劉姍姍

（武漢大學(xué)醫(yī)院，湖北 武漢 430072）

肺癌是最常見嚴(yán)重危害人類生命健康的惡性腫瘤，致死率在惡性腫瘤中占第一位。肺癌患者早期癥狀不明顯，60 %～70 %的患者初診時(shí)已屬于疾病晚期，喪失了手術(shù)治療的機(jī)會(huì)[1]。其中，非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）是肺癌的主要病理類型，約85 %的肺癌患者為NSCLC患者，且易發(fā)生遠(yuǎn)處臟器的轉(zhuǎn)移。NSCLC患者5年生存率不到15 %，如不及時(shí)治療，生存時(shí)間不足5個(gè)月[2]。

近年，中藥對(duì)肺癌患者的防治效果已取得了顯著進(jìn)步，但其抗腫瘤的作用機(jī)制尚不明確。越來越多的文獻(xiàn)表明微小RNA（microRNA，miRNA）與肺癌治療有密切關(guān)系，因此，研究中藥活性成分對(duì)miRNA的調(diào)控，有助于研究中藥抗腫瘤的機(jī)制，開發(fā)新型抗肺癌藥物。

本文就近5年國(guó)內(nèi)外有關(guān)中藥活性成分、miRNA及肺癌間關(guān)系的研究進(jìn)行綜述，為中藥抗肺癌的機(jī)制研究提供新思路。

1 miRNA概述

miRNA是一類內(nèi)生的、長(zhǎng)度約為18～25個(gè)核苷酸的非編碼小RNA，具有多種重要的生物調(diào)節(jié)作用，盡管在人類基因組中占比極小，但miRNA調(diào)控著人體內(nèi)超過 1/3 的基因表達(dá)[3]，幾乎參與調(diào)節(jié)細(xì)胞的各個(gè)生物過程，包括發(fā)育、造血、器官形成、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞增殖和腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。每個(gè)miRNA可有多個(gè)靶基因，在生物胚胎發(fā)育和腫瘤形成等生理或病理發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用，多種腫瘤常伴有 miRNA的異常表達(dá)[4]。miRNA通過與靶標(biāo)蛋白的3’端非編碼區(qū)（3’-untranslated region，3’-UTR）完全或不完全互補(bǔ)配對(duì)結(jié)合，發(fā)揮調(diào)控表達(dá)的作用[5]。miRNA的種類繁多，一些可作為致癌基因，另一些可作為抑癌基因[6]。

miRNA在癌細(xì)胞凋亡的過程中發(fā)生規(guī)律性的改變，并調(diào)節(jié)基因表達(dá)，很可能在此過程中發(fā)揮了抗癌作用，但其可能的靶基因大部分尚未知，因此，研究miRNA的改變對(duì)研究藥物抗癌機(jī)制和研發(fā)新型抗癌藥物有重要意義。

2 抗腫瘤中藥活性成分對(duì)miRNA的調(diào)控作用

目前肺癌的治療方法主要有手術(shù)、放療、化療、靶向治療等，但這些治療方法的副作用大，降低患者的生活質(zhì)量。中藥具有毒副作用小、取材方便、價(jià)格低廉、提高放化療敏感性、增強(qiáng)患者免疫力、延長(zhǎng)患者壽命、不易發(fā)生耐藥性等特點(diǎn)，極大程度地彌補(bǔ)了現(xiàn)有腫瘤治療藥物的不足。目前，中藥抗肺癌已成為關(guān)注的熱點(diǎn)，但其抗腫瘤的作用機(jī)制尚不明確。近年研究顯示，miRNA與中藥活性成分抗腫瘤密切相關(guān)，miRNA可能作為致癌基因或抑癌基因參與其中。因此，從miRNA水平研究中藥活性成分抗腫瘤的作用機(jī)制具有重要意義。

2.1 姜黃素

姜黃素（curcumin）是從姜科植物如姜黃中提取所得，是一種脂溶性酚類黃色素，分子式為C21H20O6，相對(duì)分子質(zhì)量（Mr）為368.37，具有抗炎、抗氧化、抗凝、降血脂及抗腫瘤功效。據(jù)相關(guān)報(bào)道，姜黃素可調(diào)控腫瘤細(xì)胞中相關(guān)miRNA來發(fā)揮其調(diào)控腫瘤的作用。

Zhang等[7]應(yīng)用miRNA微陣列芯片技術(shù)，得出miR-186可能是致癌基因的結(jié)論，而姜黃素可能通過下調(diào) miR-186的表達(dá)促進(jìn)人肺癌A549/DDP細(xì)胞的凋亡。Zhang和Bai[8]發(fā)現(xiàn)姜黃素通過下調(diào)miR-21，引起miR-21的靶基因PTEN的表達(dá)上調(diào)，從而抑制肺癌A549細(xì)胞的增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。Ye等[9]將研究進(jìn)一步推進(jìn)，研究了體外和體內(nèi)姜黃素給藥前后非小細(xì)胞肺癌H460、A427和A549細(xì)胞中miRNA變化情況，確認(rèn)姜黃素通過上調(diào)miR-192-5p和miR-215，促進(jìn)人肺癌H460和A427細(xì)胞的凋亡。Jin等[10]發(fā)現(xiàn)，姜黃素通過上調(diào)miR-192-5p的表達(dá)，抑制磷脂酰肌醇3激酶/蛋白質(zhì)絲氨酸蘇氨酸激酶（phosphatidylinositol-3-kinases/protein-serinethreonine kinase，PI3K / AKT）信號(hào)通路，發(fā)揮抑制肺癌A549細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)其凋亡的作用。Wu等[11]發(fā)現(xiàn)姜黃素通過上調(diào)miR-let 7c和miR-101，抑制EZH2基因的表達(dá)，減少NOTCH1的表達(dá)（EZH2和NOTCH1的數(shù)量在肺癌細(xì)胞中呈倒數(shù)關(guān)系），從而阻止肺癌A549、NCI-H520、NCI-H1373細(xì)胞的發(fā)展和轉(zhuǎn)移。

2.2 人參皂苷Rh2

人參皂苷（ginsenoside）Rh2為三萜皂苷，主要存在于人參屬藥材中，分子式為 C36H62O8，Mr為622.88，具有提高免疫力、抗炎、改善疲勞、干擾病毒的功效，可抑制肝癌、卵巢癌、食管癌、膠質(zhì)瘤等多種腫瘤。人參皂苷Rh2能通過調(diào)控miRNA實(shí)現(xiàn)對(duì)腫瘤的調(diào)控作用。

An等[12]應(yīng)用miRNA微陣列分析法，分析人類非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞中，人參皂苷Rh2處理組與對(duì)照組miRNA表達(dá)譜的變化，發(fā)現(xiàn)有44條miRNA上調(diào)，24條miRNA下調(diào)，其中miR-148a的上調(diào)變化最為顯著，miR-424的下調(diào)變化最為顯著，通過miRNA靶基因預(yù)測(cè)軟件，發(fā)現(xiàn)這些靶基因與細(xì)胞的增殖分化、凋亡有關(guān)。張彩華等[13]研究顯示，人參皂苷Rh2通過上調(diào)miR-16，下調(diào)Bcl-2蛋白的表達(dá)，從而抑制人肺癌A549細(xì)胞增長(zhǎng)，發(fā)揮治療肺癌作用。

2.3 長(zhǎng)梗秦艽酮

長(zhǎng)梗秦艽酮（waltonitone）是從龍膽科植物長(zhǎng)梗秦艽中提取的烏蘇烷型五環(huán)三萜化合物，分子式為C30H46O2，Mr為454.00，具有抗癌功效。

Zhang等[14]早在2012年就發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)梗秦艽酮誘導(dǎo)人肺癌A549細(xì)胞凋亡過程中伴隨著27個(gè)miRNA改變，此改變可能調(diào)控蛋白表達(dá)，使Bax蛋白的表達(dá)上調(diào)，Bcl-2蛋白的表達(dá)下調(diào)，Bax/Bcl-2的比值增加。Zhang等[15]進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，長(zhǎng)梗秦艽酮誘導(dǎo)NSCLC細(xì)胞凋亡的機(jī)制，是通過上調(diào)肺癌H460和H3255細(xì)胞中的miR-663（一種潛在的腫瘤抑制劑），繼而誘導(dǎo)Bcl-2的表達(dá)下調(diào)，發(fā)揮抗癌作用。

2.4 木犀草素

木犀草素（luteolin）又名3’,4’,5,7-四羥基黃酮，是主要存在于金銀花、菊花、荊芥、夏枯草等中藥中的一種天然黃酮類化合物，自然界許多植物如芹菜、甜椒、白菜、花椰菜、橄欖油、茶中也含大量的木犀草素。其分子式為C15H10O6，Mr為286.23，具有消炎、抗過敏、降尿酸、抗菌、抗病毒、抗癌功效。

姜澤群等[16]研究顯示木犀草素能抑制人肺癌H460細(xì)胞的增殖，并促進(jìn)其凋亡，其機(jī)制可能是激活p53信號(hào)通路，上調(diào)miR-34a-5p，最終影響凋亡相關(guān)蛋白Bax/Bcl-2 的表達(dá)來實(shí)現(xiàn)的。

2.5 麥冬皂苷B

麥冬皂苷（ophiopogonin）B 從麥冬中提取，其分子式為C39H62O12，Mr為722.9，具有抗菌、抗癌、降血糖、清除自由基功效。

邱雯莉[17]研究顯示，麥冬皂苷B可能通過上調(diào)非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞 miR-34b-5p表達(dá)水平，抑制下游原癌靶基因Met的表達(dá)，進(jìn)而抑制肺癌A549細(xì)胞的遷移和侵襲，發(fā)揮抗癌作用。邱雯莉等[18]對(duì)麥冬皂苷B的抗癌機(jī)制繼續(xù)進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)麥冬皂苷B使肺癌A549細(xì)胞中miR-34a的表達(dá)量明顯上升，繼而下調(diào)原癌靶基因Met的表達(dá)，從而抑制非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞生長(zhǎng)。

2.6 熊果酸

熊果酸（uroslic acid）是一種五環(huán)三萜類化合物，存在于唇形科植物夏枯草的全草，冬青科冬青屬鐵冬青的葉等許多植物中。其分子式為C30H48O3，Mr為456.68，具有抗氧化、鎮(zhèn)靜、抗炎、抗菌、抗?jié)儭⒔档脱?、抗癌等多種生物學(xué)效應(yīng)。

梁敏等[19]發(fā)現(xiàn)熊果酸通過上調(diào)miR-34 a的表達(dá)，抑制肺癌A549細(xì)胞活力及細(xì)胞遷移和侵襲。并進(jìn)一步驗(yàn)證，在肺癌A549細(xì)胞中轉(zhuǎn)染miR-34a，能抑制肺癌細(xì)胞活力及細(xì)胞遷移和侵襲；轉(zhuǎn)染miR-34a抑制劑，能增強(qiáng)肺癌細(xì)胞活力及細(xì)胞遷移和侵襲。因此，證明熊果酸通過上調(diào)miR-34a來實(shí)現(xiàn)抗肺癌A549細(xì)胞的作用。

2.7 齊墩果酸

齊墩果酸（oleanolic acid）是一種五環(huán)三萜類化合物，從龍膽科植物獐牙菜屬的青葉膽全草或女貞子的果實(shí)中分離提取而得，以游離體和配糖體存在于多種植物中。其分子式為C30H48O3，Mr為456.70，具有抗菌、護(hù)肝、抗癌等作用。

Zhao等[20]發(fā)現(xiàn)齊墩果酸在肺癌細(xì)胞株和荷瘤小鼠中，通過上調(diào)miR-122，進(jìn)而下調(diào)其可能的靶向蛋白CCNG1和MEF2D，抑制肺癌細(xì)胞增殖，發(fā)揮抗癌作用。并通過使用miR-122拮抗劑，使齊墩果酸失去抗肺癌細(xì)胞的能力，證明齊墩果酸可能通過調(diào)控腫瘤相關(guān)miRNA，調(diào)節(jié)下游蛋白，進(jìn)而發(fā)揮抗腫瘤功效。

2.8 山楂酸

山楂酸（maslinic acid）是一種五環(huán)三萜酸類化合物，多存在于山楂、紅棗、枇杷葉和油橄欖中，其分子式為 C30H4804，Mr為472.70。近年發(fā)現(xiàn)山楂酸具有抗癌、抗氧化、抗艾滋病、抗菌、抗糖尿病等多種生物活性。

白雪等[21-22]采用AFFX miRNA表達(dá)譜芯片分析山楂酸作用于肺癌A549細(xì)胞前后miRNA的表達(dá)變化，發(fā)現(xiàn)59條miRNA表達(dá)發(fā)生變化（23條上調(diào)，36條下調(diào)），結(jié)合生物信息學(xué)分析初步判定，山楂酸對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞有抑制作用，其可能通過上調(diào)miR-630及調(diào)控Caspase家族蛋白的表達(dá)，誘發(fā)肺癌A549細(xì)胞凋亡。

3 展望

近年，miRNA相關(guān)研究技術(shù)突飛猛進(jìn)，如miRNA表達(dá)譜芯片、實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction，RT-qPCR）等各種技術(shù)的應(yīng)用和完善，為肺癌的發(fā)生機(jī)制研究及相關(guān)的生物治療策略提供了新的視角，將有利于進(jìn)一步理解miRNA在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用，并為利用miRNA進(jìn)行臨床治療提供新的依據(jù)。

目前，有關(guān)中藥治療腫瘤的研究日益增多。某些中藥活性成分可調(diào)節(jié)miRNA的表達(dá)，發(fā)揮抗腫瘤作用，為中醫(yī)藥治療肺癌提供了新的切入點(diǎn)。但上述報(bào)道仍多為體外研究，裸鼠移植瘤模型研究較少。中藥抗肺癌的體內(nèi)調(diào)控機(jī)制仍需進(jìn)一步的動(dòng)物試驗(yàn)及臨床研究，同時(shí)以miRNA為靶點(diǎn)設(shè)計(jì)抗癌藥物也為新藥開發(fā)提供思路。