李雨婷，韓松博，岳子香，謝珂羽，宋井琪，王冬輝，王金玲

（1.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)，吉林 長(zhǎng)春 130118；2.國(guó)藥一心制藥有限公司，吉林 長(zhǎng)春 130031）

藍(lán)靛果別稱(chēng)藍(lán)靛果忍冬、黑瞎子果、羊奶子、山茄子等。在植物分類(lèi)學(xué)上屬忍冬科忍冬屬[1-3]，藍(lán)黑色漿果果實(shí)。藍(lán)靛果中含大量的維生素，如VB、VPP、VC等，其中VPP 含量遠(yuǎn)超于其他水果；藍(lán)靛果含有豐富的營(yíng)養(yǎng)元素，如鈣、鐵、鋅、硒；藍(lán)靛果含有豐富的氨基酸，包括7種人體必需氨基酸[4]；黃酮類(lèi)成分含量也很高[5]，有很高的營(yíng)養(yǎng)保健作用。枸杞是一種食藥用價(jià)值豐富的植物，含有大量胡蘿卜素、多種微量元素及黃酮物質(zhì)，大量研究證明，枸杞多糖可以保肝護(hù)肝，同時(shí)還可以明目補(bǔ)腎、降血糖、降血脂，是市面上最受歡迎的“神仙果”[6-7]。菊花同樣含有豐富的微量元素、氨基酸及黃酮物質(zhì)，其功效為清風(fēng)散熱、平肝明目、解毒去熱[8]。

本試驗(yàn)按照中藥復(fù)方學(xué)的原理[9]，在我國(guó)傳統(tǒng)中藥配方的基礎(chǔ)上[10]，使用高壓脈沖電場(chǎng)提取法，將藍(lán)靛果醇提物、枸杞-菊花水提物混合制備成壓片糖果，并對(duì)其抗氧化性進(jìn)行檢測(cè)，旨在調(diào)配成一種抗氧化、降壓明目藍(lán)靛果菊花枸杞復(fù)合壓片糖果[11]。

1 材料和方法

1.1 材料

藍(lán)靛果，吉林省長(zhǎng)白山采購(gòu)；枸杞、菊花（藥店采購(gòu)）；白砂糖、檸檬酸、檸檬酸鈉、VC、β-胡蘿卜素、VB1、牛磺酸、麥芽糊精、甜菊糖苷、硬脂酸鎂均為市售品。

1.2 儀器與設(shè)備

混合機(jī)（浙江迦南科技有限公司）、壓片機(jī)（北京國(guó)藥龍立）。

1.3 工藝流程

1.3.1 藍(lán)靛果乙醇提取物（LCL）工藝流程 藍(lán)靛果→挑選清洗、搗碎→高壓脈沖電場(chǎng)提取→真空濃縮→真空減壓干燥→粉碎→藍(lán)靛果提取物；提取方法：首先去除碎渣與未成熟的原料，選取新鮮藍(lán)靛果為原料，用水清洗、搗碎后，按照液料比1∶10 加入65%乙醇混勻后，將樣液打入高壓脈沖電場(chǎng)提取裝置中，設(shè)置電場(chǎng)強(qiáng)度15 kV/cm，脈沖數(shù)8個(gè)進(jìn)行提取，所得提取液過(guò)濾后減壓濃縮至相對(duì)密度為1.10～1.15，減壓真空干燥至恒重。

1.3.2 枸杞-菊花水提取物工藝流程 枸杞、菊花→挑選清洗、搗碎→高壓脈沖電場(chǎng)提取→真空濃縮→真空減壓干燥→粉碎→枸杞-菊花混合提取物。提取方法：選取優(yōu)質(zhì)枸杞和菊花為原料，用流水洗凈、搗碎后，按照液料比1∶8 加入超純水混勻，將待測(cè)樣品加入高壓脈沖電場(chǎng)提取裝置中，設(shè)置電場(chǎng)強(qiáng)度15 kV/cm，脈沖數(shù)8個(gè)進(jìn)行提取，所得提取液過(guò)濾后減壓濃縮至相對(duì)密度為1.10～1.15，減壓真空干燥至恒重。

1.4 配方工藝篩選與優(yōu)化

以藍(lán)靛果乙醇提取物、枸杞-菊花水提取物為原料，以硬脂酸鎂為潤(rùn)滑劑，以白砂糖、麥芽糊精為定型劑，采用粉末直接壓片工藝制得具有保健功能的藍(lán)靛果、枸杞-菊花復(fù)合壓片糖果。

1.4.1 藍(lán)靛果、枸杞、菊花最佳混合比例的確定 在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上對(duì)藍(lán)靛果、枸杞、菊花用量進(jìn)行了多因素正交試驗(yàn)，確定3種原料的最佳混合配方，具體因素水平見(jiàn)表1?；旌咸崛∥镉?0 名來(lái)自全國(guó)各地大學(xué)生依據(jù)色澤（20%）、氣味（30%）、口感（30%）、組織狀態(tài)（20%）等感官綜合評(píng)定，評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)（按百分制）見(jiàn)表2。

表1 藍(lán)靛果、枸杞、菊花配方優(yōu)化L9（33）正交試驗(yàn)因素水平

表2 混合物感官評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

1.4.2 輔料配方篩選與優(yōu)化 粉末直接壓片，對(duì)輔料的要求很高，應(yīng)選擇黏合性和可壓性較好的輔料，這樣有利于生產(chǎn)操作和成品的質(zhì)量穩(wěn)定。通過(guò)查閱文獻(xiàn)白砂糖有很好的可壓性，而糊精具有較好的黏合性，且成本低廉。本試驗(yàn)以?xún)?yōu)化得到的藍(lán)靛果、枸杞-菊花混粉為原料，以白砂糖和麥芽糊精為輔料，以壓片糖果的組織形態(tài)、口感、片重差異為考察指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，優(yōu)化篩選出最佳的配方比例，因素水平見(jiàn)表3，感官評(píng)價(jià)同表2。

表3 輔料配方優(yōu)化L9（33）正交試驗(yàn)因素水平

1.4.3 食品添加劑用量的選擇 在最佳原輔料配比的基礎(chǔ)上，設(shè)計(jì)不同的添加比例（表4）。以口感、色澤為評(píng)價(jià)指標(biāo)，對(duì)藍(lán)靛果枸杞壓片糖果片中食品添加劑的用量進(jìn)行篩選。

表4 食品添加劑用量篩選%

1.4.4 混合時(shí)間的篩選 采用優(yōu)化得到的最佳配方，按配方量0.2%加入硬脂酸鎂，以混粉顏色的均勻性為考察指標(biāo)，設(shè)定混合機(jī)轉(zhuǎn)速為12 r/min，分別于混合5，10，15 min 上、中、下3 層進(jìn)行取樣，考察不同混合時(shí)間對(duì)混粉顏色均勻度的影響。上、中、下3 層顏色均一無(wú)色差即確定為最佳混合時(shí)間。同時(shí)采用最佳混合工藝，連續(xù)混合3 批，并對(duì)混粉進(jìn)行壓片。

1.5 藍(lán)靛果、枸杞-菊花壓片抗氧化性測(cè)定

1.5.1 還原能力測(cè)定 取LCL 醇提取物、（壓片糖果）LCL 醇+枸杞菊花水提取物、VC 粉末備用，分別稱(chēng)取0.001，0.002，0.004，0.006，0.008，0.010 g 上述3個(gè)樣品，3 份重復(fù)，溶于10 mL的二甲基亞砜。得樣品濃度梯度為0.1，0.2，0.4，0.6，1.0mg/mL。取1 mL待測(cè)樣液，加入pH值為6.6的磷酸緩沖液和1%鐵氰化鉀溶液各1 mL 混勻，50℃水浴20 min，反應(yīng)完成后加入10%三氯乙酸1 mL 混勻，靜止后精密吸取上清液2 mL，精密加入超純水2 mL[12]與200 μL 0.1%三氯化鐵后靜置10 min，于700 nm 測(cè)OD值，以二甲基亞砜為空白，去離子水為對(duì)照，重復(fù)3次，取均值[13]。

1.5.2 DPPH 自由基清除能力測(cè)定 用DMSO將LCL 醇提取物、（壓片糖果）LCL 醇+枸杞菊花水提取物、VC 粉末分別配成濃度為0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0mg/mL的待測(cè)樣液，取2 mL 樣液于試管中，加入0.2 mmol/L DPPH-無(wú)水乙醇溶液1 mL[14]，混勻，室溫暗處放10 min ，517 nm處測(cè)其吸光值，每樣重復(fù)3次，取均值。并按下列公式計(jì)算DPPH 自由基去除率。

式中：AS為2 mL 樣液+1 mL DPPH-無(wú)水乙醇溶液的樣品OD值；ASB為2 mL 樣液+1 mL 無(wú)水乙醇溶液的樣品對(duì)照組OD值；AC為2 mL DMSO+1 mL DPPH-無(wú)水乙醇溶液的空白組OD值；ACB為2 mL DMSO+1 mL 無(wú)水乙醇溶液的空白對(duì)照組OD值。

1.5.3 ABTS自由基清除能力測(cè)定 ABTS 儲(chǔ)備液：精密吸取等體積的濃度為7.00，2.45 mmol/L的ABTS 溶液、過(guò)硫酸鉀溶液，混合避光靜置過(guò)夜。ABTS 儲(chǔ)備液現(xiàn)用現(xiàn)稀釋47 倍，即OD734為（0.70±0.02）[15]。用DMSO將LCL 醇提取物、（壓片糖果）LCL 醇+枸杞菊花水提取物、VC 粉末配制成濃度梯度為0.05，0.10，0.15，0.20，0.25，0.30mg/mL的待測(cè)樣液，將1 mL ABTS 工作液與500 μL 樣品振蕩混合后避光放置5 min。測(cè)定OD734[16]，每樣重復(fù)3次，取均值，并按下列公式計(jì)算ABTS自由基清除率：

式中：AS為1 mL 樣品液+2 mL ABTS 工作液的樣品OD值；ASB為1mL 樣品+2 mL 無(wú)水乙醇溶液的樣品對(duì)照組OD值；AC為1 mL DMSO+2 mL ABTS工作液的空白組OD值；ACB為1 mL DMSO+2 mL無(wú)水乙醇溶液的空白對(duì)照組OD值。

1.5.4 羥自由基清除率測(cè)定 用DMSO將LCL 醇提取物、（壓片糖果）LCL 醇+枸杞菊花水提取物、VC 粉末配制成濃度梯度為0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0mg/mL的樣液，分別加入濃度為9 mmol/L FeSO4、9 mmol/L水楊酸-乙醇溶液和1.2 mmol/L H2O2各1 mL，水浴鍋37℃反應(yīng)30 min，以去離子水為空白，在510 nm測(cè)吸光度A1[17-18]；去離子水代替H2O2重復(fù)上述操作，測(cè)藍(lán)靛果水提樣品本身的吸光度A2，同時(shí)以水代藍(lán)靛果樣液[19]，測(cè)定吸光度A0。

2 結(jié)果與分析

2.1 藍(lán)靛果、枸杞、菊花最佳混合比例正交試驗(yàn)結(jié)果分析

采用SPSS 19.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析，結(jié)果表明：3個(gè)原料中以藍(lán)靛果影響最大，其次是菊花，枸杞影響最?。ū?）。本試驗(yàn)得到的最優(yōu)組合為藍(lán)靛果為30%、枸杞20%、菊花10%，其混粉的色澤、氣味及口感均為最佳（圖1）。

表5 藍(lán)靛果、枸杞、菊花混合優(yōu)化L9（34）正交試驗(yàn)結(jié)果

圖1 藍(lán)靛果、枸杞-菊花混合比例優(yōu)化方差分析

2.2 壓片糖果輔料配方篩選與優(yōu)化正交試驗(yàn)結(jié)果分析

由表6可知，3個(gè)因素中以藍(lán)靛果枸杞菊花混粉影響最大，其次是麥芽糊精，白砂糖影響最小。本試驗(yàn)得到的最優(yōu)組合為藍(lán)靛果、枸杞、菊花混粉50%、白砂糖35%、麥芽糊精15%，其壓片糖果的組織形態(tài)、口感、片重差異均為最佳（圖2）。

表6 壓片糖果輔料配方優(yōu)化L9（34）正交試驗(yàn)結(jié)果

2.3 食品添加劑用量選擇結(jié)果分析

由表7可知，食品添加劑最佳用量為配方4，即甜菊糖苷2.00%、檸檬酸1.00%、檸檬酸鈉0.40%、VC 1.00%、牛磺酸0.50%、β-胡蘿卜素0.05%、VB10.05%。

2.4 最佳混合時(shí)間的確定

由表8可知，混合機(jī)轉(zhuǎn)速為12 r/min、混合時(shí)間為10，15 min時(shí)，混粉上中下3 層顏色均一，顏色均勻度均符合要求。考慮時(shí)間及成本情況，最佳混合工藝為當(dāng)轉(zhuǎn)速為12 r/min時(shí)，混合10 min。采用最佳混合時(shí)間，連續(xù)混合3 批，并進(jìn)行壓片，壓片糖果外觀及片重差異均符合要求。

2.5 抗氧化結(jié)果

2.5.1 還原性測(cè)定 由圖3可知，壓片糖果與藍(lán)靛果醇提物的還原性隨濃度升高而升高。壓片糖果還原性低于藍(lán)靛果醇提物，且在樣品濃度為0.6mg/mL時(shí)，藍(lán)靛果醇提物還原性高于VC；在濃度為1.0mg/mL時(shí)，藍(lán)靛果、枸杞-菊花壓片糖果的還原性為0.357%。

2.5.2 DPPH 自由基清除率 由圖4可知，壓片糖果與藍(lán)靛果醇提物的DPPH 自由基清除率與濃度呈正相關(guān)，兩者DPPH 自由基清除率在不同濃度下均相近，但都略低于VC 清除率。在濃度為1.0mg/mL時(shí)，壓片糖果DPPH 自由基清除率為49.13%，藍(lán)靛果醇提物DPPH 自由基清除率為64.49%，VC的DPPH 自由基清除率為88.86%。

表7 食品添加劑用量篩選結(jié)果

表8 最佳混合時(shí)間篩選結(jié)果

圖2 壓片糖果輔料配方優(yōu)化方差分析

圖3 還原性測(cè)定

圖4 DPPH 自由基清除率

2.5.3 ABTS自由基清除率 由圖5可知，壓片糖果與藍(lán)靛果醇提物的ABTS自由基清除率與濃度呈正相關(guān)性，且兩者ABTS自由基清除率顯著高于VC，在濃度為1.0mg/mL時(shí)，壓片糖果ABTS自由基清除率為99.09%，藍(lán)靛果醇提物ABTS自由基清除率為99.48%。

圖5 ABTS自由基清除率

2.5.4 羥自由基清除率 由圖6可知，壓片糖果與藍(lán)靛果醇提物的羥自由基清除率隨濃度升高而升高，在濃度為1.0mg/mL時(shí)，兩者羥自由基清除率皆高于VC，此濃度時(shí)壓片糖果羥自由基清除率為87.42%，藍(lán)靛果醇提物羥自由基清除率為90.07%。

3 討論

藍(lán)靛果醇提物具有良好的抗氧化活性，藍(lán)靛果中含有大量的VC及大量黃酮類(lèi)成分，同時(shí)還具有花色苷和大量酚酸，可以很好地吸收氧自由基，提高過(guò)氧離子清除率。王振宇等[20]研究發(fā)現(xiàn)，藍(lán)靛果提取液中含有鞣花酸、樨皮素3-糖苷、槲皮素3-鼠李糖苷、4，5，7-三羥基酮醇3-糖苷、4，5，7-三羥基酮醇衍生物、花青素3-糖苷、花葵素3-糖苷、花青素3-木糖苷、花青素3-糖苷衍生物、二羧酸?；ㄇ嗨?-糖苷衍生物，這些物質(zhì)都具有抗氧化活性。但考慮到味道及口感，本試驗(yàn)中將枸杞及菊花水提物與藍(lán)靛果醇提物混合，提升了壓片糖果的口感，并依舊保持了良好的抗氧化能力。

4 結(jié)論

試驗(yàn)結(jié)果表明，藍(lán)靛果、枸杞-菊花壓片糖果最佳制備工藝為：藍(lán)靛果、枸杞、菊花提取物混合比例為3∶2∶1，處方中添加量為50%、白砂糖為35%、麥芽糊精為15%、甜菊糖苷2.0%、檸檬酸1.0%、檸檬酸鈉0.4%、VC 1.0%、牛磺酸0.5%、β-胡蘿卜素0.05%、VB10.05%、硬脂酸鎂0.2%，12 r/min，混合10 min。以此條件得到的壓片糖果口感好，成品質(zhì)量穩(wěn)定，具有良好氣味，壓片光澤均勻。壓片糖果具有良好的還原能力、DPPH 自由基清除能力、ABTS自由基清除能力及羥自由基清除能力，可以作為一種較有益的壓片糖果使用。本試驗(yàn)為藍(lán)靛果更多的壓片糖果試驗(yàn)提供了理論依據(jù)與試驗(yàn)基礎(chǔ)。