李勇，楊小芳，張曉云，王蓉，丁萬隆*

1.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 藥用植物研究所，北京100193；2.中國中醫(yī)科學(xué)院 中藥研究所，北京 100700

人參PanaxginsengC.A.Meyer為五加科Araliaceae人參屬Panax多年生藥用植物，我國傳統(tǒng)名貴中藥材[1]。由鏈格孢菌AlternariapanaxWhetz引起的黑斑病是人參主要病害之一[2]。人參黑斑病造成葉片早期脫落、植株枯萎、不結(jié)實(shí)、參根和參籽減產(chǎn)，常年發(fā)病率20%～30%，嚴(yán)重地塊發(fā)病率超過90%[3]。人參病害防治目前仍主要依賴化學(xué)殺菌劑。迄今，農(nóng)業(yè)部已登記備案可用于人參病害防治的殺菌劑共計(jì)18種(http：//www.chinapesticide.gov.cn)，其中嘧菌酯、醚菌酯、異菌脲、代森錳鋅等9種可用于人參黑斑病防治[4]。

中藥材人參農(nóng)藥殘留問題較為突出，參農(nóng)盲目選擇殺菌劑，超劑量、超頻次用藥是導(dǎo)致人參農(nóng)殘超標(biāo)的根源[5-6]。開展低毒、低殘留化學(xué)殺菌劑篩選及其降解規(guī)律研究，擴(kuò)大殺菌劑的可選范圍，降低每種殺菌劑的使用頻次和累計(jì)用量，結(jié)合微生物殺菌劑的使用，將有助于人參農(nóng)殘超標(biāo)問題的解決。為此，本試驗(yàn)選取已在農(nóng)作物黑斑病防治上完成農(nóng)藥登記的4種殺菌劑，室內(nèi)開展人參黑斑菌抑菌作用研究，為人參黑斑病田間防治提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

致病菌：人參黑斑菌AlternariapanaxWhetz，由

吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)中藥材學(xué)院提供，中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所植保室保存。

殺菌劑：共計(jì)9種。其中嘧菌酯、苯醚甲環(huán)唑、代森錳鋅、多菌靈等5種殺菌劑已在人參病害防治上農(nóng)藥登記，在此作為對(duì)照；其余4種殺菌劑已在農(nóng)作物病害防治上完成農(nóng)藥登記，但尚未在人參病害防治上登記(表1)。

表1 供試化學(xué)殺菌劑

注：SC-懸浮劑；WP-可濕性粉劑；WG-水分散粒劑；?-已在人參病害防治上農(nóng)藥登記。

1.2 病菌活化及菌餅制備

從斜面培養(yǎng)基挑取少量菌絲接種于PDA平板中心，25 ℃恒溫倒置培養(yǎng)4 d。再從菌落邊緣挑取少量菌絲重新接種到PDA培養(yǎng)基，25 ℃恒溫倒置培養(yǎng)7 d。用φ 5 mm打孔器在靠近菌落邊緣處打取菌餅，用于殺菌劑抑菌活性檢測(cè)。

1.3 含藥平板制備

將供試藥劑梯度稀釋成10 000、1000、100、10 μg·mL-1懸浮液，待滅菌后PDA培養(yǎng)基冷卻至50 ℃～55 ℃時(shí)，將殺菌劑稀釋液與PDA培養(yǎng)基按1∶99充分混勻后制成含藥平板，加等量無菌水作為空白對(duì)照。每種處理4～6次重復(fù)。

1.4 抑菌活性測(cè)定

采用生長(zhǎng)速率法測(cè)定殺菌劑的抑菌活性。將病菌接種于含藥平板中心，25 ℃恒溫倒置培養(yǎng)6 d后，十字交叉法測(cè)量菌落直徑，并根據(jù)公式計(jì)算抑菌率：

(1)

將抑菌率換算成的機(jī)率值作為變量‘Y’，質(zhì)量濃度轉(zhuǎn)換成質(zhì)量濃度對(duì)數(shù)作為自變量‘X’，求毒力回歸方程Y=bX+a，再根據(jù)公式計(jì)算殺菌劑EC50值。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析

Excel 2007用于試驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1供試殺菌劑對(duì)人參黑斑菌的抑菌效果

由表2可知，供試殺菌劑中，新益甲托、多菌靈和金萬霉靈對(duì)人參黑斑菌的抑菌效果最佳，100 μg·mL-1時(shí)病菌抑制率達(dá)100%，10 μg·mL-1時(shí)抑制率為71.8%～100%。代森錳鋅、世高、氟菌唑、阿西米達(dá)和安泰生對(duì)人參黑斑菌也有抑制作用，100 μg·mL-1時(shí)病菌抑制率為47.3%～84.3%，10 μg·mL-1時(shí)抑制率為19.2%～51.5%。其余供試殺菌劑對(duì)人參黑斑菌的抑制效果欠佳。

2.2 供試殺菌劑對(duì)人參黑斑菌的毒力

根據(jù)毒力回歸方程，求得供試殺菌劑的EC50值如表3所示。多菌靈、金萬霉靈和新益甲托對(duì)人參黑斑菌的毒力最高，EC50值分別為199.5、181.97和96.83 μg·mL-1；其次為世高、代森錳鋅和阿米西達(dá)，EC50值分別為1 258.9、2 041.7和3162.3 μg·mL-1。其余殺菌劑的EC50值均偏高。

表2 供試殺菌劑對(duì)人參黑斑菌的抑菌效果

注：?表示正在人參病害防治上農(nóng)藥登記；標(biāo)題行不同數(shù)值代表菌劑濃度(mg·L-1)；同行不含相同字母表示在P<0.05水平差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表3 供試殺菌劑對(duì)人參黑斑菌的毒力檢測(cè)結(jié)果

3 討論

化學(xué)殺菌劑濫用是導(dǎo)致人參農(nóng)殘超標(biāo)的根源。篩選高效、低毒、低殘留化學(xué)殺菌劑，與環(huán)境友好的微生物殺菌劑配合使用，是降低人參農(nóng)藥殘留，確保人參產(chǎn)量和品質(zhì)的有效途徑。本研究對(duì)9種已登記備案的高效低毒殺菌劑開展人參黑斑菌室內(nèi)抑菌活性測(cè)定發(fā)現(xiàn)，多菌靈、金萬霉靈、世高、代森錳鋅和阿米西達(dá)均對(duì)人參黑斑病有較好抑菌效果，這與前人研究報(bào)道相符[7-9]。新益甲托盡管對(duì)人參黑斑菌有理想的抑菌效果，但其尚未在人參病害上登記備案；多菌靈雖在人參病害上有登記，但防治對(duì)象為人參銹腐病和人參灰霉病。因此，需深入開展殺菌劑田間防效及農(nóng)藥降解動(dòng)態(tài)等研究，以最終確認(rèn)其用于防治人參黑斑病的可行性。

另據(jù)研究報(bào)道，啶菌惡唑、氟硅唑、嘧霉胺對(duì)人參黑斑菌也有較好的田間防病效果[10]。此外，還從人參根際土壤、根、葉中分離到多株對(duì)人參黑斑菌有抑菌活性的生防菌株[3，11-13]。上述研究結(jié)果更是拓寬了人參黑斑病防治的可選范圍。因此，一方面應(yīng)加快促成上述有較高毒力的化學(xué)殺菌劑在人參黑斑病防治上的合法化使用，將其與已登記殺菌劑輪換使用，盡量降低特定殺菌劑的使用頻次和累積用量；另外還應(yīng)加快人參黑斑病專用生防菌劑研發(fā)進(jìn)度，將不同類型殺菌劑的組合使用，確保人參產(chǎn)量及品質(zhì)前提下，有效降低人參農(nóng)藥殘留及病菌抗(耐)藥性風(fēng)險(xiǎn)。