李小莉

【摘要】目的 探討miRNA-141對(duì)人牙周膜中成纖維細(xì)胞（hPDLF）的作用。方法 抑制miRNA-141后，使用qRT-PCR和Western blot檢測hPDLF的增殖能力。結(jié)果 miRNA-141在牙周炎hPDLF中顯著低表達(dá);使用miRNA-141 inhibitor抑制miRNA-141表達(dá)后，能夠顯著增加hPDLF中CyclinD1、C-myc蛋白表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 抑制miRNA-141表達(dá)能夠增加hPDLF的增殖。

【關(guān)鍵詞】miRNA-141;hPDLF;增殖

【中圖分類號(hào)】R781.4 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】ISSN.2095.6681.2019.34..01

牙周病主要是以牙周組織的損壞為特征的常見病，而人牙周膜成纖維細(xì)胞（hPDLF）是牙周組織的主要細(xì)胞。增加hPDLF的增殖能夠促進(jìn)牙周組織的再生，從而增加壓根與牙槽骨的連接，研究發(fā)現(xiàn)微小RNA（microRNA， miRNA）與hPDLF的增殖有著密切的關(guān)系，馬靜雯等[1]發(fā)現(xiàn)miRNA-145可能通過下調(diào)ROCK1的表達(dá)抑制hPDLF的遷移。miRNA是一種單鏈核苷酸，能夠與特定基因mRNA的3-UTR結(jié)合，從而調(diào)控細(xì)胞的生理功能。Mak CS [2]發(fā)現(xiàn)miR-141/KLF12可增強(qiáng)無神經(jīng)耐藥性。但是miRNA-141在hPDLF中的作用還不清楚。本文主要通過Western blot等技術(shù)研究miRNA-141對(duì)hPDLF增殖的影響。

1 方法

1.1 hPDLF的培養(yǎng)

選擇臨床9～30歲健康人和牙周炎患者恒牙。取牙膜組織并分離成小塊，于37℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

1.2 實(shí)時(shí)定量PCR （qRT-PCR）檢測細(xì)胞中miRNA-141的表達(dá)

使用TRIzol法提取總RNA，并使用試劑盒進(jìn)行qRT-PCR檢測。

1.3 Western blot檢測CyclinD1和c-myc蛋白表達(dá)

收集細(xì)胞，裂解、變性，并電泳、轉(zhuǎn)膜，與不同抗體孵育過夜后，孵育二抗1 h后，置于成像系統(tǒng)中拍照。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以x±s表示，兩組之間比較采用t檢驗(yàn)，以P<0. 05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

2 結(jié) 果

本課題首先使用qRT-PCR檢測miRNA-141的表達(dá)，如圖A所示，牙周炎患者的hPDLF中miRNA-141顯著高于健康組，且差異有顯著意義，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。如圖B所示， miRNA-141 inhibitor能夠顯著下調(diào)miRNA-141的表達(dá)。如圖C所示，hPDLF中癌基因Cyclin D1、C-myc表達(dá)顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

3 討 論

hPDLF是牙周膜組織中的主要效應(yīng)細(xì)胞，能夠通過自身的增殖降低牙周組織的壞死，還可以分化成成骨細(xì)胞。因此，如何增加hPDLF的增殖是治療和改善牙周病的關(guān)鍵。本研究發(fā)現(xiàn)，miRNA-141在牙周炎hPDLF中高表達(dá)。使用miRNA-141 inhibitor抑制miRNA-141表達(dá)后能夠顯著增加細(xì)胞增殖相關(guān)蛋白CyclinD1和C-myc的表達(dá)。周茜雯等[4]研究發(fā)現(xiàn)，箭根酮能夠明顯抑制LPS刺激的hPDLF增殖。綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)抑制miRNA-141表達(dá)可以增加hPDLF的增殖，從而改善牙周病組織微環(huán)境。這說明miR-141可以作為治療的靶點(diǎn)之一。

參考文獻(xiàn)

[1] 馬靜雯，宋 萌，潘勁松，等.miRNA-145通過下調(diào)ROCK1的表達(dá)抑制人牙周膜成纖維細(xì)胞的遷移[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2018，18（04）：606-609.

[2] Mak CS，Yung MM，Hui LM， et al.MicroRNA-141 enhances anoikis resistance in metastatic progression of ovarian cancer through targeting KLF12/Sp1/survivin axis [J].Mol Cancer，2017，16（1）：11-13.

[3] 周茜雯，曾 豪，張嘉昕，等.箭根酮對(duì)LPS刺激牙周膜成纖維細(xì)胞增殖能力的影響[J].口腔醫(yī)學(xué)研究，2018，34（06）：653-656.

本文編輯：趙小龍