李 芹

（云南省曲靖市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，云南 曲靖 655000）

非洲豬瘟隱患已經(jīng)存在多年，由于未對(duì)我國(guó)造成影響，也一直被人們忽視。這是一種由非洲豬瘟病毒引起的高傳染性的病毒，它起源于非洲，之后蔓延到南美洲、歐洲等地。直至去年8月份傳入中國(guó)，這才使得國(guó)人高度關(guān)注。由于目前尚未研發(fā)出有效的疫苗預(yù)防非洲豬瘟，因此只能通過(guò)撲殺感染非洲豬瘟的豬的方式來(lái)防控。這也對(duì)國(guó)內(nèi)養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大損失，這也是豬肉價(jià)格上漲的原因之一。所以非洲豬瘟病毒檢測(cè)方法的進(jìn)展迫在眉睫，許多專(zhuān)家也是研究出多種方法，但都以失敗告終，故加強(qiáng)該病預(yù)防措施的工作具有重大的現(xiàn)實(shí)意義。

1 最古老的檢測(cè)法—紅細(xì)胞吸附法

早在1960年，Malmquist在觀察病毒感染豬白細(xì)胞的培養(yǎng)物后出現(xiàn)了血紅細(xì)胞吸附的現(xiàn)象，將其應(yīng)用于 ASFV上，發(fā)現(xiàn)了紅細(xì)胞吸附法也就是所謂的HAD法。但是由于當(dāng)時(shí)科技水平的落后，得不到發(fā)展。因此過(guò)了許多年才被廣泛認(rèn)可作為ASFV的鑒定方法。ASFV的分離株大部分具有 HAD的活性，但極少數(shù)的毒株沒(méi)有此活性，稱為NHV（non- haemadsorbing virus）毒株，這類(lèi)毒株大多數(shù)不攜帶病毒。因此在檢測(cè)時(shí)就存在著許多問(wèn)題，且紅細(xì)胞吸附法的檢測(cè)時(shí)間一般為3～10d，所以慢慢地被接下來(lái)的PCR法所代替。

2 非洲豬瘟PCR方法檢測(cè)的進(jìn)展

PCR是指聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，這種方法在檢測(cè)動(dòng)物是否感染ASFV中起到了重要作用。檢測(cè)方法是將病體中病毒 DNA片段通過(guò)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）進(jìn)行擴(kuò)大，直到滿足檢測(cè)需求的量，然后進(jìn)行檢測(cè)，這種方法提到了檢測(cè)效率和檢測(cè)質(zhì)量。PCR法的有點(diǎn)在于它檢測(cè)過(guò)程比較簡(jiǎn)單，檢測(cè)方法也快速并靈敏，這比通常的 ELISA 和 FAT檢測(cè)技術(shù)相比有了不少的提高；但是它也有致命的缺點(diǎn)，他在檢測(cè)時(shí)及其容易產(chǎn)生交叉污染的現(xiàn)象，導(dǎo)致檢測(cè)失靈，并且其儀器價(jià)格也十分昂貴。但是目前PCR檢測(cè)技術(shù)仍然檢測(cè)人員的第一選擇，雖然存在漏洞，但是它可以提供基本的信息，完成基本檢測(cè)。

3 熒光抗體實(shí)驗(yàn)法

相比于PCR方法，熒光抗體法即FAT法的出現(xiàn)更加早，早在1969 年，Bool 等人就率先將FAT法應(yīng)用于ASFV的檢測(cè)上，該試驗(yàn)方法不僅僅用于檢測(cè)ASFV，其最為廣發(fā)的應(yīng)用是對(duì)病毒抗原的檢測(cè)。FAT方法主要有兩個(gè)方面的運(yùn)用，第一，可用于白細(xì)胞培養(yǎng)物進(jìn)行抗原檢測(cè)；第二，可將感染豬瘟的淋巴結(jié)、腎、肺等組織冰凍后切片，然后進(jìn)行觀察，若細(xì)胞漿熒光則為病毒陽(yáng)性。在急性傳染性疾病的檢測(cè)中，F(xiàn)AT的有點(diǎn)十分明顯，高效、敏感性高、價(jià)格低廉。但是對(duì)于一些慢性疾病，它所檢測(cè)的顯著性、敏感性都大幅度降低，可能是由于抗體與靶抗體形成了復(fù)合物，阻斷了與熒光抗體的結(jié)合。所以由于非洲豬瘟是急性傳染病，這種方法依舊可以快速高效地使用，未來(lái)它的發(fā)展也應(yīng)該朝著慢性、亞急性疾病的而方向發(fā)展。

4 探針雜交技術(shù)的出現(xiàn)

基于PCR方法的廣泛運(yùn)用，許多專(zhuān)家將探針雜交技術(shù)與PCR法廣泛聯(lián)系，出現(xiàn)了一種新型方法。該法將樣品在凝膠上分離，然后通過(guò)“影印”的方式轉(zhuǎn)移到固相支持物上，然后在與帶有放射性標(biāo)記或其他標(biāo)記的探針進(jìn)行雜交，通過(guò)放射自顯影或顯色反應(yīng)，判斷樣品中是否有探針同源的分子。這畫(huà)中方法可以有效地排除PCR檢測(cè)過(guò)程中非特異性結(jié)果，操作更加簡(jiǎn)單，檢測(cè)也更加迅速。但是它存在的問(wèn)題是建立難度較高，要求人員的操作水平也比較刻苦，過(guò)程也十分繁瑣。不過(guò)顯然這是PCR方法后有一個(gè)改進(jìn)得不錯(cuò)的方法，這種改進(jìn)鉆研的方法值得國(guó)內(nèi)專(zhuān)家學(xué)習(xí)，早日研制出非洲豬瘟病毒的疫苗。

5 結(jié)語(yǔ)

隨著世界經(jīng)濟(jì)的快速增長(zhǎng)，貿(mào)易全球化也發(fā)展十分迅速。一些具有高傳染性的病毒的跨國(guó)傳染也接連發(fā)生，是國(guó)內(nèi)的養(yǎng)殖業(yè)遭到了沉重的打擊，嚴(yán)重阻礙了我國(guó)養(yǎng)殖業(yè)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，也對(duì)我國(guó)出口貿(mào)易造成了十分嚴(yán)重的影響。非洲豬瘟在去年在中國(guó)被發(fā)現(xiàn)，對(duì)于國(guó)內(nèi)豬的威脅也越來(lái)越大，由于此病毒未研發(fā)出疫苗，我國(guó)專(zhuān)家必須高度警惕，建立快速的ASFV的檢測(cè)室，減少病毒的擴(kuò)散。目前國(guó)內(nèi)檢測(cè)ASFV的方法雖然很多，但是未能從根源上防止病毒的產(chǎn)生，因此對(duì)為感染ASFV病毒的動(dòng)物應(yīng)采取有效的預(yù)防措施。伴隨著免疫學(xué)和生物技術(shù)的發(fā)展，ASFV疫苗的研發(fā)指日可待，非洲豬瘟病毒的防控也將得到進(jìn)展。