尚慶文，于盱，梁呈元，亓希武，房海靈，巢建國(guó)，李維林

1.江蘇省中醫(yī)院，江蘇 南京 210029；2.南京中醫(yī)藥大學(xué)，江蘇 南京 210023；3.江蘇省中國(guó)科學(xué)院植物研究所，江蘇 南京 210014

金銀花又稱忍冬LonicerajaponicaThunb.，為忍冬科忍冬屬植物，花初開(kāi)時(shí)為白色，后變?yōu)榻瘘S色，故稱金銀花[1]。金銀花藥用歷史悠久，始載于《名醫(yī)別錄》，列為上品，是國(guó)家中醫(yī)藥管理局確定的38種名貴中藥材之一，后來(lái)又被確定為藥食兼用中藥材[2-3]。金銀花主要以其干燥的花蕾入藥，具有清熱解毒、涼散風(fēng)熱之功效，用于治療外感風(fēng)熱或溫病初起、熱毒下痢、肺熱咳嗽等[4]。金銀花臨床應(yīng)用非常廣泛，據(jù)統(tǒng)計(jì)有超過(guò)500種中藥制劑中含有金銀花[5]。藥理學(xué)研究表明金銀花提取物具有包括抗氧化、抗菌、抗炎癥、抗病毒、抗癌、保護(hù)肝臟、抗血管生成和鎮(zhèn)痛等多種重要的藥理活性[6-7]。金銀花產(chǎn)地、采收時(shí)間、加工方法、運(yùn)輸貯藏過(guò)程等對(duì)藥材品質(zhì)形成都起著關(guān)鍵性的作用。傳統(tǒng)的金銀花加工方法主要有自然曬干、陰干、烘房烘干、微波殺青烘干和滾筒殺青烘干等。雖然業(yè)內(nèi)人士對(duì)各種方法無(wú)統(tǒng)一的觀點(diǎn)，但對(duì)“殺青”的共識(shí)度較高，如胡璇等[8]認(rèn)為滾筒殺青烘干法是適合四倍體金銀花的新型干燥方法；王永香等[9]考察了5種干燥方法，認(rèn)為其中以微波殺青烘干和滾筒殺青烘干法中金銀花藥材中指標(biāo)成分含量最高。宋健等[10]研究結(jié)果表明殺青烘干法中金銀花綠原酸含量比曬干和陰干方法分別高12.8%和24.9%，是最佳的產(chǎn)地加工方法。但近年來(lái)隨著人們對(duì)養(yǎng)生的要求越來(lái)越高，氨基酸的含量也是評(píng)價(jià)金銀花營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的主要指標(biāo)之一，但氨基酸含量受殺青處理方法的影響較大，如何有效快速地處理金銀花是目前中藥產(chǎn)地加工的一個(gè)重要問(wèn)題。本研究經(jīng)過(guò)對(duì)引種于江蘇的不同品種、采收期金銀花的主要藥效成分含量影響的系統(tǒng)研究基礎(chǔ)上測(cè)定了不同加工方法對(duì)同一品種、產(chǎn)地金銀花藥效成分的影響，為引種栽培采收后的金銀花加工方法的確定提供一定參考。

1 受試藥材和方法

1.1 受試藥材與儀器

二年生忍冬，種植于江蘇省中國(guó)科學(xué)院種質(zhì)資源圃內(nèi)。于5月份采收金銀花大白期花蕾。Dionex Ultimate 3000超高效液相色譜儀(美國(guó) Thermo scientific)；Kq-300DB型數(shù)控超聲儀(昆山市超聲儀器有限公司)；BP210D型電子天平(北京賽多利斯儀器有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 干燥方法及折干比 微波殺青低溫干燥：將鮮花薄攤于微波爐內(nèi)，微波殺青1～2 min，放置室溫后于烘箱中55 ℃低溫至全干。每次10 g，重復(fù)10次。

低溫烘干：將鮮花薄攤于烘箱中，55 ℃低溫至全干。每次10 g，重復(fù)10次。

微波殺青高溫干燥：將鮮花薄攤于微波爐內(nèi)，高溫下殺青1～2 min，放置室溫后于烘箱中105 ℃高溫烘至全干。每次10 g，重復(fù)10次。

高溫烘干：將鮮花薄攤于烘箱中，105 ℃至全干。每次10 g，重復(fù)10次。

高溫殺青后低溫烘干：將鮮花薄攤于烘箱中，105 ℃殺青2～3 min，55 ℃低溫至全干。每次10 g，重復(fù)10次。

曬干：選擇多日晴好天氣，將鮮花采回后，松散地薄攤于竹框中曝曬。每次10 g，重復(fù)10次。

記錄所有干燥方法項(xiàng)下干燥后的顏色、質(zhì)地及折干比(獲得1 kg的干燥藥材所耗新鮮金銀花的重量)。

1.2.2 綠原酸含量測(cè)定方法 對(duì)照品溶液制備：精密稱取綠原酸對(duì)照品3.4 mg，置于5 mL棕色量瓶中，加50%甲醇制成0.68 mg·mL-1濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液[4]。

樣品溶液制備：精密稱取金銀花藥材細(xì)粉(40目)0.2 g，置具塞錐形瓶中，精密加入 50%甲醇25 mL，稱定重量，超聲處理(功率250 W，頻率35 kHz)30 min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，待測(cè)。

1.2.3 木犀草苷含量測(cè)定方法 對(duì)照品溶液制備：精密稱區(qū)木犀草苷對(duì)照品2 mg，置于5 mL棕色量瓶中，加入70%乙醇制成標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

樣品溶液制備：取金銀花粉末1 g，加入70%乙醇25 mL，超聲1 h(功率250 W，頻率33 kHz)放冷，再稱定重量，用70%乙醇補(bǔ)足減失的重量，取續(xù)濾液10 mL，回收溶劑至干，殘?jiān)?0%乙醇溶解，轉(zhuǎn)移至5 mL容量瓶中，定容待測(cè)[4，11]。

1.2.4 色譜條件 綠原酸含量測(cè)定色譜條件：在戴安3000型高效液相色譜儀上，選用Welch LP-C18 4.6 mm×150 mm柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)，流動(dòng)相為乙腈-0.4%磷酸溶液(13∶87)，臨用前以 0.45 μm 微孔濾膜過(guò)濾并經(jīng)超聲脫氣處理；流速1 mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng) 327 nm；理論塔板數(shù)按綠原酸計(jì)算不低于1000。

木犀草苷含量測(cè)定色譜條件：在戴安3000型高效液相色譜儀上，選用Welch LP-C184.6 mm×150 mm柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)，流動(dòng)相為乙腈(流動(dòng)相A)：0.5%磷酸水(流動(dòng)相B)梯度洗脫條件見(jiàn)表1，檢測(cè)波長(zhǎng)350 nm，流速1.0 mL·min-1，進(jìn)樣量為20 μL，柱溫25 ℃。以木犀草苷為對(duì)照品，峰面積外標(biāo)法定量。

表1 木犀草苷液相色譜梯度洗脫條件

1.2.5 氨基酸含量測(cè)定 采用GB/T 8314—2002茶-游離氨基酸的測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定[12]。稱取“1.2.2綠原酸含量測(cè)定方法”項(xiàng)下的干燥金銀花粉末，精確至0.1 mg，置于干燥的錐形瓶，加50 mL乙酸溶解，加2滴結(jié)晶紫指示液，用高氯酸標(biāo)準(zhǔn)滴定業(yè)滴定至溶液呈藍(lán)綠色，同期進(jìn)行空白試驗(yàn)。

1.2.6 金銀花的檢查項(xiàng)目 采用2015版《中華人民共和國(guó)藥典》的方法[4]，檢測(cè)水浸出物、酸不溶性灰分和總灰分。

1.2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 將所有數(shù)據(jù)輸入SPSS 19.0軟件包中，組間計(jì)量資料采用“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”標(biāo)識(shí)，比較采用方差分析，組內(nèi)兩兩比較采用q檢驗(yàn)，P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同干燥加工方法的金銀花成品外觀性狀比較

微波殺青后低溫干燥及直接低溫干燥技術(shù)所得的金銀花成品外觀性狀較好呈淡黃綠色，高溫殺青后低溫干燥方法次之，高溫烘干易使花顏色變深卷曲，高溫烘干和曬干方法獲得的金銀花成品外觀性狀較差，6種不同的加工方法所得金銀花的折干比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。參見(jiàn)圖1和表2。

2.2 不同干燥加工方法的金銀花成品的綠原酸、木犀草苷和氨基酸含量比較

經(jīng)微波殺青低溫干燥法處理后，綠原酸和木犀草苷的含量較高，氨基酸的含量較低，經(jīng)低溫干燥處理后，氨基酸的含量最高，經(jīng)直接高溫干燥處理后，綠原酸、木犀草苷和氨基酸含量均降低，經(jīng)微波殺青低溫干燥法處理后，綠原酸、木犀草苷和氨基酸含量之和最高(P<0.05)。參見(jiàn)圖2～圖6和表3。

圖1 不同干燥方式對(duì)金銀花外觀性狀的影響

表2 不同的加工方法所得金銀花成品的外觀性狀(n=10)

圖2 綠原酸(A)、木犀草苷(B)對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖3 綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品高效液相色譜圖

圖4 木犀草苷標(biāo)準(zhǔn)品高效液相色譜圖

圖5 綠原酸樣品高效液相色譜圖

圖6 木犀草苷樣品高效液相色譜圖

表3 不同加工方法的金銀花中綠原酸、木犀草苷和氨基酸含量g/100 g

注：與微波殺青低溫干燥比，1)P<0.05；與低溫干燥比，2)P<0.05；與微波殺青高溫干燥比，3)P<0.05；與高溫殺青低溫干燥比，4)P<0.05；與高溫直接干燥比，5)P<0.05。

2.3 不同干燥加工方法的金銀花成品的水浸出物、酸不溶性灰分和總灰分比較

6種不同的加工方法的水浸出物和酸不溶性灰分差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，微波殺青低溫干燥的總灰分較低(P<0.05)。參見(jiàn)表4。

表4 不同干燥加工方法的金銀花成品的水浸出物、酸不溶性灰分和總灰分

注：與微波殺青低溫干燥比，1)P<0.05，與低溫干燥比，2)P<0.05，與微波殺青高溫干燥比，3)P<0.05，與高溫殺青低溫干燥比，4)P<0.05，與高溫直接干燥比，5)P<0.05。

3 結(jié)論

金銀花產(chǎn)地初加工是影響其品質(zhì)的重要因素[13-14]，《千金翼方》曾論述：“夫藥采取，不以陰干曝干，雖有藥名，終無(wú)藥實(shí)?！奔凑f(shuō)明加工方法對(duì)藥材品質(zhì)的影響。金銀花中主要有效成分之一也是藥典中指標(biāo)性成分綠原酸，是一種含鄰位酚羥基的有機(jī)酸，易被多酚氧化酶氧化，在高溫下也易分解[15]。2005年版《中華人民共和國(guó)藥典》增加了木犀草苷作為控制金銀花藥材的重要指標(biāo)，與綠原酸類似，木犀草苷結(jié)構(gòu)中也含有多個(gè)酚羥基，對(duì)熱的穩(wěn)定性也較差。近年來(lái)，金銀花中的氨基酸也成為評(píng)估金銀花營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的重要指標(biāo)之一[16-17]。從這三個(gè)方面評(píng)估產(chǎn)地初加工方法具有一定的參考價(jià)值。

本研究表明在同一時(shí)期、產(chǎn)地和品種完全相同的樣品經(jīng)過(guò)不同加工方法處理后其綠原酸含量、木犀草苷和氨基酸的含量均有一定差異。傳統(tǒng)加工方法中曬干、陰干法雖然無(wú)需設(shè)備，成本低，但所需時(shí)間較長(zhǎng)，環(huán)境溫度無(wú)法控制，導(dǎo)致有效成分含量偏低，成色不佳[18-19]；微波殺青處理后再進(jìn)行干燥的方法在烘干前先使多酚氧化酶失活，保證金銀花樣品中綠原酸和木犀草苷含量，而殺青后的低溫干燥能夠保證綠原酸穩(wěn)定性，其成品同時(shí)具有良好的外觀性狀，高溫烘干雖然能夠節(jié)省時(shí)間但外觀性狀差，綠原酸和木犀草苷有效成分含量低。從綠原酸和木犀草苷的含量看，金銀花在2015版的《中華人民共和國(guó)藥典》綠原酸和木犀草苷的含量分別要高于1.5%和0.05%，低溫干燥和微波殺青高溫干燥處理后的綠原酸含量雖然有所降低，但也符合藥典的要求，本課題納入6種處理方法的木犀草苷含量均高于0.05%，也符合藥典的要求。

氨基酸屬于蛋白范疇，對(duì)微波的敏感度較高[20-21]，低溫干燥的影響最小，而經(jīng)微波殺青低溫干燥處理后，但總體上，微波殺青低溫干燥后，金銀花的綠原酸、木犀草苷和氨基酸的總和較高，且根據(jù)藥典的要求，檢測(cè)金銀花成品的水浸出物、酸不溶性灰分和總灰分，微波殺青低溫干燥的處理方法也是最優(yōu)。

綜上所述，本研究結(jié)果認(rèn)為微波干燥技術(shù)可作為大規(guī)模加工金銀花的最佳初加工方法。