田明明，高洪蓮，孫大康，孟瑋

濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院臨床醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室，山東濱州 250063

隨著生活節(jié)奏加快、生活壓力增大及環(huán)境污染危害，目前不孕不育癥患者有逐年增多的趨勢(shì)，全球育齡夫婦中約有15%不育，其中男性因素約占50%[1]。引起男性不育的病因有很多，包括感染、免疫功能異常、精索靜脈曲張、染色體異常等[2]。男性不育常伴隨著精子數(shù)量減少，國(guó)內(nèi)外學(xué)者已對(duì)其進(jìn)行了大量相關(guān)研究。由遺傳缺陷引起的精子發(fā)生障礙約占男性不育因素的30%。Y染色體長(zhǎng)臂無精子癥因子（azoospermia factor,AZF）微缺失是導(dǎo)致男性生精障礙主要的遺傳學(xué)因素之一[3-4]。2015年8月—2017年12月間該研究對(duì)黃河三角洲地區(qū)男性不育患者Y染色體AZF微缺失情況進(jìn)行分析，以了解AZF微缺失與男性不育的關(guān)系，為臨床的診斷和治療提供依據(jù)，報(bào)道如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

該研究收集因男性無精子癥、少精子癥不育就診于該院的328例患者及80例精液無異常患者，進(jìn)行外周血Y染色體AZF微缺失檢查，年齡22～55歲。無精及嚴(yán)重少精癥納入標(biāo)準(zhǔn)：染色體核型正常，病因診斷為Y染色體微缺失，且參照WHO標(biāo)準(zhǔn)，無精癥患者為連續(xù)3次精液常規(guī)檢查，均未發(fā)現(xiàn)精子，少精癥為精子密度＜20×109/L,嚴(yán)重少精癥為精子密度＜5×109/L。在患者填寫知情同意書后，采集EDTA抗凝血5 mL。

1.2 方法

Y染色體微缺失檢查：采用北京愛普益生物科技有限公司AZF區(qū)微缺失核酸檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針法）。應(yīng)用PCR及熒光標(biāo)記探針技術(shù)，快速檢測(cè)Y染色體 AZF區(qū)的 8個(gè) STS位點(diǎn)：AZFa為 sY84、sY86；AZFb 為 sY127、sY134；AZFc 為 sY254、sY255；AZFd為sY145、sY152。對(duì)每個(gè)待檢樣品進(jìn)行4個(gè)（分別為 A、B、C、D）三重 PCR 反應(yīng)，正常男性、女性為對(duì)照組。通過擴(kuò)增曲線直接觀察結(jié)果。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法

數(shù)據(jù)采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析，計(jì)數(shù)資料采用百分比（%）表示，進(jìn)行 χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

在328例男性不育患者中，檢出Y染色體AZF微缺失26例，缺失率為7.93%（26/328）；無精癥患者缺失率為14.75%（18/122）；嚴(yán)重少精癥患者缺失率為3.88%（8/206）；兩組Y染色體AZF微缺失率，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＞0.05)。最常見缺失類型為僅AZFc缺失，占38.46%（10/26）。正常對(duì)照組均未發(fā)現(xiàn)Y染色體微缺失。

所檢出的26例Y染色體微缺失分為以下8類：AZFa、AZFb、AZFc、AZFa+c、AZFa+d、AZFb+c、AZFb+d、AZFb+c+d缺失。其中AZFa缺失2例（7.69%）；AZFb缺失 4例（15.38%）；AZFc缺失 10例（38.46%）；AZFa+c缺失 1例（3.85%）；AZFa+d缺失 2例（7.69%）；AZFb+c缺失 4例 （15.38%）；AZFb+d缺失 1例（3.85%）；AZFb+c+d 缺失 2 例（7.69%）；sY254、sY255為缺失率最高的位點(diǎn)（65.38%，17/26），其次是sY134（42.31%，11/26）、sY127（30.77%，8/26）。

3 討論

因研究方法、研究人群、患者納入標(biāo)準(zhǔn)及STS位點(diǎn)選擇等的不同，各地區(qū)報(bào)道的男性不育患者Y染色體 AZF微缺失發(fā)生率從0.7%～55%不等[5-7]。該文檢測(cè)的328例男性不育患者中，Y染色體微缺失發(fā)生率為7.93%，其中122例無精癥和206例嚴(yán)重少精癥患者AZF缺失發(fā)生率分別為14.75%、3.88%。這與Zhang等[8]發(fā)現(xiàn)的無精癥患者AZF缺失率10%～15%一致，嚴(yán)重少精癥患者缺失率與Lin等[9]報(bào)道的低于5%一致。該研究最常見缺失類型為僅AZFc缺失，最常見缺失模式為sY254+sY255，這與其他研究者的報(bào)道基本一致。

AZF各區(qū)域缺失臨床表現(xiàn)差異較大，檢測(cè)結(jié)果可指導(dǎo)后續(xù)治療，對(duì)于有AZFa區(qū)域位點(diǎn)缺失（如該研究中缺失模型為AZFa、AZFa+c、AZFa+d）的患者，缺失后果最嚴(yán)重，通常表現(xiàn)為唯支持細(xì)胞綜合征，即SCO綜合征，同時(shí)伴有睪丸體積縮小，臨床表現(xiàn)無精子癥，目前對(duì)SCO綜合征沒有有效的治療方案，不建議行睪丸穿刺。對(duì)于有AZFb區(qū)域位點(diǎn)缺失（如該研究中 AZFb、AZFb+c、AZFb+d、AZFb+c+d） 的患者，睪丸組織學(xué)特征常表現(xiàn)為SCO綜合征或是生精阻滯（減數(shù)分裂后生精上皮細(xì)胞缺失，生精過程被阻滯在精母細(xì)胞階段，無精子生成），此類患者也不宜行睪丸穿刺。AZFc缺失的表型多樣，通常此類患者殘存精子生成能力，可表現(xiàn)出無精癥，也可表現(xiàn)出精子數(shù)目正常，但形態(tài)異常，無精癥患者可通過睪丸穿刺獲得精子，并行卵胞漿內(nèi)單精子注射技術(shù)，但是，此類患者的男性子代將成為AZFc區(qū)域位點(diǎn)缺失的攜帶者，而且，AZFc缺失的少精癥患者，精子數(shù)目有進(jìn)行性下降趨勢(shì)，最終發(fā)展為無精癥。因此，精子的遺傳學(xué)異常所帶來的遺傳風(fēng)險(xiǎn)也是需要引起關(guān)注的，很有必要對(duì)無精癥及嚴(yán)重少精癥患者夫婦進(jìn)行遺傳學(xué)檢查，進(jìn)而防止基因缺陷的遺傳。對(duì)于AZFd缺失的患者，臨床表現(xiàn)為輕度少精癥，或精子數(shù)目正常，形態(tài)異常。

Y染色體微缺失的檢測(cè)為男性不育的診斷提供重要依據(jù)。該研究在一定程度上明確了黃河三角洲地區(qū)無精及嚴(yán)重少精癥患者Y染色體微缺失的特點(diǎn)。從而使得臨床上一些原因不明的無精及嚴(yán)重少弱精癥患者明確病因，為臨床診療方案提供依據(jù)。同時(shí)，為防止基因缺陷的遺傳，可通過胚胎植入前遺傳診斷技術(shù)選擇女性胚胎以防止不育患兒的出生。