胡世瑋

（楊凌質(zhì)量技術(shù)檢測(cè)檢驗(yàn)所，陜西 楊凌 712100）

0 前言

現(xiàn)代人們的生活水平日益提高，農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全逐漸成為社會(huì)關(guān)注的熱點(diǎn)問(wèn)題，怎樣快速安全的買到放心可食用的農(nóng)產(chǎn)品成為民眾關(guān)心的熱門，借此農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)被進(jìn)一步推向公眾眼前。但是采用傳統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)室定量檢測(cè)價(jià)格昂貴、檢測(cè)成本高、樣品預(yù)處理繁瑣，不能達(dá)到及時(shí)監(jiān)測(cè)目的。因此，發(fā)展高效、快速、準(zhǔn)確的農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù)是解決這個(gè)問(wèn)題的最好途徑。建立一種有效、準(zhǔn)確的可應(yīng)用農(nóng)殘檢測(cè)方法勢(shì)在必行。在各種農(nóng)殘檢查方法中，農(nóng)藥殘留的酶抑制分光光度計(jì)方優(yōu)點(diǎn)是：檢測(cè)快速便捷，經(jīng)濟(jì)，低成本，對(duì)于有機(jī)磷以及氨基甲酸酯類的果蔬農(nóng)藥殘留檢測(cè)迅速準(zhǔn)確，很多部門選擇這一方法對(duì)農(nóng)殘進(jìn)行有效的檢測(cè)監(jiān)督。

1 檢測(cè)原理

酶抑制分光光度法利用逆向思維，采取GB／T5009．199-2003 的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢測(cè)，該方法的原理是：在特定條件下，有機(jī)磷以及氨基甲酸酯類兩種農(nóng)藥可以抑制膽堿酯酶的正常運(yùn)作，農(nóng)藥的濃度以及抑制率為正比關(guān)系。這種方法可以提取乙酰膽堿酯酶（ACHE），從家蠅以及其他動(dòng)物的組織中獲取,再與蔬菜樣本的提取液充分混合，檢測(cè)的底物成分包含碘化乙酰硫代膽堿（ATCHI），顯色劑的成分包含二硫雙硝基苯甲酸（DTNB），對(duì)試劑進(jìn)行比色檢測(cè)，通過(guò)一段時(shí)間的檢測(cè)，得到吸光值的準(zhǔn)確數(shù)值，乙酰膽堿酯酶的受抑制情況由吸光值分析進(jìn)行計(jì)算。乙酰膽堿酯酶的活性與殘留農(nóng)藥有關(guān)，農(nóng)藥會(huì)抑制其活性，隨著農(nóng)藥的濃度提高，對(duì)酶的活性的抑制率隨之升高。檢驗(yàn)中通過(guò)儀器對(duì)酶、底物以及顯色劑發(fā)生顯色反應(yīng)時(shí)的變色速率進(jìn)行檢測(cè)，將其與空白樣本進(jìn)行對(duì)比，計(jì)算并得出酶的抑制率，根據(jù)這一結(jié)果得出農(nóng)藥殘留量，檢測(cè)其是否超標(biāo)。

經(jīng)過(guò)檢測(cè)，農(nóng)藥殘留溶液的最大吸收峰處于412nm 處。使用波長(zhǎng)為412nm 的單色光源投射樣品以及參照溶液。將待測(cè)溶液以及參照溶液進(jìn)行吸光度對(duì)比，根據(jù)2 種溶液不同的吸光度變化進(jìn)行計(jì)算，得出對(duì)酶活性的抑制率，經(jīng)過(guò)計(jì)算結(jié)果可判定：當(dāng)抑制率低于50%時(shí)，樣品合格；當(dāng)抑制率大于等于50%時(shí)，樣品不合格，所測(cè)定樣品的農(nóng)藥殘留高于標(biāo)準(zhǔn)線。當(dāng)所測(cè)樣品不合格，抑制率大于等于50%時(shí)，必須將樣品重復(fù)檢測(cè)，檢測(cè)數(shù)大于三次，當(dāng)檢驗(yàn)結(jié)果難以確認(rèn)，可利用色譜儀以及質(zhì)譜儀結(jié)合以上方法進(jìn)行進(jìn)一步檢測(cè)。

2 酶抑制分光光度法的優(yōu)缺點(diǎn)

1）酶抑制分光光度法優(yōu)勢(shì)：一是簡(jiǎn)便快捷，該方法樣品前處理極為簡(jiǎn)單，一個(gè)熟練的檢測(cè)人員40分鐘可檢測(cè)14-16 個(gè)樣本，非常適合蔬菜品種多，批量大的蔬果生產(chǎn)基地。二是進(jìn)行蔬果農(nóng)藥殘留檢測(cè)不需要專門的化驗(yàn)室，只需占據(jù)房間一角，有兩張桌子大小的臺(tái)子即可，非常適合農(nóng)業(yè)生產(chǎn)基地。且每份樣品進(jìn)行檢測(cè)的成本低廉，在人民幣1 到2元的范圍內(nèi)。三是該方法對(duì)操作人員的要求不是很高，具有初、高中文化程度的人員，經(jīng)過(guò)一定短期培訓(xùn)即可勝任，容易得到普及和推廣。四是農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)法是專門針對(duì)有機(jī)磷以及氨基甲酸酯兩類農(nóng)藥的測(cè)定法，這種方法對(duì)有機(jī)磷高毒農(nóng)藥（甲胺磷、甲拌磷、氧樂(lè)果等）以及氨基甲酸酯類（克百威等）兩大類農(nóng)藥?kù)`敏度較高，而這些農(nóng)藥正是我國(guó)在蔬果上發(fā)現(xiàn)違法使用的主要農(nóng)藥品種，因此該方法對(duì)蔬果農(nóng)藥殘留的檢測(cè)具有很強(qiáng)的針對(duì)性。適合對(duì)果蔬農(nóng)殘定性定量檢測(cè)的初級(jí)篩選，這種方法使得實(shí)驗(yàn)室內(nèi)儀器的分析工作量大大降低。

2）酶抑制分光光度法不足：一是酶試劑容易失去活性，導(dǎo)致反應(yīng)狀態(tài)不穩(wěn)定，檢測(cè)結(jié)果存在較大誤差，重復(fù)性低，在現(xiàn)實(shí)應(yīng)用時(shí)確認(rèn)率處于60%到70%之間。二是檢測(cè)農(nóng)殘的品種單一，這種方法的檢測(cè)種類只有有機(jī)磷以及氨基甲酸酯2 種，對(duì)于劇毒農(nóng)藥例如有機(jī)氯和菊酯等其他類別無(wú)法檢測(cè)。對(duì)于農(nóng)藥最低檢測(cè)濃度（處于1 到20mg/kg 之間）高于國(guó)內(nèi)外的限定殘留標(biāo)準(zhǔn)量。所以不能利用這種酶抑制法進(jìn)行結(jié)果判定并將其結(jié)果用于法律仲裁的憑證，此種方法僅僅可利用其進(jìn)行初步篩選。三是此種方法對(duì)蔥、蒜、花椒、香菜、蘑菇、韭菜、番茄、茭白、胡蘿卜等可能呈現(xiàn)假陽(yáng)性的14 種蔬菜不適用。這類農(nóng)產(chǎn)品進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，可以對(duì)整株、整塊的蔬菜進(jìn)行浸泡，提取農(nóng)殘。對(duì)一些含葉綠素較高的蔬菜，可以利用活性炭以及藻土對(duì)其進(jìn)行顏色的吸附，這樣可以減少顏色對(duì)檢測(cè)的結(jié)果產(chǎn)生不良影響。四是進(jìn)行檢測(cè)時(shí)需要專門培訓(xùn)檢驗(yàn)員，檢驗(yàn)員必須進(jìn)行正規(guī)培訓(xùn)，這樣可以對(duì)檢測(cè)時(shí)出現(xiàn)的問(wèn)題進(jìn)行正確的判斷與處理，避免產(chǎn)生錯(cuò)誤的檢測(cè)結(jié)果。

3 檢測(cè)試劑的配置、保存、使用

在配置檢測(cè)試劑方面，必須使用去離子水或者蒸餾水對(duì)緩沖液進(jìn)行配置，確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

保存檢測(cè)試劑時(shí)，必須處于0 到5℃對(duì)乙酰膽堿酯酶、顯色劑以及底物這3 種液體進(jìn)行保存（緩沖液除外）。其中最重要的是乙酰膽堿酯酶的保存。長(zhǎng)時(shí)間的室溫放置或者經(jīng)過(guò)反復(fù)的凍化，會(huì)使酶的活性受到影響，檢測(cè)結(jié)果也會(huì)因此不準(zhǔn)確。綜上所述，檢測(cè)時(shí)應(yīng)結(jié)合實(shí)際檢測(cè)量進(jìn)行配置，做到隨用隨配，小支分裝進(jìn)行儲(chǔ)存，不能出現(xiàn)反復(fù)凍化的現(xiàn)象。

試劑的使用方面，首先將酶從冰箱拿出，靜置于室溫狀態(tài)15 分鐘左右，充分發(fā)揮酶的活性，使其達(dá)到最佳值。檢測(cè)農(nóng)殘時(shí)，將底物加入至待測(cè)樣品中立即搖勻，然后將試劑放進(jìn)比色池進(jìn)行比色，保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

4 儀器設(shè)備的要求

環(huán)境溫度對(duì)檢測(cè)結(jié)果會(huì)有一定的影響，為了避免這種影響，檢測(cè)儀器應(yīng)進(jìn)行30 分鐘的預(yù)熱，從而進(jìn)行正式的檢測(cè)。開機(jī)預(yù)熱以及正式檢測(cè)的中間，應(yīng)當(dāng)對(duì)試劑進(jìn)行“空白測(cè)試”，根據(jù)測(cè)試結(jié)果對(duì)試劑以及檢測(cè)時(shí)間充分調(diào)整，確保試劑的有效性以及使用性。

檢測(cè)時(shí)必須保證比色皿具有良好的透光度。試驗(yàn)后要定期用酒精對(duì)比色皿進(jìn)行清洗，在使用前應(yīng)使用擦鏡紙對(duì)透光面進(jìn)行擦拭。使用時(shí)輕拿輕放不可拿捏透光面。檢測(cè)完成后，應(yīng)立即將其用清水沖洗，接著使用去離子水對(duì)其進(jìn)行潤(rùn)洗。且沖洗后需倒置于濾紙上晾干在使用，不可馬上使用。

檢測(cè)時(shí)所用到的移液槍（移液管），必須貼上專用標(biāo)簽，防止因?yàn)榻徊媸褂脧亩斐蓹z測(cè)污染；試劑一旦吸出就不能再放回試劑瓶中，這樣會(huì)造成試劑受到污染。

5 結(jié)束語(yǔ)

綜上所述，酶抑制分光光度法與傳統(tǒng)儀器分析方法相比，存在以下缺點(diǎn)：檢測(cè)精度相對(duì)較低，僅能檢測(cè)單一項(xiàng)目，只有有機(jī)磷以及氨基甲酸酯兩類農(nóng)藥可進(jìn)行檢測(cè)。但這種方法操作簡(jiǎn)便、檢測(cè)快速、成本低廉，并且可以對(duì)大規(guī)模的樣品進(jìn)行初步篩選，并在特定環(huán)境下對(duì)農(nóng)產(chǎn)品的質(zhì)量安全進(jìn)行有效的監(jiān)督管理。所以，具體的實(shí)踐操作時(shí)，應(yīng)最大可能地減少外部因素對(duì)其產(chǎn)生的影響，以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確率。因此，將農(nóng)藥殘留檢測(cè)的酶抑制分光光度法進(jìn)行推廣，并將其作為市場(chǎng)準(zhǔn)入門檻有一定的意義。