尚慶文，于盱，梁呈元，亓希武，房海靈，巢建國，李維林

1.江蘇省中醫(yī)院，江蘇 南京 210029；2.南京中醫(yī)藥大學，江蘇 南京 210023；3.江蘇省中國科學院植物研究所，江蘇 南京 210014

金銀花又稱忍冬LonicerajaponicaThunb.，為忍冬科忍冬屬植物，花初開時為白色，后變?yōu)榻瘘S色，故稱金銀花[1]。金銀花藥用歷史悠久，始載于《名醫(yī)別錄》，列為上品，是國家中醫(yī)藥管理局確定的38種名貴中藥材之一，后來又被確定為藥食兼用中藥材[2-3]。金銀花主要以其干燥的花蕾入藥，具有清熱解毒、涼散風熱之功效，用于治療外感風熱或溫病初起、熱毒下痢、肺熱咳嗽等[4]。金銀花臨床應用非常廣泛，據(jù)統(tǒng)計有超過500種中藥制劑中含有金銀花[5]。藥理學研究表明金銀花提取物具有包括抗氧化、抗菌、抗炎癥、抗病毒、抗癌、保護肝臟、抗血管生成和鎮(zhèn)痛等多種重要的藥理活性[6-7]。金銀花產地、采收時間、加工方法、運輸貯藏過程等對藥材品質形成都起著關鍵性的作用。傳統(tǒng)的金銀花加工方法主要有自然曬干、陰干、烘房烘干、微波殺青烘干和滾筒殺青烘干等。雖然業(yè)內人士對各種方法無統(tǒng)一的觀點，但對“殺青”的共識度較高，如胡璇等[8]認為滾筒殺青烘干法是適合四倍體金銀花的新型干燥方法；王永香等[9]考察了5種干燥方法，認為其中以微波殺青烘干和滾筒殺青烘干法中金銀花藥材中指標成分含量最高。宋健等[10]研究結果表明殺青烘干法中金銀花綠原酸含量比曬干和陰干方法分別高12.8%和24.9%，是最佳的產地加工方法。但近年來隨著人們對養(yǎng)生的要求越來越高，氨基酸的含量也是評價金銀花營養(yǎng)價值的主要指標之一，但氨基酸含量受殺青處理方法的影響較大，如何有效快速地處理金銀花是目前中藥產地加工的一個重要問題。本研究經過對引種于江蘇的不同品種、采收期金銀花的主要藥效成分含量影響的系統(tǒng)研究基礎上測定了不同加工方法對同一品種、產地金銀花藥效成分的影響，為引種栽培采收后的金銀花加工方法的確定提供一定參考。

1 受試藥材和方法

1.1 受試藥材與儀器

二年生忍冬，種植于江蘇省中國科學院種質資源圃內。于5月份采收金銀花大白期花蕾。Dionex Ultimate 3000超高效液相色譜儀(美國 Thermo scientific)；Kq-300DB型數(shù)控超聲儀(昆山市超聲儀器有限公司)；BP210D型電子天平(北京賽多利斯儀器有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 干燥方法及折干比 微波殺青低溫干燥：將鮮花薄攤于微波爐內，微波殺青1～2 min，放置室溫后于烘箱中55 ℃低溫至全干。每次10 g，重復10次。

低溫烘干：將鮮花薄攤于烘箱中，55 ℃低溫至全干。每次10 g，重復10次。

微波殺青高溫干燥：將鮮花薄攤于微波爐內，高溫下殺青1～2 min，放置室溫后于烘箱中105 ℃高溫烘至全干。每次10 g，重復10次。

高溫烘干：將鮮花薄攤于烘箱中，105 ℃至全干。每次10 g，重復10次。

高溫殺青后低溫烘干：將鮮花薄攤于烘箱中，105 ℃殺青2～3 min，55 ℃低溫至全干。每次10 g，重復10次。

曬干：選擇多日晴好天氣，將鮮花采回后，松散地薄攤于竹框中曝曬。每次10 g，重復10次。

記錄所有干燥方法項下干燥后的顏色、質地及折干比(獲得1 kg的干燥藥材所耗新鮮金銀花的重量)。

1.2.2 綠原酸含量測定方法 對照品溶液制備：精密稱取綠原酸對照品3.4 mg，置于5 mL棕色量瓶中，加50%甲醇制成0.68 mg·mL-1濃度的標準品溶液[4]。

樣品溶液制備：精密稱取金銀花藥材細粉(40目)0.2 g，置具塞錐形瓶中，精密加入 50%甲醇25 mL，稱定重量，超聲處理(功率250 W，頻率35 kHz)30 min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，待測。

1.2.3 木犀草苷含量測定方法 對照品溶液制備：精密稱區(qū)木犀草苷對照品2 mg，置于5 mL棕色量瓶中，加入70%乙醇制成標準品溶液。

樣品溶液制備：取金銀花粉末1 g，加入70%乙醇25 mL，超聲1 h(功率250 W，頻率33 kHz)放冷，再稱定重量，用70%乙醇補足減失的重量，取續(xù)濾液10 mL，回收溶劑至干，殘渣用70%乙醇溶解，轉移至5 mL容量瓶中，定容待測[4，11]。

1.2.4 色譜條件 綠原酸含量測定色譜條件：在戴安3000型高效液相色譜儀上，選用Welch LP-C18 4.6 mm×150 mm柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)，流動相為乙腈-0.4%磷酸溶液(13∶87)，臨用前以 0.45 μm 微孔濾膜過濾并經超聲脫氣處理；流速1 mL·min-1；檢測波長 327 nm；理論塔板數(shù)按綠原酸計算不低于1000。

木犀草苷含量測定色譜條件：在戴安3000型高效液相色譜儀上，選用Welch LP-C184.6 mm×150 mm柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)，流動相為乙腈(流動相A)：0.5%磷酸水(流動相B)梯度洗脫條件見表1，檢測波長350 nm，流速1.0 mL·min-1，進樣量為20 μL，柱溫25 ℃。以木犀草苷為對照品，峰面積外標法定量。

表1 木犀草苷液相色譜梯度洗脫條件

1.2.5 氨基酸含量測定 采用GB/T 8314—2002茶-游離氨基酸的測定方法進行測定[12]。稱取“1.2.2綠原酸含量測定方法”項下的干燥金銀花粉末，精確至0.1 mg，置于干燥的錐形瓶，加50 mL乙酸溶解，加2滴結晶紫指示液，用高氯酸標準滴定業(yè)滴定至溶液呈藍綠色，同期進行空白試驗。

1.2.6 金銀花的檢查項目 采用2015版《中華人民共和國藥典》的方法[4]，檢測水浸出物、酸不溶性灰分和總灰分。

1.2.7 統(tǒng)計學處理 將所有數(shù)據(jù)輸入SPSS 19.0軟件包中，組間計量資料采用“均數(shù)±標準差”標識，比較采用方差分析，組內兩兩比較采用q檢驗，P<0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果與分析

2.1 不同干燥加工方法的金銀花成品外觀性狀比較

微波殺青后低溫干燥及直接低溫干燥技術所得的金銀花成品外觀性狀較好呈淡黃綠色，高溫殺青后低溫干燥方法次之，高溫烘干易使花顏色變深卷曲，高溫烘干和曬干方法獲得的金銀花成品外觀性狀較差，6種不同的加工方法所得金銀花的折干比差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。參見圖1和表2。

2.2 不同干燥加工方法的金銀花成品的綠原酸、木犀草苷和氨基酸含量比較

經微波殺青低溫干燥法處理后，綠原酸和木犀草苷的含量較高，氨基酸的含量較低，經低溫干燥處理后，氨基酸的含量最高，經直接高溫干燥處理后，綠原酸、木犀草苷和氨基酸含量均降低，經微波殺青低溫干燥法處理后，綠原酸、木犀草苷和氨基酸含量之和最高(P<0.05)。參見圖2～圖6和表3。

圖1 不同干燥方式對金銀花外觀性狀的影響

表2 不同的加工方法所得金銀花成品的外觀性狀(n=10)

圖2 綠原酸(A)、木犀草苷(B)對照品標準曲線

圖3 綠原酸標準品高效液相色譜圖

圖4 木犀草苷標準品高效液相色譜圖

圖5 綠原酸樣品高效液相色譜圖

圖6 木犀草苷樣品高效液相色譜圖

表3 不同加工方法的金銀花中綠原酸、木犀草苷和氨基酸含量g/100 g

注：與微波殺青低溫干燥比，1)P<0.05；與低溫干燥比，2)P<0.05；與微波殺青高溫干燥比，3)P<0.05；與高溫殺青低溫干燥比，4)P<0.05；與高溫直接干燥比，5)P<0.05。

2.3 不同干燥加工方法的金銀花成品的水浸出物、酸不溶性灰分和總灰分比較

6種不同的加工方法的水浸出物和酸不溶性灰分差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，微波殺青低溫干燥的總灰分較低(P<0.05)。參見表4。

表4 不同干燥加工方法的金銀花成品的水浸出物、酸不溶性灰分和總灰分

注：與微波殺青低溫干燥比，1)P<0.05，與低溫干燥比，2)P<0.05，與微波殺青高溫干燥比，3)P<0.05，與高溫殺青低溫干燥比，4)P<0.05，與高溫直接干燥比，5)P<0.05。

3 結論

金銀花產地初加工是影響其品質的重要因素[13-14]，《千金翼方》曾論述：“夫藥采取，不以陰干曝干，雖有藥名，終無藥實?！奔凑f明加工方法對藥材品質的影響。金銀花中主要有效成分之一也是藥典中指標性成分綠原酸，是一種含鄰位酚羥基的有機酸，易被多酚氧化酶氧化，在高溫下也易分解[15]。2005年版《中華人民共和國藥典》增加了木犀草苷作為控制金銀花藥材的重要指標，與綠原酸類似，木犀草苷結構中也含有多個酚羥基，對熱的穩(wěn)定性也較差。近年來，金銀花中的氨基酸也成為評估金銀花營養(yǎng)價值的重要指標之一[16-17]。從這三個方面評估產地初加工方法具有一定的參考價值。

本研究表明在同一時期、產地和品種完全相同的樣品經過不同加工方法處理后其綠原酸含量、木犀草苷和氨基酸的含量均有一定差異。傳統(tǒng)加工方法中曬干、陰干法雖然無需設備，成本低，但所需時間較長，環(huán)境溫度無法控制，導致有效成分含量偏低，成色不佳[18-19]；微波殺青處理后再進行干燥的方法在烘干前先使多酚氧化酶失活，保證金銀花樣品中綠原酸和木犀草苷含量，而殺青后的低溫干燥能夠保證綠原酸穩(wěn)定性，其成品同時具有良好的外觀性狀，高溫烘干雖然能夠節(jié)省時間但外觀性狀差，綠原酸和木犀草苷有效成分含量低。從綠原酸和木犀草苷的含量看，金銀花在2015版的《中華人民共和國藥典》綠原酸和木犀草苷的含量分別要高于1.5%和0.05%，低溫干燥和微波殺青高溫干燥處理后的綠原酸含量雖然有所降低，但也符合藥典的要求，本課題納入6種處理方法的木犀草苷含量均高于0.05%，也符合藥典的要求。

氨基酸屬于蛋白范疇，對微波的敏感度較高[20-21]，低溫干燥的影響最小，而經微波殺青低溫干燥處理后，但總體上，微波殺青低溫干燥后，金銀花的綠原酸、木犀草苷和氨基酸的總和較高，且根據(jù)藥典的要求，檢測金銀花成品的水浸出物、酸不溶性灰分和總灰分，微波殺青低溫干燥的處理方法也是最優(yōu)。

綜上所述，本研究結果認為微波干燥技術可作為大規(guī)模加工金銀花的最佳初加工方法。