CIA小鼠脾臟產(chǎn)生B10細(xì)胞，同時(shí)，他們還對(duì) DBA/I-TcR-β-Tg轉(zhuǎn)基因小鼠腹腔注射抗CD40刺激的 B細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)能顯著降低關(guān)節(jié)炎的發(fā)病率和嚴(yán)重程度，并顯著抑制 Th1細(xì)胞分化。進(jìn)一步的研究表明，從IL-10敲除小鼠分離的 B細(xì)胞不能介導(dǎo)保護(hù)功能，而且用抗 IL-10/抗 IL-10 R抗體刺激的關(guān)節(jié)炎性脾細(xì)胞分離的 B細(xì)胞能促進(jìn)受體小鼠發(fā)展為關(guān)節(jié)炎，這證實(shí)IL-10是 B10細(xì)胞的調(diào)節(jié)功能的必需因子。此外，在膠原免疫的第2天，對(duì)小鼠過(guò)繼轉(zhuǎn)移體外增殖的Breg細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)小鼠關(guān)節(jié)炎發(fā)作的臨床癥狀明顯延遲和關(guān)節(jié)損傷的嚴(yán)重程度降低。因此，體外促進(jìn)Breg細(xì)胞活化的同時(shí)也促進(jìn)B10細(xì)胞增殖，這可能是自身免疫性關(guān)節(jié)炎的有效治療方案。

上述研究提示，可以通過(guò)調(diào)節(jié)IL-10水平來(lái)調(diào)控機(jī)體免疫系統(tǒng)使其恢復(fù)平衡狀態(tài)，這可能是新的治療RA患者或其他自身免疫疾病患者的策略。但目前我們對(duì) IL-10抗炎癥反應(yīng)的復(fù)雜生物學(xué)效應(yīng)還未能了解，因此還需深入研究 IL-10的細(xì)胞來(lái)源及其調(diào)控機(jī)制，從功能、時(shí)間、空間等各方面分析它的免疫應(yīng)答規(guī)律。

2 BM-MSCs與IL-10+ B細(xì)胞的關(guān)系

間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）具有成體干細(xì)胞分化能力和免疫抑制能力，其主要來(lái)源是骨髓，能夠通過(guò)抑制自身免疫性疾病患者體內(nèi)的Th1和Th17細(xì)胞的增殖和分化來(lái)控制疾病的發(fā)展；也有研究發(fā)現(xiàn)，MSCs能夠誘導(dǎo)患者體內(nèi)Treg細(xì)胞的擴(kuò)增，從而達(dá)到控制自身免疫病患者體內(nèi)炎癥和治療疾病的效果[15]。目前，骨髓來(lái)源的MSCs，即 BM-MSCs已用于臨床多種疾病的治療，包括急性移植物抗宿主反應(yīng)（GVHD）、缺血性腦病、缺血性心臟病等[16-17]。除此之外，BM-MSCs對(duì)于其他自身免疫性疾病的治療也有著顯著的效果，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、干燥綜合征、系統(tǒng)性硬化癥等。有研究發(fā)現(xiàn)，在炎癥性微環(huán)境中干細(xì)胞的成骨能力受損，炎癥微環(huán)境可能會(huì)增加 BM-MSCs的免疫原性，從而降低其生存和分化能力[18-20]。BM-MSCs及 BM-MSCs分化的軟骨細(xì)胞可抑制類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者外周血和關(guān)節(jié)滑膜液中Ⅱ型膠原蛋白反應(yīng)性 T細(xì)胞的增生和表面活化抗原 CD69和 CD25的表達(dá)，抑制 IFN-γ和 TNF-α的分泌，促進(jìn)抑制性細(xì)胞因子IL-4的分泌[21]。BM-MSCs能夠減少效應(yīng)B細(xì)胞產(chǎn)生同時(shí)誘導(dǎo)Breg分化來(lái)控制自身免疫病的發(fā)展，但其治療自身免疫性疾病的潛在分子機(jī)制尚不明確，仍需進(jìn)一步的研究和探討。

有研究發(fā)現(xiàn)，調(diào)節(jié)性樹(shù)突狀細(xì)胞可以誘導(dǎo)Th0分化為T(mén)reg，Breg 也可以刺激Treg的產(chǎn)生，由此得出免疫細(xì)胞之間能相互調(diào)節(jié)[22]。BM-MSCs 能夠誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞表達(dá) CD206、IL-10和其他抗炎癥介質(zhì)，同時(shí)有效減少其促炎癥介質(zhì)的表達(dá)。因此，我們猜想BM-MSCs能否調(diào)控IL-10+B細(xì)胞產(chǎn)生。

王月等[23]研究證明，當(dāng) IL-10缺陷大鼠 BMSC與 Wistar大鼠 B細(xì)胞共培養(yǎng)96 h后可以明顯檢測(cè)到上清液 IL-10濃度升高，同時(shí)發(fā)現(xiàn) IL-10+B細(xì)胞數(shù)量增加，因此認(rèn)為BM-MSCs能刺激IL-10+B細(xì)胞產(chǎn)生，正向調(diào)控IL-10分泌；該研究還發(fā)現(xiàn)BM-MSCs誘導(dǎo)IL-10+B細(xì)胞增殖是通過(guò)BM-MSCs自身釋放的IFN-β 介導(dǎo)調(diào)控，而非BM-MSCs自身分泌的IL-10；因?yàn)橛妙A(yù)先抗 IFN-β中和 IFN-β處理過(guò)的BM-MSCs與B細(xì)胞共培養(yǎng)后，培養(yǎng)液上清中 IL-10濃度低于單純BM-MSCs+ B組[（350±70）pg/ ml與（530±87）pg/ ml，P=0.034]，用其他細(xì)胞因子中和抗體處理的 BM-MSCs+B細(xì)胞組與單純 BM-MSCs+B細(xì)胞組間無(wú)顯著差異（P＞0.05）；用 IL-10缺陷大鼠 BM-MSCs與 Wistar大鼠 B細(xì)胞共培養(yǎng)后，培養(yǎng)細(xì)胞的上清液中 IL-10濃度與單純BMSC+B細(xì)胞組相比雖有所下降，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.497）；除此之外，由于免疫細(xì)胞能相互調(diào)節(jié)，該研究也進(jìn)一步證明了B細(xì)胞同樣也能刺激 BM-MSCs分泌 IL-10。

又因?yàn)樵谘装Y微環(huán)境中 BM-MSCs分化和成骨能力受損，使其免疫調(diào)節(jié)和多向分化的潛能降低，而 IL-10是一種有效的抗感染免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞因子，基于此我們猜測(cè)IL-10+B細(xì)胞可以調(diào)控 BM-MSCs的成骨作用，進(jìn)而改善類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的發(fā)作。 此外，近年來(lái)有研究表明，IL-10在 BM-MSCs成骨過(guò)程中有雙重作用和濃度依賴(lài)性，即高劑量 IL-10可以激活 NF- κB信號(hào)通路抑制成骨，而低劑量 IL-10激活p38/ MAPK信號(hào)通路促進(jìn) BM-MSCs成骨作用[24]。不過(guò)IL-10增加也有可能會(huì)阻抑病原體清除，加速慢性感染的發(fā)生。因此，必須嚴(yán)格調(diào)控IL-10產(chǎn)生，合理應(yīng)用高劑量IL-10可逆轉(zhuǎn)成骨損傷。由此得出，BM-MSCs能特異調(diào)控 RA相關(guān)因子的分泌，尤其 BM-MSCs能刺激 IL-10+B細(xì)胞的活化和增殖，調(diào)控其高分泌抗炎癥介質(zhì)IL-10，這將為臨床緩解 RA患者關(guān)節(jié)滑膜炎性損傷和顯著提高治療效果提供新思路。

3 總結(jié)與展望

RA是一種關(guān)節(jié)滑膜炎性增生和軟骨組織損傷的慢性自身免疫病，大量證據(jù)表明免疫細(xì)胞和免疫因子的改變對(duì)其疾病發(fā)生發(fā)展起重要作用。就目前對(duì)IL-10的研究可知，其主要來(lái)源是調(diào)節(jié)性B細(xì)胞，B 細(xì)胞能夠免疫抑制炎癥反應(yīng)的發(fā)生最先證實(shí)于自身免疫病和慢性腸內(nèi)炎癥的研究。一方面，B細(xì)胞可作為 T細(xì)胞第二活化信號(hào)來(lái)刺激效應(yīng) CD4+T細(xì)胞的產(chǎn)生，從而抑制 Th0分化為調(diào)節(jié)性 T細(xì)胞，進(jìn)一步導(dǎo)致自身炎癥疾病發(fā)生；另一方面，B細(xì)胞有一類(lèi)亞群具有負(fù)向免疫調(diào)節(jié)作用，可以預(yù)防或者抑制自身免疫病的發(fā)生和發(fā)展，這類(lèi) B細(xì)胞亞群是通過(guò)產(chǎn)生 IL-10或 TGF-β等細(xì)胞因子，使 T細(xì)胞克隆無(wú)能和（或）誘導(dǎo)調(diào)節(jié)性 T細(xì)胞的分化來(lái)發(fā)揮負(fù)向免疫調(diào)節(jié)作用[25]。在炎癥疾病中，B 細(xì)胞這類(lèi)亞群主要通過(guò)產(chǎn)生IL-10 而起到保護(hù)性的作用[26]。因此，IL-10+B細(xì)胞的活化和增殖成為當(dāng)前研究類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的發(fā)病機(jī)制和治療對(duì)策的熱點(diǎn)。

IL-10通過(guò)減少 RA患者的骨關(guān)節(jié)滑膜周?chē)馨图?xì)胞和炎癥介質(zhì)的大量浸潤(rùn)，并且阻止破骨細(xì)胞激活而降低關(guān)節(jié)腫脹發(fā)炎程度，抑制關(guān)節(jié)炎疾病的發(fā)展，發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)功能。RA患者體內(nèi)Breg增殖能力降低且伴功能減退，而B(niǎo)reg主要發(fā)揮免疫抑制作用。研究表明，有多種因素可以刺激 B細(xì)胞向能高分泌 IL-10的 Breg細(xì)胞轉(zhuǎn)化，此外，有報(bào)道稱(chēng) Etv5是 Th1細(xì)胞和 Th2細(xì)胞中 IL-10的調(diào)控因子，能促進(jìn) Th細(xì)胞產(chǎn)生 IL-10而不改變 Th細(xì)胞數(shù)量[27]。目前，BM-MSCs被眾多學(xué)者認(rèn)為是一種促進(jìn) Breg分泌 IL-10的因素，而細(xì)胞因子在RA患者中發(fā)揮的作用是關(guān)注的焦點(diǎn)，目前已知IL-1和TNF-α是RA的主要致病因子。因?yàn)镸SCs具有強(qiáng)大的自我更新和多向分化的潛能，而且BMMSCs又是有效的基因轉(zhuǎn)導(dǎo)載體，有報(bào)道稱(chēng)IL-10基因修飾的BM-MSCs能夠治療大鼠缺血再灌注損傷，也有人嘗試用BM-MSCs彌補(bǔ)肝細(xì)胞的缺失從而治療慢性肝病[28]?；贗L-10具有免疫抑制作用而B(niǎo)M-MSCs強(qiáng)大成體干細(xì)胞轉(zhuǎn)化作用和體外大量擴(kuò)增能力，因此推測(cè)是否能將IL-10基因轉(zhuǎn)染至BM-MSCs，利用BM-MSCs在誘導(dǎo)膠原關(guān)節(jié)炎小鼠（CIA）發(fā)揮成骨作用，逆轉(zhuǎn)關(guān)節(jié)損傷，這或許是臨床治療類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的新方法。現(xiàn)國(guó)內(nèi)外臨床已應(yīng)用 B細(xì)胞來(lái)源的相關(guān)抑制炎癥因子治療類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎及多種自身免疫病，但仍有部分自身免疫病治療效果并不理想，表明 B細(xì)胞與自身免疫病的關(guān)系仍存在一些盲區(qū)，需要我們進(jìn)一步探討。

綜上所述，充分理解 IL-10的來(lái)源和免疫調(diào)節(jié)機(jī)制，闡明BM-MSCs與 B10細(xì)胞之間相互關(guān)系及其調(diào)控作用，深入研究IL-10在RA中發(fā)揮的重要作用，這將為RA等其他自身免疫病治療提供新的理論基礎(chǔ)，有助于臨床藥物研發(fā)及治療實(shí)驗(yàn)。