孟 瑤， 盧 軍， 楊曉迷， 郝 夢(mèng)， 劉 怡， 姜 林,

(新疆醫(yī)科大學(xué)1中醫(yī)學(xué)院， 烏魯木齊 830011； 2第四臨床醫(yī)學(xué)院藥劑科， 烏魯木齊 830000)

更年期高血壓(Climacterichypertension)是指女性更年期出現(xiàn)血壓升高的情況，主要由于卵巢功能衰退，內(nèi)源性雌激素含量降低導(dǎo)致內(nèi)分泌失調(diào)，自主神經(jīng)功能紊亂引起血壓升高[1]。除了血壓升高外,臨床表現(xiàn)還伴有目眩耳鳴、頭暈頭痛、疲乏失眠、月經(jīng)周期不規(guī)律等[2]。目前主要的治療方法為服用降壓藥物伴雌激素替代療法，但常伴有子宮內(nèi)膜出血或乳腺增生等不良反應(yīng)[3]。桑地更平丸為新疆醫(yī)科大學(xué)第四臨床醫(yī)學(xué)院院內(nèi)制劑，由桑椹、生地黃、羅布麻葉、當(dāng)歸、酸棗仁、玫瑰花等藥材組成，具有補(bǔ)虛潤(rùn)燥、平肝安神的功效[4]，臨床上多用于更年期高血壓的治療。本研究通過建立更年期高血壓大鼠模型，測(cè)定大鼠血清中氧化應(yīng)激指標(biāo)、一氧化氮(NO)含量以及內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)濃度，探討桑地更平丸在改善更年期高血壓方面的藥理機(jī)制，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1 儀器 MULTI-SKAN型酶標(biāo)儀(美國(guó)Thermo Scientific公司)，TDZ5WSF型低速離心機(jī)(鹽城市凱特實(shí)驗(yàn)儀器有限公司)，HC-3518型高速離心機(jī)(長(zhǎng)沙高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)開發(fā)區(qū)湘儀離心機(jī)儀器有限公司)，WELLWASH型洗板機(jī)(北京伯邁科技有限公司)，BL-420S型生物信號(hào)采集系統(tǒng)(成都泰盟軟件有限公司)。

1.1.2 試劑 大鼠血清丙二醛(MDA)測(cè)試盒(武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司，批號(hào)2018052)，大鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒(武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司，批號(hào)20180510)，大鼠血清NO測(cè)試盒 (南京建成生物工程研究所，批號(hào)20180508)，大鼠血清內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)試劑盒 (武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司，批號(hào)XWK68G9E)，大鼠雌激素試劑盒(武漢華美生物工程有限公司，批號(hào)CSB-E07279r)。

1.1.3 藥物 桑地更平丸由新疆醫(yī)科大學(xué)第四臨床醫(yī)學(xué)院藥劑科自制，纈沙坦膠囊(北京諾華制藥有限公司，批號(hào) X2279)。

1.1.4 動(dòng)物 雌性SD大鼠40只，體質(zhì)量(200±20) g，由新疆維吾爾自治區(qū)疾病預(yù)防控制中心提供[許可證號(hào)：SCXK(新)2016-0001]。

1.2方法

1.2.1 藥物制備方法 稱取桑地更平丸，分別配制成濃度為1.08、0.54 g/mL的水溶液；稱取纈沙坦膠囊，配制成濃度為0.001 66 g/mL的水溶液，備用。

1.2.2 模型建立及給藥方法

1.2.2.1 大鼠更年期高血壓模型的建立 隨機(jī)抽取32只雌性SD大鼠腹腔注射10%水合氯醛(0.3 mL/100 g體質(zhì)量)進(jìn)行麻醉，將大鼠腹部絨毛剃除，用碘液對(duì)皮膚進(jìn)行消毒，沿腹部中線將大鼠腹部剖開，用鑷子將腹中組織移開，找出左腎動(dòng)脈并將其單獨(dú)分離，將尖端磨平的4.5號(hào)針頭平行放置左腎動(dòng)脈旁，用4號(hào)手術(shù)縫合線扎緊后抽出針頭，造成大鼠單側(cè)腎動(dòng)脈狹窄。找到位于大鼠腰椎兩側(cè)腎后方的卵巢，用4號(hào)手術(shù)縫合線將卵巢下輸卵管結(jié)扎，切除卵巢，同法切除另一側(cè)卵巢，將組織放回大鼠腹中，逐層進(jìn)行縫合，最后腹腔注射青霉素鈉40萬單位。大鼠術(shù)后正常飲食進(jìn)水，連續(xù)3 d腹腔注射青霉素鈉40萬單位，觀察動(dòng)物狀態(tài)，防止傷口感染[5-6]。

1.2.2.2 大鼠的分組及給藥方法 將建模成功的32只大鼠隨機(jī)分為陽性組(纈沙坦膠囊，0.008 3 g/kg體質(zhì)量)、模型組(蒸餾水，10.0 mL/kg體質(zhì)量)、桑地更平丸高、低劑量組(10.8、5.4 g/kg體質(zhì)量)，剩余8只大鼠為空白組(蒸餾水，10.0 mL/kg體質(zhì)量)，連續(xù)灌胃8 w。

1.2.3 指標(biāo)測(cè)定

1.2.3.1 血壓測(cè)定 稱取大鼠體質(zhì)量，用10%水合氯醛(0.3 mL/100 g體質(zhì)量)對(duì)大鼠進(jìn)行腹腔注射麻醉，仰臥固定在鼠板上，剔除頸部絨毛，將頸部縱向剖開，分離大鼠頸動(dòng)脈，分離長(zhǎng)度為1.0～1.5 cm，將靠近頭部一端的動(dòng)脈結(jié)扎，行頸總動(dòng)脈插管術(shù)，用BL-420s生物信號(hào)采集系統(tǒng)測(cè)定各組大鼠血壓值。

1.2.3.2 血清中雌激素、eNOS、NO、SOD、MDA的測(cè)定 大鼠腹主動(dòng)脈取血，4 000 r/min離心10 min,分離血清，置于-80℃冰箱中保存?zhèn)溆茫丛噭┖姓f明書操作測(cè)定各組大鼠血清中雌激素、eNOS、NO、SOD和MDA的濃度。

2 結(jié)果

2.1各組大鼠血壓值的變化情況與空白組比較，模型組大鼠收縮壓和舒張壓均明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；與模型組比較，桑地更平丸高、低劑量組和陽性組大鼠收縮壓與舒張壓均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05～0.01)，見表1。

表1 各組大鼠血壓值的變化情況

注：與空白組比較，△△P<0.01； 與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。

2.2各組大鼠血清雌激素含量的變化情況與空白組比較，模型組大鼠血清雌激素含量降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與模型組比較，桑地更平丸高、低劑量組大鼠血清雌激素含量均升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表2 各組大鼠血清雌激素含量的變化情況

注： 與空白組比較，△P<0.05； 與模型組比較，*P<0.05。

2.3各組大鼠血清e(cuò)NOS濃度和NO含量的變化情況與空白組比較，模型組大鼠血清e(cuò)NOS濃度下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；NO含量下降，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與模型組比較，陽性組、桑地更平丸高劑量組大鼠血清e(cuò)NOS濃度和NO含量均升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05～0.01)；桑地更平丸低劑量組大鼠血清NO含量升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，eNOS濃度升高，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表3。

表3 各組大鼠血清e(cuò)NOS濃度和NO含量的

注：與空白組比較，△△P<0.01； 與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。

2.4各組大鼠血清SOD和MDA濃度的變化情況與空白組比較，模型組大鼠血清SOD、MDA濃度均升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；與模型組比較，陽性組、桑地更平丸高、低劑量組大鼠血清SOD、MDA濃度有所降低，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表4。

表4 各組大鼠血清SOD和MDA濃度的

注：與空白組比較，△△P<0.01 。

3 討論

更年期高血壓主要指女性患者同時(shí)伴有更年期綜合征和高血壓癥狀，其主要臨床表現(xiàn)為自主神經(jīng)功能紊亂癥候群與促性腺激素分泌增多等[7]。雌激素(Estrongen)主要由雄激素經(jīng)過芳香化酶催化并由卵巢產(chǎn)生，是人體內(nèi)常見的甾體類固醇激素。女性絕經(jīng)后雌激素的缺乏使得雌激素對(duì)心血管保護(hù)作用減弱，這被認(rèn)為是絕經(jīng)期女性患高血壓風(fēng)險(xiǎn)升高的主要原因[8-9]。且雌激素具有抗氧化作用，而雌激素的缺乏，可導(dǎo)致氧化活性氧簇(ROS)增多，從而引起血管收縮，造成高血壓發(fā)病[10]；雌激素還可與雌激素受體結(jié)合通過轉(zhuǎn)錄調(diào)控激活 eNOS 基因的表達(dá)，使 eNOS 活性或蛋白表達(dá)增加，進(jìn)而促進(jìn) NO 釋放，有快速舒張血管的作用[11-12]。

本實(shí)驗(yàn)通過觀察桑地更平丸的降壓療效，進(jìn)而探討桑地更平丸改善更年期高血壓的藥理機(jī)制。結(jié)果顯示,經(jīng)桑地更平丸治療后，更年期高血壓大鼠的血壓有明顯降低，雌激素分泌較治療前增多，eNOS與NO的濃度也有不同程度的升高，但對(duì)SOD和MDA的影響不大。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，桑地更平丸對(duì)更年期高血壓有一定的降壓作用，還可能對(duì)去勢(shì)高血壓大鼠體內(nèi)雌激素含量失衡的狀況有所改善，同時(shí)伴有eNOS、NO不同程度的增高，提示桑地更平丸藥效的發(fā)揮可能通過雌激素改善eNOS/NO信號(hào)，快速激活eNOS的表達(dá)，從而誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞釋放NO，舒張血管保護(hù)內(nèi)皮。在氧化應(yīng)激方面，桑地更平丸對(duì)其影響不明顯,表明本方對(duì)更年期高血壓大鼠氧化應(yīng)激損傷并未起到一定的改善作用。

綜上所述，桑地更平丸具有一定降低更年期高血壓的作用，其降壓機(jī)制可能與增加雌激素分泌，并使NO的生成增多有關(guān)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的結(jié)果為桑地更平丸的新藥開發(fā)提供了一定的研究基礎(chǔ)。