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(1.康美(北京)藥物研究院有限公司，北京 102600；2.康美藥業(yè)股份有限公司，廣東 普寧 515300)

草果為姜科植物草果(Amomumtsao-koCrevostet Lemaire) 的干燥成熟果實(shí)，秋季果實(shí)成熟時(shí)采收，除去雜質(zhì)，曬干或低溫干燥。其味辛，溫，歸脾、胃經(jīng)，具有燥濕溫中、截瘧除痰的功效，可用于寒濕內(nèi)阻、脘腹脹痛、痞滿嘔吐、瘧疾寒熱、瘟疫發(fā)熱的治療[1]。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，草果具有抗氧化[2]、抗菌[3]、抗腫瘤[4-5]、調(diào)節(jié)胃腸功能[6]、抗誘變、防霉等作用。

目前有關(guān)草果的質(zhì)量評(píng)價(jià)研究多集中于對(duì)桉油精等單一成分及總揮發(fā)油的定量測(cè)定上，建立草果揮發(fā)油類成分的特征圖譜，可作為其質(zhì)量全面評(píng)價(jià)研究的基礎(chǔ)，同時(shí)對(duì)不同炮制品進(jìn)行比較研究。

1 儀器與試藥

7890B型氣相色譜儀、7697A型氫火焰離子檢測(cè)器(安捷倫科技有限公司)；毛細(xì)管色譜柱(DB-17，30 m×0.25 mm×0.25 μm、安捷倫科技有限公司)；XPE205型電子分析天平(梅特勒-托利多)；KQ-500DE型(昆山市超聲儀器有限公司)。

乙酸乙酯(分析純、20180310、北京化工廠)；桉油精對(duì)照品(110788-201606、98.4%、中國(guó)食品藥品檢定研究院)。收集主產(chǎn)地云南草果29批、廣西草果8批和亳州市場(chǎng)3批草果，用于草果藥材特征圖譜研究。

草果仁：取凈草果，按照清炒法(《中國(guó)藥典》2015年版四部通則0213)炒至焦黃色并微鼓起，去殼，取仁。姜草果仁：取凈草果仁，按照姜汁炙法(《中國(guó)藥典》2015年版四部通則0213)炒干。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性[7]

火焰離子檢測(cè)器；毛細(xì)管色譜柱(DB-17，柱長(zhǎng)30 m，內(nèi)徑25 mm，交聯(lián)50%二苯基甲基硅氧烷為固定相，涂膜厚度0.25 μm)；進(jìn)樣口溫度250 ℃；檢測(cè)器溫度300 ℃；分流比5∶1。程序升溫如表1所示。

2.2 對(duì)照品溶液制備

取桉油精對(duì)照品適量，精密稱定，加乙酸乙酯制成每1 mL含0.1 mg桉油精的溶液，即得。

2.3 供試品溶液制備

取本品粉末(過三號(hào)篩)約0.5 g，精密稱定，精密加入乙酸乙酯25 mL，稱定重量，超聲處理(功率600 W，頻率40 kHz)30 min，放冷，再稱定重量，用乙酸乙酯補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

表1 程序升溫步驟

2.4 方法學(xué)驗(yàn)證

按照《中國(guó)藥典》2005年版一部中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則的要求，對(duì)上述方法進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證。穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)表明樣品在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好；精密度和重現(xiàn)性試驗(yàn)測(cè)得各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD小于5.0%，說明該方法重復(fù)性良好。

2.5 特征圖譜分析結(jié)果和相似度分析

2.5.1 草果特征圖譜 分別精密吸取對(duì)照提取物溶液與供試品溶液各1 μL，注入氣相色譜儀測(cè)定，記錄色譜圖，即得。39批草果樣品的供試品溶液按上述確定條件進(jìn)樣，記錄色譜圖。利用中藥指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)軟件，采用自動(dòng)匹配法生成共有模式對(duì)照特征圖譜，見圖1、圖2。

數(shù)據(jù)表明，5個(gè)特征峰的相對(duì)保留時(shí)間分別為0.885(峰1)、1(峰2，S)、1.589(峰3)、1.736(峰4)、1.867(峰5)，相對(duì)保留時(shí)間RSD均小于3%，說明不同產(chǎn)地和不同批次的樣品有較多相同的成分；相對(duì)峰面積差異較大，RSD介于50.5%～73.2%之間，說明不同生長(zhǎng)地區(qū)、不同環(huán)境與不同批次的樣品含量差異較大。

圖1 草果藥材對(duì)照特征圖譜(S.桉油精)

圖2 39批草果藥材特征圖譜

2.5.2 草果仁特征圖譜 草果仁33批樣品的供試品溶液按上述確定條件進(jìn)樣，記錄色譜圖。利用中藥指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)軟件，采用自動(dòng)匹配法生成共有模式對(duì)照特征圖譜，見圖3、圖4。

圖3 草果仁對(duì)照特征圖譜(S.桉油精)

圖4 33批草果仁特征圖譜

數(shù)據(jù)表明，5個(gè)特征峰的相對(duì)保留時(shí)間分別為0.787(峰1)、1.000(S峰)、1.130(峰3)、1.200(峰4)、1.854(峰5)，相對(duì)保留時(shí)間RSD均小于1%，說明不同產(chǎn)地和不同批次的樣品有較多相同的成分；相對(duì)峰面積差異較大，RSD介于42.7%～62.1%之間，說明不同產(chǎn)地和不同批次的樣品含量差異較大，可能與原料質(zhì)量和炮制工藝有關(guān)。

2.5.3 姜草果仁特征圖譜 姜草果仁15批樣品的供試品溶液按上述確定條件進(jìn)樣，記錄色譜圖。利用中藥指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)軟件，采用自動(dòng)匹配法生成共有模式對(duì)照特征圖譜，見圖5、圖6。

由實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析可知，5個(gè)特征峰中僅1.000(S峰)均有檢出，其他4個(gè)特征峰相對(duì)保留時(shí)間分別為0.787(峰1)、1.130(峰3)、1.200(峰4)、1.854(峰5)部分樣品未檢出。

2.5.4 草果藥材、草果仁和姜草果仁特征圖譜之間的相關(guān)性 對(duì)草果藥材共有特征圖譜S1、草果仁共有特征圖譜S2和姜草果仁的共有特征圖譜S3進(jìn)行對(duì)比，驗(yàn)證其是否有相關(guān)性，結(jié)果見圖7、圖8。

結(jié)果表明，草果和草果仁特征圖譜相似度為0.849，相似度高，說明有較多相同的成分，其成分含量比例較為一致；姜草果仁與草果藥材、草果仁有很大差異。

圖5 姜草果仁對(duì)照特征圖譜(S.桉油精)

圖6 15批姜草果仁特征圖譜

圖7 草果和草果仁特征圖譜比較

圖8 草果、草果仁和姜草果仁對(duì)比

3 討論

按照《香港中藥材標(biāo)準(zhǔn)》草果指紋圖譜的測(cè)定方法，對(duì)供試品工藝的提取方法(水蒸氣蒸餾法、超聲提取法)，提取溶劑(正己烷、乙酸乙酯)、溶劑用量(10mL、25mL、50mL)進(jìn)行考察，選定的方法峰形和分離度均良好，理論塔板數(shù)按桉油精峰計(jì)算不低于5000。

通過對(duì)草果不同炮制品的特征圖譜研究，得到草果藥材對(duì)照特征圖譜，該圖譜可代表其特性成分，作為草果藥材的鑒別依據(jù)。

草果的臨床應(yīng)用在歷代本草中多記載為去皮殼，藥典規(guī)定以草果仁入藥，研究結(jié)果表明草果藥材與草果仁有較多的相同成分，草果去殼是否會(huì)浪費(fèi)藥材資源有待進(jìn)一步商榷。

姜汁炙草果仁見于清代，沿用至今，草果仁姜炙后化學(xué)成分變化較大，炮制加熱過程造成揮發(fā)性成分散失，揮發(fā)性成分的降低會(huì)不會(huì)造成其臨床療效降低，以及姜炙草果仁的炮制作用機(jī)理有待進(jìn)一步研究。