李素素 周春祥，2

自然殺傷T(Natural killer T，NKT)細胞是一種可同時表達T細胞受體和NK細胞受體的特殊T淋巴細胞亞群，可識別CD1d分子呈現(xiàn)的脂類抗原[1]。雖然人和小鼠外周血中NKT細胞含量極少，但NKT細胞在肝癌、乳腺癌、結腸癌等多種惡性疾病的免疫應答中發(fā)揮積極調控作用[2-3]。而且肝臟是免疫器官，富含的NKT細胞是其他器官含量的20～100倍，可參與肝癌免疫應答[4]。最近研究發(fā)現(xiàn)在肝癌免疫應答中，NKT細胞有促腫瘤和抗腫瘤的雙重作用[5]。NKT細胞雙重調控作用主要與其分泌的細胞因子類型、NKT細胞所處免疫應答的階段和其激活物糖脂α-半乳糖神經酰胺(α-Galactosyl ceramide，α-Galcer)等多種因素相關[6-7]。本文就NKT細胞參與肝癌免疫調控作用相關研究機制進行綜述，以期對肝癌相關的實驗研究及臨床治療有一定幫助。

1 NKT細胞的分類

根據(jù)T細胞受體TCR鏈表達差異和抗原的特異性，將NKT細胞分為Ⅰ型和Ⅱ型NKT細胞。含有特殊TCRα鏈，表達半恒定TCR的NKT稱為恒定自然殺傷T(invariant NKT，iNKT)細胞，又稱經典NKT細胞，是Ⅰ型NKT細胞[8]，可識別CD1d分子呈現(xiàn)的脂類抗原α-Galcer。另一種NKT細胞有不同的TCRαβ鏈，不能識別α-Galcer，稱為多樣NKT(diverse NKT，dNKT)，是Ⅱ型NKT細胞[9]。Ⅰ型NKT細胞分為五種不同的功能子集，分別為Th1樣、Th2樣、Th17樣、Treg樣和Tfh樣NKT細胞。Ⅱ型NKT細胞分為兩種不同的功能子集[6]，分別為Th1樣和Th2樣。另有其他分類，如極化的NKT細胞最終分化為NKT1、NKT2和NKT17，并在特定組織中分布；如iNKT發(fā)育成5種不同功能的亞群：iNKT1、iNKT2、iNKT17、iNKT10和卵泡輔助iNKT(Follicular helper iNKT，iNKTfh)，每一亞群表達一種獨特的轉錄因子組合，激活時可調節(jié)細胞因子基因轉錄，產生一系列不同的細胞因子[10]。由此可見，NKT細胞主要按照其分泌的細胞因子類型、所在部位及抗原特異性來分類，雖然分類和相關描述不盡統(tǒng)一，但主要為以下分類：Ⅰ型NKT細胞分為iNKT1、iNKT2、iNKT10、iNKT17、iNKTfh和iNKTreg，Ⅱ型NKT細胞分為dNKT1和dNKT2，目前研究最多的是iNKT1、iNKT2、dNKT1和dNKT2細胞。

2 決定NKT細胞在腫瘤免疫中發(fā)揮雙重作用的因素

2.1 細胞因子類型

過去普遍認為，iNKT細胞參與抗癌免疫，dNKT細胞下調腫瘤免疫監(jiān)視，促進癌癥進展，這種認識過于籠統(tǒng)[5，11]，NKT細胞的功能和其分泌的細胞因子類型有關。iNKT2細胞可抑制腫瘤特定CD8+T細胞反應[12]，促進癌癥進展，dNKT1細胞亦可抗癌。NKT1(包括iNKT1和dNKT1)和NKT2(包括iNKT2和dNKT2)細胞分泌的細胞因子與Th1、Th2細胞分泌的因子一致，NKT1分泌Th1細胞因子，NKT2分泌Th2細胞因子。Th1細胞因子(促炎因子)有IL-1、IL-2、IL-12、TNF-α和IFN-γ，Th2細胞因子(抗炎因子)有IL-4、IL-10。Th1/Th2細胞因子在調節(jié)宿主免疫應答的各階段起著重要作用，所以NKT細胞的功能分別由其分泌的細胞因子決定。在腫瘤免疫方面，分泌Th1細胞因子的iNKT1、dNKT1主要起到抗癌作用，分泌Th2細胞因子的iNKT2、dNKT2起到促癌作用[6]。另有研究表明dNKT細胞通過抑制腫瘤免疫促進腫瘤進展，iNKT細胞可能抑制dNKT細胞的免疫抑制能力來抑制腫瘤發(fā)展[7]。因此NKT細胞分泌的細胞因子的抗癌和促癌作用，促使其在腫瘤免疫中發(fā)揮雙重調控作用。

2.2 NKT所處免疫應答階段

NKT1細胞在腫瘤發(fā)展早期啟動有效的抗腫瘤免疫應答，可快速刺激腫瘤特異性T細胞、DC細胞和效應NK細胞，這些細胞能快速清除腫瘤細胞。由于腫瘤不斷發(fā)展，NKT細胞暴露在慢性刺激中，因而部分NKT細胞消亡，剩余NKT細胞變成低反應性狀態(tài)，失去抗腫瘤功能，最終逐漸變化為免疫抑制性NKT2細胞亞群，從而促進免疫逃逸和腫瘤進展。并且失活狀態(tài)的NKT1細胞保持分泌Th2細胞因子的能力，其功能逐漸向免疫抑制的NKT2細胞傾斜，最終分泌Th2細胞因子促進腫瘤進一步發(fā)展[6]。

2.3 NKT細胞激活物α-Galcer的結構和功能

TCR-糖脂-CD1d復合物的親和性和穩(wěn)定性決定了α-Galcer及其類似物對NKT激活后的功能差異。在腫瘤耐受小鼠模型中，α-Galcer有強大的活性去激活iNKT1細胞，表現(xiàn)抗腫瘤效應。然而α-Galcer的類似物，如OCH，可刺激iNKT1細胞分泌大量的IL-4，含量超過IFN-γ，觸發(fā)Th2細胞因子免疫反應。另一種含苯基團的α-Galcer的類似物，在誘導Th1細胞/Th1細胞因子和人NKT細胞增殖方面，比α-Galcer更有效。α-Galcer在其?；溁蛑参锴受真溕系男揎椏烧{控iNKT細胞，產生不同含量的IL-4和IFN-γ，使免疫應答朝向Th1或Th2方向極化[7]。α-Galcer預處理可以使NKT細胞產生Th1或Th2細胞因子，使NKT1細胞向Th2或Treg樣NKT細胞傾斜。Th2/Treg樣NKT細胞產生大量的IL-10、IL-13，從而抑制腫瘤微環(huán)境，間接刺激腫瘤進展[6，13]。α-Galcer及類似物激活NKT的功能差異都和TCR-糖脂-CD1d復合物的親和性和穩(wěn)定性相關。因此NKT細胞是否向Th1或Th2方向傾斜，從而發(fā)揮抗腫瘤或者促腫瘤作用，取決于NKT細胞的激活物α-Galcer的結構和功能等。

3 NKT細胞在肝癌免疫中的雙向調控作用

3.1 NKT細胞的抗肝癌作用機制

3.1.1 NKT細胞表達CXCR6殺死肝癌細胞 激活的iNKT1細胞能以CD1d依賴的方式直接殺死腫瘤細胞[14]。幾乎所有肝臟上iNKT1細胞都能表達CXCR6，而CXCL16是CXCR6的唯一配體，肝臟中的CXCL16主要來源于肝竇內皮細胞[15]。用抗生素處理小鼠腸道微生物，可促使肝竇內皮細胞產生CXCL16，而CXCL16可以和NKT細胞的CXCR6結合，吸引更多NKT細胞聚集在肝臟，NKT細胞在肝臟大量聚集，產生抗腫瘤的IFN-γ，從而抑制肝癌的發(fā)生發(fā)展[16-18]。在二乙基亞硝胺誘導的小鼠肝癌腫瘤模型中，和野生型小鼠比較，CXCR6缺乏小鼠有更明顯的腫瘤負荷、更快的腫瘤進展，表現(xiàn)為肝內表達TNF-α、IFN-γ的iNKT1細胞和CD4+T細胞的減少。

3.1.2 NKT細胞清除衰老和變形的肝細胞 注射α-Galcer可激活NKT細胞，注射α-Galcer的野生型小鼠通過iNKT1細胞進行衰老肝細胞的清除。iNKT1細胞和CD4+T細胞可通過促進衰老肝細胞的清除，阻止肝癌的進展，這一過程需要CXCR6的參與[19]。由于肝癌通常由變形的肝細胞(Transformed hepatocyte)發(fā)展而來，清除變形的肝細胞可抑制肝癌的生長和進展。經過α-Galcer刺激，可激活體內肝NKT細胞和NK細胞，產生大量IFN-γ有效殺死變形的肝細胞，從而抑制肝癌的進展[20]。

3.1.3 NKT細胞抑制肝癌細胞生長 肝臟NKT細胞還可抑制轉移性肝癌的發(fā)生，肝巨噬細胞可產生巨噬(Macrophagocyte，M)細胞反應，M1巨噬細胞促進Th1反應，產生IL-12，IL-12可激活NK細胞和NKT1細胞，產生抗癌反應，抑制肝癌細胞生長，并且阻止轉移性肝癌的發(fā)生[21]。α-Galcer是影響iNKT活化及發(fā)揮腫瘤免疫調控的關鍵，可提高NKT細胞抗腫瘤免疫的能力。骨髓源樹突狀細胞(Dendritic cell，DC)和α-Galcer聯(lián)合誘導培養(yǎng)外周血NKT細胞，可使NKT細胞分泌高水平的IFN-γ[22]，α-Galcer處理的DC和肝癌細胞能夠激活體內NKT細胞，同時增加NKT細胞毒性，抑制肝癌的生長，提高小鼠生存周期[23]。DC荷載α-Galcer做為NKT細胞強有力的刺激劑，能夠激活小鼠外周血抗腫瘤免疫細胞、增加免疫細胞毒性，促進腫瘤細胞凋亡，有效的抑制了肝癌移植瘤的生長[24]。

3.2 NKT細胞的促肝癌作用機制

3.2.1 髓源性抑制細胞(Myeloid-derived suppressor cells，MDSCs)抑制NKT細胞抗腫瘤功能 NKT1細胞分泌IFN-γ產生抗腫瘤的功能，如受其他細胞或細胞因子的抑制，則失去抗肝臟腫瘤的功效。腫瘤源性轉化生長因子β(Transforming growth factor β，TGF-β)促進肝內CXCL1、CXCL2、CXCL5的表達來調節(jié)MDSCs向肝臟的募集。MDSCs可通過膜結合TGF-β有選擇地抑制NKT細胞所產生的IFN-γ，從而抑制NKT細胞的抗肝癌功能[25]。一些類型的腫瘤可脫落抑制性糖脂到腫瘤局部微環(huán)境中，抑制NKT細胞活性和功能，使其失去抗腫瘤功效，導致腫瘤不良預后。除此之外，調節(jié)性T細胞和NKT2細胞都可抑制腫瘤微環(huán)境中的NKT細胞活性和功能[11，26]。

3.2.2 NKT細胞分泌IL-13抑制抗腫瘤免疫應答 NKT2細胞抑制抗腫瘤免疫的現(xiàn)象最初在纖維肉瘤和乳腺癌小鼠模型中發(fā)現(xiàn)，后來陸續(xù)在結直腸癌、肝癌等腫瘤中發(fā)現(xiàn)[27-29]。dNKT2分泌IL-13，可介導Gr-1細胞產生TGF-β。盡管包括肝臟在內的多種器官腫瘤發(fā)生的早期階段，TGF-β起著抑制腫瘤的作用，但TGF-β可通過上調Snail促進小鼠肝臟腫瘤的發(fā)生[30-31]，還可通過分泌的IL-13抑制腫瘤特異CD8+T細胞及細胞毒性T淋巴細胞，來抑制腫瘤免疫監(jiān)視，進而促進腫瘤進展。肝M2巨噬細胞可通過釋放TGF-β來抑制NK細胞和NKT細胞的抗腫瘤特性，還可通過表達M2極性，參與腫瘤生長、進展和血管生成[21]。

3.2.3 NKT細胞分泌的LIGHT促進肝損傷和癌變 LIGHT是淋巴毒素β受體(LTβR)的配體，能激活肝實質細胞上的LTβR，導致脂肪攝取增加和脂肪變性。LIGHT能激活肝細胞NF-κB信號，促進肝細胞惡性轉化。肝NKT細胞積累一定程度后，通過分泌LIGHT(TFNSF14)促進非酒精性脂肪肝(Nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD)癌變[32]。在CD8+T細胞的協(xié)同下，NKT細胞可通過Light-LTβR信號通路有效地加強肝細胞內脂肪酸的攝入，使肝損傷加重，非酒精性脂肪肝炎惡化和促進肝癌進展。而選擇性移除肝細胞的LTβR或去除NKT細胞可減少CD-HFD介導的肝癌的發(fā)生[33]。

4 小結與展望

目前對NKT細胞在肝癌免疫調控方面研究最多的是NKT1和NKT2細胞，對NKT10、NKT17、NKTFH和NKTreg細胞研究甚少。NKT細胞在肝癌免疫調控中的作用，主要由其分泌的Th1和Th2細胞因子決定。分泌Th1細胞因子的NKT1細胞參與抗肝癌免疫應答，分泌Th2細胞因子的NKT2細胞引起肝癌細胞損傷和癌變，抑制免疫細胞監(jiān)視促進肝癌進展。肝臟NKT細胞可在一定條件下向Th1或Th2傾斜，從而具有截然不同的肝癌免疫應答反應[6]，如何調節(jié)肝臟中NKT細胞的Th1/Th2傾斜方向，促進其抗肝癌功效，逆轉其免疫抑制功能應是未來研究的方向。此外，NKT細胞參與肝癌免疫應答的進程受腸道菌群代謝的間接影響，通過調節(jié)腸道菌群代謝干預NKT細胞調控肝癌進展的功能，或是抗肝癌新療法[34]。