安拉扎，張 濤，陳仕毅，賈先波，吉米有爾

(1.四川省涼山彝族自治州畜牧獸醫(yī)科學(xué)研究所，四川 西昌 615000；2.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)，成都 溫江 611130;3.四川省昭覺縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，四川 昭覺 616150)

涼山黃牛于1995年全國畜禽品種補(bǔ)充調(diào)查時(shí)命名,是昭覺縣的優(yōu)勢畜種，是一種以放牧為主的役肉兼用型小型地方品種，主要分布在四川省涼山州境內(nèi)及攀枝花市部分縣區(qū)，適宜在海拔1500m以上的二半山區(qū)生長、繁衍。該品種在生產(chǎn)性能、抗病力、適應(yīng)性等方面都表現(xiàn)出了特有的品質(zhì)，2017年末昭覺縣存欄64348頭。四川肉牛創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)彝區(qū)肉牛工作崗位為推動(dòng)涼山昭覺縣肉牛產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，加快涼山黃牛良種化進(jìn)程，為品種改良提供一條新的技術(shù)思路。崗位團(tuán)隊(duì)從2018年7月起，在四川肉牛創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)農(nóng)區(qū)肉牛崗位、中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所專家的協(xié)作指導(dǎo)下，共同在彝區(qū)崗位工作示范縣昭覺縣開展肉牛同期發(fā)情、胚胎移植技術(shù)的試驗(yàn)研究工作?，F(xiàn)將胚胎移植應(yīng)用試驗(yàn)情況報(bào)告如下：

1 材料

1.1 胚胎來源

中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所提供澳大利亞進(jìn)口和牛凍胚。

1.2 移植地點(diǎn)

四川省涼山州昭覺縣特布洛鄉(xiāng)特布洛村、慶恒鄉(xiāng)慶恒村、比爾鄉(xiāng)補(bǔ)各洛呷村、灑拉地坡鄉(xiāng)爾打火村4個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)。

1.3 使用藥物

黃體酮陰道緩釋劑(孕酮栓CIDR):新西蘭DEC國際有限公司生產(chǎn)、生產(chǎn)批號：X043691

氯前列醇鈉注射液(PG-CL):寧波三生生物科技有限公司生產(chǎn)2ml(0.2mg×10支)、生產(chǎn)批號S180901

鹽酸利多卡因注射液:石藥銀湖制藥有限公司生產(chǎn)5ml(0.1g×5支)、生產(chǎn)批號：1061607311

2 方法

2.1 受體牛的選擇

對移植地養(yǎng)牛戶飼養(yǎng)的牛只保定，掏出直腸內(nèi)積糞，用0.1%的高錳酸鉀(KMnO4)液清洗肛門和外陰，然后進(jìn)行直腸檢查，篩選出29頭2～7歲、生長發(fā)育良好、空懷、發(fā)情周期正常、無生殖系統(tǒng)疾病、產(chǎn)犢3個(gè)月以上的涼山黃牛、蜀宣花牛雜交牛作為受體牛。其中涼山黃牛18頭、蜀宣花牛雜交牛11頭。

2.2 同期發(fā)情處理

2.2.1 7月2日埋植孕酮栓 對篩選的29頭受體牛作埋植孕酮栓處理。將受體牛保定，操作人員穿好防護(hù)服和手套，在清水中清洗放栓槍，然后放入新潔爾滅消毒液中浸泡1min。將孕酮栓放入槍中并用液體石蠟涂抹在槍表面。再用75%酒精棉消毒外陰部。將放栓槍正面向上(開口向上)輕輕用力推入陰道前部，推送孕酮栓并緩慢旋轉(zhuǎn)取出放栓槍。

2.2.2 7月11日注射PG 對4頭掉栓受體牛不再進(jìn)行后期試驗(yàn)處理。慶恒鄉(xiāng)慶恒村掉栓1頭、比爾鄉(xiāng)補(bǔ)各洛呷村掉栓3頭。對剩余的25頭受體牛注射了PG，每頭牛肌肉注射0.6mg。

2.2.3 7月14日撤栓 提起牛尾，外陰部拉住塑料線輕輕扯出孕酮栓。

2.2.4 7月15日下午觀察發(fā)情并配種 如出現(xiàn)受體牛發(fā)情可用凍精輸精一次。

2.2.5 7月16日配種 早上進(jìn)行二次配種。

個(gè)別受體牛先出現(xiàn)發(fā)情可進(jìn)行冷凍精液輸精，間隔12小時(shí)兩次輸精，這樣可提高胚胎移植的成活率。

2.3 移植

7月22日對同期發(fā)情處理的25頭受體牛進(jìn)行直腸檢查，對黃體質(zhì)量較好的11頭受體牛進(jìn)行胚胎移植。其中涼山黃牛7頭、蜀宣花牛雜交牛4頭。

2.3.1 直腸檢查 對受體牛進(jìn)行直腸檢查，確定黃體發(fā)育情況。用直腸檢查法依次檢查子宮頸、左右兩側(cè)子宮角、卵巢的發(fā)育情況，對符合條件的受體牛同時(shí)要檢查卵巢的黃體，根據(jù)黃體大小、發(fā)育成度、質(zhì)地軟硬、卵巢基礎(chǔ)和有無排卵點(diǎn)分為A、B、C三級。A級為正常，卵巢基礎(chǔ)好，黃體直徑在1.5cm 以上，質(zhì)地軟硬適中，觸摸感覺如豬肝，與卵巢銜接好，有排卵點(diǎn)；B級為黃體直徑在1～1.5cm之間，質(zhì)地稍軟或稍硬，與卵巢連接痕跡隱性黃體與排卵點(diǎn)不明顯，卵巢基礎(chǔ)薄弱；C級為黃體過小，與卵巢連接痕跡明顯，有小卵泡或卵巢基礎(chǔ)過差。C級不能作為黃體移植，視為廢棄，A、B級分別進(jìn)行胚胎移植[1]。

2.3.2 胚胎移植 對黃體質(zhì)量較好的11頭受體牛進(jìn)行胚胎移植。

方法：第一步：將胚胎裝入輸胚槍。將細(xì)管在36℃的溫水中浴浸10S解凍胚胎，剪去細(xì)管封口端，裝入輸胚槍。第二步：將受體牛保定好，掏出直腸積糞，用0.1%高錳酸鉀(KMnO4)溶液沖洗并用毛巾將牛外陰部擦拭干凈，再用75%酒精棉消毒外陰部。第三步：移植前進(jìn)行硬膜外腔麻醉。在受體牛尾根部1～2尾椎間用酒精棉進(jìn)行擦拭消毒，針頭呈45度斜向下刺入1～2尾椎間3CM左右，注入3mL2%鹽酸利多卡因注射液，便于胚移進(jìn)行。第四步：輸胚時(shí)用左手扒開外陰, 右手持輸胚槍插入陰道。通過直腸把握法將胚胎植入有黃體一側(cè)的子宮角的大彎處(上1/3～1/2處)，在5min內(nèi)完成移植操作。移植時(shí)要做到輕、穩(wěn)、快，防止用力不當(dāng)損傷子宮造成感染，尤其在穿過子宮頸時(shí)必須順著子宮頸螺旋方向前進(jìn)[2]。

受體牛移植后盡量不要驅(qū)趕和劇烈運(yùn)動(dòng)，也不要與當(dāng)?shù)毓；炷?，以免影響胚胎著床?/p>

3 妊娠檢查

2018年10月22日初步診斷受體牛妊娠5頭。其中涼山黃牛4頭、蜀宣花牛雜交牛1頭。經(jīng)檢查確定妊娠的受體母牛應(yīng)加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，保證胎兒和母牛的營養(yǎng)需要。

4 試驗(yàn)結(jié)果

妊娠牛只已分別于2019年4月22日、2019年4月28日、2019年5月1日成功產(chǎn)犢公牛3頭。慶恒鄉(xiāng)慶恒村1頭、特布洛鄉(xiāng)特布洛村1頭、比爾鄉(xiāng)補(bǔ)各洛呷村產(chǎn)1頭。牛只被毛黑色，精神狀態(tài)良好。產(chǎn)犢受體牛均為涼山黃牛。初生重分別為25.0kg、24.5kg、25.5kg，均顯著高于涼山黃牛初生重 13～16kg，其余2頭出現(xiàn)流產(chǎn)，未能正常產(chǎn)犢。

5 結(jié)論

(1)胚胎移植11頭，成功受孕5頭，受孕率45%。因此，在涼山利用涼山黃牛作為胚胎移植受體牛開展胚胎移植技術(shù)是可行的。

(2)此次進(jìn)行胚胎移植受體牛11頭，其中涼山黃牛7頭、蜀宣花牛雜交牛4頭。試驗(yàn)成功的產(chǎn)犢受體牛均為涼山黃牛，蜀宣花牛雜交牛只有1頭妊娠，但中途出現(xiàn)流產(chǎn)。涼山黃牛因長期以放牧為主，對涼山氣候、草料及飼養(yǎng)方式等的適應(yīng)性非常強(qiáng)，具有耐粗飼、耐寒、耐勞、抗病力強(qiáng)的特點(diǎn)。因此胚胎移植應(yīng)選擇更適應(yīng)當(dāng)?shù)厣鷳B(tài)環(huán)境的本地牛為佳。

(3)篩選的空懷、健康無生殖疾病的受體牛29頭，經(jīng)同期發(fā)情處理，達(dá)到移植條件的受體牛11頭，僅占同期發(fā)情處理牛的37.93%；胚胎移植受體牛11頭，成功產(chǎn)犢3頭，僅占27%。主要原因是受昭覺縣受地理環(huán)境、養(yǎng)殖習(xí)慣的影響，當(dāng)?shù)厝馀ｏ曫B(yǎng)以放牧、單戶散養(yǎng)為主。養(yǎng)殖戶養(yǎng)殖技術(shù)水平較低，不能及時(shí)把握牛只發(fā)情狀態(tài)；飼養(yǎng)方式落后，肉牛營養(yǎng)水平跟不上；單戶散養(yǎng)的模式給技術(shù)人員的適時(shí)跟蹤造成一定難度等原因所導(dǎo)致。