趙興付

（云南省曲靖市馬龍區(qū)大莊鄉(xiāng)人民政府，云南曲靖 655199）

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)時(shí)間、地點(diǎn)

本實(shí)驗(yàn)于2016年7月至12月在云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院動(dòng)物病理學(xué)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。

1.2 實(shí)驗(yàn)材料

1.2.1 病料來(lái)源

馬龍某地區(qū)某鵝場(chǎng)專(zhuān)業(yè)戶(hù)送檢的表現(xiàn)為拉白色稀糞、零星死亡。剖解有心包炎等病變的鵝肝、脾胃、肺、腎臟及糞便等。

1.2.2 生化試劑

尿素酶、V～P、M～R、吲哚、葡萄糖、乳糖、麥芽糖、蔗糖、甘露醇等所有試劑均由云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物病理實(shí)驗(yàn)室提供。按常規(guī)方法制備備用。

1.2.3 培養(yǎng)基

培養(yǎng)基有：麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、普通瓊脂培養(yǎng)基和鮮血瓊脂培養(yǎng)基。

1.2.4 實(shí)驗(yàn)設(shè)備

培養(yǎng)盤(pán)、無(wú)菌手術(shù)臺(tái)、孵化器、分析天平、普通顯微鏡、高壓滅菌器、消毒平臺(tái)等由云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物病理學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供。

1.2.5 大腸桿菌單因子血清

購(gòu)自中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。

1.2.6 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

18g～22g 20日齡SPF小白鼠，購(gòu)自昆明醫(yī)學(xué)院；養(yǎng)殖場(chǎng)提供10日齡大小健康、無(wú)感染的郎德鵝20只。

1.2.7 藥物

≥98%氟苯尼考（上海瑞諾藥業(yè)有限公司）、≥98%乳酸恩諾沙星（深圳圣威西藥原料動(dòng)物保健品有限公司）、強(qiáng)力霉素（北京中科動(dòng)物藥業(yè)有限公司）、≥98%乳酸諾氟沙星（深圳圣威西藥原料動(dòng)物保健品有限公司）、阿莫西林（深圳圣威西藥原料動(dòng)物保健品有限公司）、50%左旋氧氟沙星（深圳泰克動(dòng)物藥業(yè)有限公司）、呋喃唑酮（北京中科動(dòng)物藥業(yè)有限公司）、新霉素可溶性粉（淮紡市好利達(dá)獸藥有限公司）、鏈霉素（北京中科動(dòng)物藥業(yè)有限公司）、硫酸新霉素可溶性粉（淮紡市好利達(dá)獸藥有限公司）、硫酸黏菌素可溶性粉（淮紡市好利達(dá)獸藥有限公司）、酒石酸泰樂(lè)菌素可溶性粉（河南那瑞森生物藥業(yè)有限公司）、25%鹽酸洛美沙星（河南那瑞森生物藥業(yè)有限公司）、土霉素（華北聯(lián)邦獸藥股份有限公司）、硫酸阿米卡星（深圳泰克動(dòng)物藥業(yè)有限公司）、復(fù)方乙酰甲喹可溶性粉（淮紡市好利達(dá)獸藥有限公司）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 小白鼠接種實(shí)驗(yàn)

取實(shí)驗(yàn)室購(gòu)買(mǎi)的健康小白鼠20只，把它隨機(jī)分成2組，各組10只，實(shí)驗(yàn)組中用定型的24 h實(shí)驗(yàn)菌株靜置肉湯培養(yǎng)物分別進(jìn)行腹腔注射0.1ml/只（約含細(xì)菌2.58×109cfu/ml），對(duì)照組中用滅菌生理鹽水，腹腔注射0.1 ml/只（約含細(xì)菌2.58×109cfu/ml），接種后觀察，記錄發(fā)病情況及死亡時(shí)間，并取接種小白鼠的肝、脾胃、心血進(jìn)行病原的再分離。

2.2 雛鵝接種實(shí)驗(yàn)

取鵝場(chǎng)提供的健康雛鵝20只，把它隨機(jī)分成2組，各組10只，實(shí)驗(yàn)組中用定型的24 h實(shí)驗(yàn)菌株靜置肉湯培養(yǎng)物分別進(jìn)行皮下注射0.3ml/只（約含細(xì)菌2.58×109cfu/ml），對(duì)照組中用滅菌生理鹽水，皮下注射0.3ml/只（約含細(xì)菌2.58×109cfu/ml），接種后觀察，記錄發(fā)病情況及死亡時(shí)間，并取接種雛鵝的肝、脾胃、心血進(jìn)行病原的再分離。

2.3 藥敏實(shí)驗(yàn)

采用紙片法，用藥物濃度是0.05mg/ml，每個(gè)平板將稀釋好的微生物菌液接種0.1毫升，在一個(gè)平面上，用消毒好的無(wú)菌鑷子夾起玻璃棒涂勻平板表面，再用消毒好的無(wú)菌鑷子取各種藥敏紙片貼于平板上，每個(gè)平板3～5張紙，間隔不少于3cm，把平板放于37℃恒溫箱內(nèi)，12h左右觀察結(jié)果，測(cè)量所有的紙片周?chē)囊志h(huán)直徑。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 小鼠接種實(shí)驗(yàn)

接種后約12h，小鼠開(kāi)始出現(xiàn)各種癥狀，如抑郁、腹圍增大和3只小鼠在48h內(nèi)死亡。尸檢發(fā)現(xiàn)死鼠腹腔有黃色纖維素滲出物，心外膜出血，肝腫脹，變黑或出血。

3.2 雛鵝接種實(shí)驗(yàn)

所有雛鵝在接種后12h開(kāi)始患病，出現(xiàn)腹瀉癥狀，肝門(mén)周?chē)形酃福?8h內(nèi)全部死亡；立即解剖死鵝，發(fā)現(xiàn)雛鵝腹腔有心包積液和纖維素滲出；肝臟腫脹，有出血點(diǎn)、出血塊和脆性結(jié)構(gòu)；心包積液，心臟表面有出血點(diǎn)；腺、胃、乳頭出血；腸充血，尤其是十二指腸充血明顯。

從死亡小白鼠和雛鵝的肝臟、脾胃、心血中，分離提取到所接種的細(xì)菌。而對(duì)照組無(wú)異常表現(xiàn)。

3.3 藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果

我們對(duì)已鑒定的O2、、O7、 O26、O78和O35分別進(jìn)行藥敏實(shí)驗(yàn)。綜合分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：本次分離鑒定大腸桿菌敏感度較高的藥物是：硫酸黏菌素可溶性粉、阿莫西林和強(qiáng)力霉素。

4 結(jié)論

分離到的細(xì)菌中，共鑒定出15株大腸桿菌，包括：O354株，O783株，O263株，O72株，O1091株，O1411株，O21株。體外抑菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，強(qiáng)力霉素、阿莫西林對(duì)馬龍某鵝場(chǎng)的鵝致病性大腸桿菌具有一定的治療作用。