東知多杰 班瑪才仁 多杰 杜連平 孫躍寧

【摘?要】?目的：在部頒標(biāo)準(zhǔn)基礎(chǔ)上，更好地控制叢菔藥材的質(zhì)量，提升了叢菔的質(zhì)量控制方法和標(biāo)準(zhǔn)。方法：采用薄層色譜法，建立了β-谷甾醇的定性鑒別方法，運(yùn)用高效液相色譜法，建立了精氨酸的含量測(cè)定方法;并參照《中國(guó)藥典》2015年版附錄相關(guān)方法，對(duì)叢菔的水分、重金屬及水溶性浸出物進(jìn)行了測(cè)定。結(jié)果：實(shí)驗(yàn)測(cè)定及方法學(xué)研究結(jié)果證明，修訂后的叢菔薄層鑒別專屬性強(qiáng)，方法簡(jiǎn)單，可操作性強(qiáng)。精氨酸的含量在：0.0612～0.306μg，范圍內(nèi)線形關(guān)系良好，平均加樣回收率為97.0%（n=6），RSD=0.9%。結(jié)論：研究所建立的質(zhì)量控制方法及標(biāo)準(zhǔn)可以全面有效地控制叢菔的質(zhì)量。

【關(guān)鍵詞】?藏藥材;叢菔;質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn);精氨酸

【中圖分類號(hào)】R284.1???【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A????【文章編號(hào)】1007-8517（2019）24-0034-04

Improvement of Quality Standard of Frequently-used Tibetan Medicinal of Solms-Laubachia pulcherrima

DONG Zhiduojie1?Banma cairen1?DUO Jie1?DU Lianping1*?SUN Yuening2

1.Qinghai Instiute of Tibetan Medicine，Xining 810006，China;2.ARURA Tibetan Medicine co.， Ltd，Xi ning 810003，China

Abstract：Objective Based on the standards issued by the Ministry， in order to better control the quality of Solms-Laubachia pulcherrima and improve the quality control methods and standards of Solms-Laubachia pulcherrima.Methods The qualitative identification method of β-sitosterol was established by TLC， and the content determination method of arginine was established by HPLC. Heavy metals and water-soluble extracts were determined.Results The results of experimental measurement and methodological study show that the revised TLC method is specific， simple and operable. The content of arginine ranged from 0.0612 to 0.306μg， and the linear relationship was good. The average recovery of arginine was 97.0%（n=6） and RSD was 0.9%.Conclusion The quality control methods and standards established in this study can effectively control the quality of Solms-Laubachia pulcherrima.

Key?words：Tibetan medicinal herbs; Solms-Laubachia pulcherrima; Quality standard; Arginine

叢菔，藏藥名，始載于《醫(yī)學(xué)四續(xù)》，其曰：“無(wú)莖芥和叢菔，功效清肺熱?！盵1]《晶珠本草》記載：“本品分為3種，無(wú)莖芥（高山辣根菜）、叢菔、紅景天。青海藏醫(yī)常用十字花科寬果叢菔入藥，該種花藍(lán)紫色，果實(shí)長(zhǎng)而寬，扁平，鐮狀彎曲，形似弓套，易于識(shí)別[4]。

叢菔現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)載于《中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn) 藏藥》第一冊(cè)[5] 和《青海省藏藥炮制規(guī)范》2010年版[7]，質(zhì)量控制項(xiàng)目?jī)H限于性狀和顯微鑒別，由于藏醫(yī)口耳相傳的傳統(tǒng)以及地域環(huán)境不同導(dǎo)致對(duì)叢菔藥材的來(lái)源尚不明確，筆者在文獻(xiàn)資料的基礎(chǔ)上結(jié)合藏區(qū)各地對(duì)叢菔藥材的使用情況，確定了叢菔的藥材來(lái)源，為十字花科植物寬果叢菔Solms-laubachia pulcherrima （Maxim.） Bofsch.的干燥全草，并對(duì)其化學(xué)成分定性鑒別、水分和重金屬控制及含量測(cè)定方法進(jìn)行了詳細(xì)研究，為更好地控制叢菔藥材的質(zhì)量提供了依據(jù)。

1?儀器與試藥

1.1?儀器?超聲波清洗器（KQ-250型）;高效液相色譜儀（島津LC-20AT）; METTLER AG204萬(wàn)分之一分析天平，METTLER AX205十萬(wàn)分之一分析天平（瑞士梅特勒）; HH-4恒溫水浴鍋（上?？茖W(xué)儀器廠）;硅膠G薄層板（青島海洋化工廠）;TAS-986原子吸收分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司），GFH-986石墨爐電源，AFS-830原子熒光光度計(jì)（北京吉天儀器有限公司）。

1.2?試藥?迪馬C18色譜柱;β-谷甾醇對(duì)照品（批號(hào)：872-200204供含量測(cè)定用）;精氨酸對(duì)照品（批號(hào)：872-201304供含量測(cè)定用）;以上對(duì)照品購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品鑒定所;雙蒸餾水（自制）;乙腈、甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。鉛標(biāo)準(zhǔn)單元素溶液：標(biāo)準(zhǔn)值為1000μg·mL-1，證書編號(hào)為GBW08619;砷標(biāo)準(zhǔn)單元素溶液：標(biāo)準(zhǔn)值為1000μg·mL-1，證書編號(hào)為GBW08611;汞標(biāo)準(zhǔn)單元素溶液：標(biāo)準(zhǔn)值為1000μg·mL-1，證書編號(hào)為GBW08617;叢菔對(duì)照藥材（溯源樣品，采自青海貴南）：由青海藏醫(yī)學(xué)院尕瑪措尼教授鑒定為十字花科植物寬果叢菔Solms-laubachia pulcherrima （Maxim.） Bofsch.樣品信息詳見表1。

2?方法與結(jié)果

2.1?β-谷甾醇的TLC鑒別?取本品粉末2.0g，加三氯甲烷30mL，超聲處理（功率300W，頻率40khz）30min，濾過(guò)，濾液濃縮至2mL作為供試品溶液。另取叢菔對(duì)照藥材2.0g，同法制成對(duì)照藥材溶液。再取β-谷甾醇對(duì)照品適量，加乙醇制成每1mL含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。按TLC法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10μL，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷-丙酮 （25∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，并在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置日光和紫外光燈（254nm）下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的紫紅色斑點(diǎn)和熒光斑點(diǎn)（如圖1和圖2所示）。

2.2?檢查

2.2.1?水分?取叢菔藥材粉末（過(guò)3號(hào)篩）約2g，精密稱定，照水分測(cè)定法《中國(guó)藥典》2015年版一部附錄IXH第一法烘干法測(cè)定。每批平行測(cè)定2份，結(jié)果見表2。

2.2.1?重金屬檢測(cè)?隨機(jī)抽取9批樣本中3批原藥材，按照《中國(guó)藥典》2015年版一部附錄Ⅸ B項(xiàng)下（鉛、砷、汞）的測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定結(jié)果見表3。

2.3?浸出物測(cè)定?取叢菔藥材粉末（過(guò)3號(hào)篩）約2～4g，精密稱定，以水為溶劑，照水溶性浸出物測(cè)定法熱浸法測(cè)定，每批平行測(cè)定2份，測(cè)定結(jié)果見表2。

2.4?含量測(cè)定

2.4.1?色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)?用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;0.1mol·L-1醋酸鈉緩沖液（pH=6）-乙腈（84∶16）為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為360nm，柱溫30℃。理論板數(shù)按精氨酸峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。

2.4.2 ?對(duì)照品溶液的制備?精密稱取精氨酸對(duì)照品適量，加蒸餾水制成每1mL含0.2mg的溶液，即得精氨酸貯備液;精密吸取1.0mL貯備液于10mL量瓶中，加入0.5mol·L的碳酸氫鈉溶液和1%DNFB乙腈溶液各1mL，避光，于60℃水浴上反應(yīng)30min，取出，冷卻，以0.05mol·L磷酸鹽緩沖溶液（pH=6.8）定容，即得20.0μg·mL-1的對(duì)照品溶液。

2.4.3?供試品溶液的制備?取1g蓯菔藥材粉末，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入20mL水，稱定重量，超聲30min，再稱定重量，用水補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過(guò)濾，取2.0mL續(xù)濾液于10mL容量瓶中，加入0.5mol·l-1碳酸氫鈉溶液和1%DNFB乙腈溶液各1mL，避光，于60℃水浴上反應(yīng)30min，取出，冷卻，以磷酸鹽緩沖液定容，即得供試品溶液。[8]

2.4.4?提取方法考察?對(duì)樣品分別進(jìn)行超聲處理、回流提取，結(jié)果超聲處理的效果最好，可消除對(duì)所有待測(cè)組分的干擾并且含量較高。結(jié)果見表4。

2.4.5?測(cè)定波長(zhǎng)的選擇?取對(duì)照品溶液和供試品溶液分別在190～400nm的波長(zhǎng)內(nèi)測(cè)吸光度，結(jié)果在360nm處有最大吸收，故選此波長(zhǎng)為測(cè)定波長(zhǎng)。

2.4.6?線性關(guān)系的考察?精密吸取對(duì)照品溶液3、6、9、12、15μL注入液相色譜儀測(cè)定，按2.?1項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定峰面積，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（X），以峰面積的積分值為縱坐標(biāo)（Y）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得精氨酸回歸方程為Y=229766X-41832.50，r=0.9992。結(jié)果表明，在上述色譜條件下，精氨酸在0.0612～0.306μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。結(jié)果見表5。

2.4.7?精密度試驗(yàn)?精密吸取精氨酸對(duì)照品溶液10μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)得精氨酸峰面積RSD為1.4%。表明儀器進(jìn)樣精密度良好。結(jié)果見表6。

2.4.8?穩(wěn)定性試驗(yàn)?精密吸取樣品溶液10μL，分別于2，6，8，10，12h進(jìn)樣，測(cè)定精氨酸的含量，結(jié)果RSD為1.8%，即樣品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。結(jié)果見表7。

2.4.9?重現(xiàn)性試驗(yàn)?取不同批次樣品5份，按【含量測(cè)定】項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，測(cè)定含量RSD為1.3%，表明該方法的重現(xiàn)性良好。結(jié)果見表8。

2.4.10?回收率試驗(yàn)?取已知含量的樣品6份，精密加入精氨酸對(duì)照品溶液，按樣品制備方法和測(cè)試條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算得平均回收率為97.0%，RSD為0.9%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表9。

2.4?樣品測(cè)定?取1g樣品粉末，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入20mL水，稱定重量，超聲30min，再稱定重量，用水補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過(guò)濾，取2.0mL續(xù)濾液于10mL容量瓶中，加入0.5mol·l-1碳酸氫鈉溶液和1%DNFB乙腈溶液各1mL，避光，于60℃水浴上反應(yīng)30min，取出，冷卻，以磷酸鹽緩沖液定容，即得。吸取10μL進(jìn)樣，測(cè)定，結(jié)果3批樣品（2個(gè)平行樣）中精氨酸平均含量為0.314%。結(jié)果見表10。

3?討論

3.1?薄層色譜?研究過(guò)程中分別對(duì)叢菔所含不同成分（亞油酸、亞麻酸）的進(jìn)行了薄層色譜分析，但始終效果不理想，只有β-谷甾醇的薄層色譜圖較為清晰，易于辨認(rèn)，效果較好，通過(guò)對(duì)展開系統(tǒng)的篩選，分別以三氯甲烷-丙酮 （25∶1）、乙酸乙酯-丙酮 （20∶6） 、三氯甲烷-乙酸乙酯-丙酮 （12∶7∶3）等展開系統(tǒng)進(jìn)行試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)以三氯甲烷-丙酮 （25∶1）展開后效果最佳，Rf值符合要求;分別用10%硫酸乙醇溶液和香草醛硫酸溶液進(jìn)行顯色實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)10%硫酸乙醇溶液效果較好，斑點(diǎn)清晰，在日光下及紫外燈下均可見清晰斑點(diǎn)，說(shuō)明本方法專屬性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)便，方法穩(wěn)定。

3.2?水分?按中國(guó)藥典2010年版一部附錄IXH第一法烘干法測(cè)定9批樣品水分，根據(jù)測(cè)定結(jié)果顯示，暫定水分不得過(guò)12.0%。

3.3?重金屬?3批樣品檢測(cè)結(jié)果顯示重金屬含量非常小，未超限度。由于藥材中的重金屬與產(chǎn)地的自然生態(tài)環(huán)境土壤、水分及空氣中的重金屬含量有直接的關(guān)系，叢菔主要生長(zhǎng)在海拔3500～4500m的高山砂質(zhì)土或巖石隙縫中，高海拔，重金屬無(wú)污染，控制藥材重金屬意義不大，故可暫列入標(biāo)準(zhǔn)正文。

3.4?浸出物?本研究依據(jù)藥典中關(guān)于浸出物的方法，分別對(duì)藥材進(jìn)行了冷浸法和熱浸法的測(cè)定試驗(yàn)，結(jié)果表明熱浸法優(yōu)于冷浸法，且乙醇和水為溶劑的熱浸法比較顯示，以水為溶劑效果更好，因此選用以水為溶劑的熱浸法為浸出物測(cè)定方法。

3.5?含量測(cè)定?關(guān)于叢菔藥材的定量測(cè)定方面研究資料很少，巴桑旺姆等[8]曾用HPLC法測(cè)定叢菔藥材的精氨酸含量，筆者在上述方法的基礎(chǔ)上增加了樣品量，并對(duì)樣品制備方法和流動(dòng)相進(jìn)行了調(diào)整，使得精氨酸的分離度更好，準(zhǔn)確度更高。鑒于考慮叢菔藥材中精氨酸的含量有所差異且9批樣品所得平均值后，故規(guī)定本品按干燥品計(jì)算，含精氨酸（C6H14N4O2）不得少于0.20%。

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（收稿日期：2019-10-09?編輯：陶希睿）