鄧順美 張欣宗 龐韜

[摘要]目的 通過(guò)對(duì)正常生育男性和非梗阻性無(wú)精子癥患者精液常規(guī)分析與精漿附性腺標(biāo)志物的檢測(cè)，探討非梗阻性無(wú)精子癥患者附性腺生化標(biāo)志物的變化。方法 選取2018年3～8月于廣東省計(jì)劃生育專(zhuān)科醫(yī)院門(mén)診就診的38例非梗阻性無(wú)精子癥患者作為非梗阻性無(wú)精子癥組，另選取同期于廣東省計(jì)劃生育專(zhuān)科醫(yī)院進(jìn)行生殖健康體檢合格的有正常生育力的30例男性志愿者作為正常對(duì)照組。禁欲2～7 d后均手淫取精，精液完全液化后，常規(guī)檢測(cè)精液量、精漿附性腺標(biāo)志物（包括精漿果糖、精漿中性α-葡糖苷酶和精漿鋅含量）。結(jié)果 非梗阻性無(wú)精子癥組患者的精液量[2.6（0.2，5.9）ml]低于正常對(duì)照組[3.8（2.2，6.3）ml]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。非梗阻性無(wú)精子癥組患者的精漿果糖含量[36.0（0.1，141.5）μmol/一次射精]低于正常對(duì)照組[75.9（22.4，154.4）μmol/一次射精]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。非梗阻性無(wú)精子癥組患者的精漿中性α-葡糖苷酶活性[26.8（0.4，95.7）mU/一次射精]低于正常對(duì)照組[61.1（7.8，193.9）mU/一次射精]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。兩組的精漿鋅含量比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論 非梗阻性無(wú)精子癥患者與正常生育男性相比，除生精功能障礙外，還同時(shí)存在不同程度的附睪和精囊腺功能下降。

[關(guān)鍵詞]非梗阻性無(wú)精子癥;精漿果糖;精漿中性α-葡糖苷酶;精漿鋅;人類(lèi)精液

[中圖分類(lèi)號(hào)] R698.2 ? ? ? ? ?[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A ? ? ? ? ?[文章編號(hào)] 1674-4721（2019）12（b）-0038-04

[Abstract] Objective To investigate the changes of biochemical markers of accessory sex gland in non-obstructive azoospermia patients by routine analysis of semen and detection of accessory sex gland markers in seminal plasma of normal fertile men and non-obstructive azoospermia patients. Methods A total of 38 patients with non-obstructive azoospermia were selected as the non-obstructive azoospermia group， and 30 male volunteers with normal fertility who passed the reproductive health examination were selected as the normal control group from March to August 2018 in the Outpatient Clinic of Guangdong Family Planning Specialty Hospital. After abstinence for 2 to 7 days， the semen sample were obtained by masturbation. After complete liquefaction of semen， semen volume and semen accessory gland markers （including seminal fructose， seminal neutral α-glucosidase and seminal zinc）， were routinely measured. Results The semen volume of the non-obstructive azoospermia group （2.6 [0.2， 5.9] ml） was lower than that of the normal control group （3.8 [2.2， 6.3] ml）， and the difference was statistically significant （P<0.05）. The content of seminal fructose in the non-obstructive azoospermia group （36.0 [0.1， 141.5] μmol/ejaculation） was lower than that in the normal control group （75.9 [22.4， 154.4] μmol/ejaculation）， the difference was statistically significant （P<0.05）. The activity of seminal neutral α-glucosidase in the non-obstructive azoospermia group （26.8 [0.4， 95.7] mU/ejaculation） was lower than that in the normal control group （61.1 [7.8， 193.9] mU/ejaculation）， the difference was statistically significant （P<0.05）. There was no significant difference in seminal zinc content between the two groups （P>0.05）. Conclusion Compared with normal fertile men， non-obstructive azoospermia patients have not only spermatogenic dysfunction， but also decreased epididymis and seminal vesicle gland function in varying degrees.

[Key words] Non-obstructive azoospermia; Seminal fructose; Seminal neutral α-glucosidase; Seminal zinc; Human semen

流行病學(xué)資料顯示，已婚育齡夫婦人群中不孕不育發(fā)病率為10%～15%，是繼心腦血管病和腫瘤之后困擾人類(lèi)健康的第三大疾病[1]。因男性因素引起的不育占50%，其中無(wú)精子癥約占男性不育的10%[2]。無(wú)精子癥可分為梗阻性無(wú)精子癥和非梗阻性無(wú)精子癥，非梗阻性無(wú)精子癥是由于睪丸生精功能障礙引起的無(wú)精子癥?；颊吒讲G、輸精管及射精管等輸精管道通暢無(wú)梗阻。睪丸病理檢查常表現(xiàn)為唯支持細(xì)胞綜合癥和各級(jí)生精細(xì)胞阻滯。精液分析檢查時(shí)，該類(lèi)患者表現(xiàn)為精液中無(wú)精子。精液中除了精子等各種有形成分外，還含有各種各樣的無(wú)機(jī)鹽和生物大分子，這些成分主要來(lái)源于輸精管道的上皮細(xì)胞和各種附性腺，有些還為精子運(yùn)動(dòng)提供能量[3-5]。作為非梗阻性無(wú)精子癥患者，他們除了睪丸生精功能障礙之外，其附性腺功能是否也同時(shí)存在功能變化，尚不得而知。本研究采集廣東省計(jì)劃生育專(zhuān)科醫(yī)院的38例正常生育男性和30例非梗阻性無(wú)精子癥患者的精液標(biāo)本，檢測(cè)兩組精液的附性腺標(biāo)志物，旨在探討非梗阻性無(wú)精子癥患者的附性腺功能變化，現(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2018年3～8月于廣東省計(jì)劃生育專(zhuān)科醫(yī)院門(mén)診就診的38例非梗阻性無(wú)精子癥患者作為非梗阻性無(wú)精子癥組，患者年齡22～37歲，平均（30.47±4.25）歲。另選取同期于廣東省計(jì)劃生育專(zhuān)科醫(yī)院進(jìn)行生殖健康體檢合格的有正常生育力的30例男性志愿者作為正常對(duì)照組，患者年齡22～40歲，平均（30.60±5.07）歲。兩組的一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

非梗阻性無(wú)精子癥診斷標(biāo)準(zhǔn)：精液常規(guī)分析無(wú)精子，睪丸活檢仍未見(jiàn)精子，果糖陽(yáng)性，排除輸精管道梗阻。正常對(duì)照組納入標(biāo)準(zhǔn)：精液常規(guī)檢查量≥1.5 ml者;精子濃度≥15×106/ml者;前向運(yùn)動(dòng)精子≥32%者;正常形態(tài)精子百分率≥4%者;已有1歲以?xún)?nèi)小孩者。非梗阻性無(wú)精子癥組和正常對(duì)照組排除標(biāo)準(zhǔn)：有性傳播性疾病和遺傳病者。本研究經(jīng)廣東省計(jì)劃生育專(zhuān)科醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核及同意，所有參與研究者均知曉本研究情況并簽署知情同意書(shū)。

1.2試劑與儀器

精漿果糖定量、精漿中性α-葡糖苷酶和精漿鋅檢測(cè)試劑盒由深圳市博銳德生物科技有限公司提供;血球計(jì)數(shù)池、全自動(dòng)生化分析儀購(gòu)置于深圳市博銳德生物科技有限公司。

1.3方法

1.3.1精液常規(guī)與精子形態(tài)學(xué)分析 ?非梗阻性無(wú)精子癥患者和正常生育男性均禁欲2～7 d后手淫取精，標(biāo)本放置37℃水浴箱，等待液化。精液完全液化后，采用《人類(lèi)精液檢查與處理實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)》（第5版）推薦的血球計(jì)數(shù)池檢測(cè)精子濃度[6]。制備深20 μm的精子濕片，在400倍視野評(píng)估前向運(yùn)動(dòng)精子，運(yùn)用拉薄技術(shù)制備精子涂片，采用世界衛(wèi)生組織（WHO）推薦的改良巴氏染色法檢測(cè)精子形態(tài)[6]。對(duì)于非梗阻性無(wú)精子癥患者的精液標(biāo)本，先進(jìn)行顯微鏡初檢，如任一濕片均未見(jiàn)精子，則混勻精液標(biāo)本，取1 ml精液，以3000 g離心15 min，棄上清，沉淀混勻，取10 μl，蓋上22 mm×22 mm蓋玻片，制備20 μm深的精子濕片，在400倍的相差顯微鏡下檢查。如仍未見(jiàn)精子，則離心剩余精液標(biāo)本，收集精液上清-20℃下貯存。正常生育男性精液采用同樣的離心方法處理上清。

1.3.2精漿附性腺標(biāo)志物檢測(cè)方法 ?精漿果糖定量、精漿中性α-葡糖苷酶活性和精漿鋅含量檢測(cè)均采用WHO主編的《人類(lèi)精液檢查與處理實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)》（第5版）推薦的方法[6]，進(jìn)行分析檢測(cè)。

1.4觀察指標(biāo)

常規(guī)檢測(cè)兩組實(shí)驗(yàn)對(duì)象的精液量、精漿附性腺標(biāo)志物（包括精漿果糖、精漿中性α-葡糖苷酶和精漿鋅含量）。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，符合正態(tài)分布計(jì)量資料的均值用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，不符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以中位數(shù)四分位數(shù)間距[M（P25，P75）]表示，兩組間比較采用Mann-Whitney U檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

非梗阻性無(wú)精子癥組患者的精液量、精漿果糖濃度和精漿中性α-葡糖苷酶活性均低于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），兩組的精漿鋅含量比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（表1）。

3討論

不育男性精液經(jīng)離心沉淀后，進(jìn)行顯微鏡檢查，連續(xù)3次均未發(fā)現(xiàn)精子，果糖陽(yáng)性，精液pH值檢測(cè)≥7.0，排除輸精管道阻塞方可診斷為非梗阻性無(wú)精子癥。引起非梗阻性無(wú)精子癥的因素很多，一方面，體細(xì)胞染色體異常，如Klinefelter綜合征（又稱(chēng)先天性睪丸發(fā)育不全或原發(fā)性小睪丸證）、唐氏綜合征（又稱(chēng)21-三體綜合征）、8三體（又稱(chēng)Warkany綜合征）及47XYY綜合征（又稱(chēng)YY綜合征或超雄綜合征）都會(huì)出現(xiàn)不同程度的睪丸生精障礙。Y染色體微缺失，如AZF缺失，常表現(xiàn)為無(wú)精子癥或嚴(yán)重少精子癥。生殖細(xì)胞染色體異常、隱睪、先天性無(wú)睪癥等也是引起無(wú)精子癥的主要先天性因素。另一方面，各種化療、放療、營(yíng)養(yǎng)缺乏、內(nèi)分泌失常、精索靜脈曲張和各種環(huán)境有害因素常引起繼發(fā)性睪丸生精障礙性無(wú)精子癥。各種各樣的先天性因素和繼發(fā)性因素在引起睪丸生精障礙的同時(shí)，是否也會(huì)對(duì)生殖系統(tǒng)的附性腺功能產(chǎn)生影響，尚不得而知。本研究試圖通過(guò)精液分析，精漿生化標(biāo)志物檢測(cè)，分析探討非梗阻性無(wú)精子癥患者附性腺功能的改變。

常規(guī)檢測(cè)正常生育男性組和非梗阻性無(wú)精子癥患者組精液的相關(guān)參數(shù)，包括精液量、精子濃度、前向運(yùn)動(dòng)精子百分率、正常形態(tài)精子百分率，運(yùn)用《人類(lèi)精液檢查與處理實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)》第5版推薦的方法檢測(cè)精漿果糖濃度、精漿鋅含量和精漿中性α-葡糖苷酶活性，分析比較檢測(cè)結(jié)果，探索非梗阻性無(wú)精子癥患者的附性腺功能變化。本研究結(jié)果提示，正常生育男性組與非梗阻性無(wú)精子癥組精漿鋅含量比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），提示兩者在精漿鋅含量上無(wú)明顯差異，非梗阻性無(wú)精子癥患者的前列腺分泌功能仍處于正常水平。但是本研究結(jié)果提示，非梗阻性無(wú)精子癥組患者的精液量、精漿果糖濃度和精漿中性α-葡糖苷酶活性均低于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。已知精液由精子、細(xì)胞和精漿組成，精液體積主要由精漿決定，大約三分之二的精漿由精囊腺分泌，而且精液果糖也是精囊腺的特異性標(biāo)志物，是精子運(yùn)動(dòng)的能量來(lái)源，直接參與精子獲能和受精。精子軸絲收縮依賴(lài)三磷酸腺苷（ATP）供給能量，而ATP可由果糖分解代謝產(chǎn)生，故精漿果糖含量降低，將使精子活動(dòng)力減弱，影響受精率。本研究結(jié)果提示，非梗阻性無(wú)精子癥組患者的精液量、精漿果糖濃度均低于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），提示非梗阻性無(wú)精子癥患者的精液量、精漿果糖含量均顯著下降，表明該類(lèi)患者除睪丸生精功能障礙之外，精囊腺分泌功能也存在下降趨勢(shì)。附睪是男性生殖系統(tǒng)的重要附性腺器官，生精小管產(chǎn)生的精子在附睪中停留一段時(shí)間，并經(jīng)歷一系列成熟變化，才能獲得運(yùn)動(dòng)能力、識(shí)別卵子透明帶能力和與卵子結(jié)合的能力，達(dá)到功能上的成熟[7]。附睪上皮細(xì)胞還分泌肉毒堿、中性α-葡糖苷酶等附睪特異性標(biāo)志物。中性α-葡糖苷酶可催化精子糖原降解，供給精子代謝與運(yùn)動(dòng)能源，精子成熟、獲能及受精過(guò)程伴有比較活躍糖基反應(yīng)都與此酶活力有關(guān)。有研究報(bào)道，精漿中性α-糖苷酶活性與精子前向運(yùn)動(dòng)性及受精能力之間有顯著正相關(guān)性[8]。這些特異性標(biāo)志物的變化不同程度地反映附睪分泌功能的改變[9-10]。已有相關(guān)研究顯示[11]，少弱精子癥患者不僅存在睪丸生精功能的變化，而且伴有附睪功能的改變，主要反映在精漿中性α-葡糖苷酶活性顯著降低。附睪特異蛋白酶抑制劑（EPPIN）表達(dá)與精子濃度、精子活力成顯著負(fù)相關(guān)，它能結(jié)合精囊蛋白（semenogelin，Sg）和纖連蛋白（fibronectin，F(xiàn)n），通過(guò)在精子表面形成的外殼蛋白抑制精子獲能及精子的活動(dòng)性[12]。既往研究發(fā)現(xiàn)，睪丸蔞縮所致的無(wú)精子癥患者精液中肉毒堿濃度處于低水平狀態(tài)[13]。精漿中性α-葡糖苷酶活性與精子活力之間有顯著的正相關(guān)性，與不運(yùn)動(dòng)精子成顯著負(fù)相關(guān)性，提示該酶活性與精子前向運(yùn)動(dòng)能力有關(guān)[14-15]。本研究結(jié)果提示，非梗阻性無(wú)精子癥患者的精漿中性α-葡糖苷酶活性低于正常生育男性組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），提示睪丸的生精功能與附睪的功能是密切相關(guān)的，即睪丸生精功能低下引起的無(wú)精子癥患者，同時(shí)還伴有附睪功能的低下。Mahmoud等[16]在研究附睪功能性標(biāo)志物時(shí)發(fā)現(xiàn)，精漿中性α-葡糖苷酶活性與精子濃度成顯著正相關(guān)，這些研究也從另一個(gè)側(cè)面得出了與本研究同樣的結(jié)論，即睪丸生精功能與附睪功能密切相關(guān)，引起睪丸生精功能障礙的因素，也會(huì)引起附睪分泌功能的下降。然而，這種關(guān)系的機(jī)制仍然不清楚，還有待于進(jìn)一步研究。

綜上所述，非梗阻性無(wú)精子癥患者既存在生精功能障礙，同時(shí)還伴有附睪和精囊腺分泌功能下降，精漿附睪和精囊腺特異性標(biāo)記物中性α-葡糖苷酶活性和果糖含量檢測(cè)可以不同程度地反映睪丸生精功能狀況。

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（收稿日期：2019-06-06 ?本文編輯：孟慶卿）