宋興 戚務(wù)芳

【摘 要】 調(diào)節(jié)性B細胞（Bregs）的主要免疫抑制作用是經(jīng)分泌白細胞介素-10產(chǎn)生的。人類Bergs的表型主要是CD19+CD24hiCD38hi和CD19+CD24hiCD27+。目前，研究Bregs的調(diào)控主要經(jīng)過Toll樣受體、BAFF/APRIL這兩條信號通路。Bregs在類風濕關(guān)節(jié)炎中數(shù)量減少，功能受損，與疾病活動性相關(guān)。Bregs有可能幫助判斷類風濕關(guān)節(jié)炎預(yù)后和生物制劑選擇，并可能成為治療的新靶點。

【關(guān)鍵詞】 關(guān)節(jié)炎，類風濕;調(diào)節(jié)性B細胞;白細胞介素-10;免疫抑制;治療;綜述

B細胞在類風濕關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis，

RA）中起著重要作用，包括產(chǎn)生抗體（如類風濕因子、抗環(huán)瓜氨酸肽抗體），分泌細胞因子，呈遞抗原和調(diào)節(jié)T細胞功能[1]。近些年，具有免疫調(diào)節(jié)功能的B細胞在RA的研究中越來越受到關(guān)注。根據(jù)其功能，這類B細胞被命名為調(diào)節(jié)性B細胞（Bregs）[2]。Bregs可通過分泌細胞因子[白細胞介素（IL）-10、轉(zhuǎn)化生長因子-β（TGF-β）和IL-35等]抑制免疫反應(yīng)。目前研究認為，Bregs可能對RA的發(fā)病、疾病活動及治療具有重要的影響。本文將對Bregs表型、調(diào)控機制及在RA中的研究進展進行綜述。

1 Bregs的由來

1974年，NETA等[3]發(fā)現(xiàn)，在遲發(fā)性超敏反應(yīng)豚鼠模型中存在一種能夠抑制T細胞免疫活性的B細胞。MIZOGUCHI等[4]在炎癥性腸病模型中發(fā)現(xiàn)了B細胞的免疫負向調(diào)節(jié)作用，并率先提出“Breg”一詞。之后的研究發(fā)現(xiàn)，Bregs主要是通過分泌IL-10、TGF-β等細胞因子抑制免疫反應(yīng)，也可以通過與靶細胞膜表面分子（Fasl、GITRL和PD-L1等）的相互作用調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答。因為Bregs的主要免疫抑制作用是經(jīng)分泌IL-10產(chǎn)生的，所以部分研究也將其命名為B10細胞[5]。

2 IL-10

IL-10是一種多細胞源、多功能的細胞因子，調(diào)節(jié)細胞的生長與分化，參與炎性反應(yīng)和免疫反應(yīng)，是目前公認的炎癥與免疫抑制因子。1989年，MOSMANNAND及他的同事描述了一種新的免疫介質(zhì)，由Th2細胞克隆分泌，能夠抑制Th1細胞克隆IL-2和干擾素-γ（IFN-γ）的合成，早期被命名為細胞因子合成抑制因子（CSIF），這種因子后來被命名為IL-10[6]。幾乎所有淋巴細胞均能合成IL-10，如單核巨噬細胞、T細胞、B細胞等。人類IL-10基因位于1號染色體上，存在多種基因型，目前研究較多的是IL10.G和IL10.R[7]。IL-10可促進輔助性T細胞向Th2分化，并且抑制其向Th1的分化。IL-10的基因多態(tài)性與多種疾病相關(guān)，在這些疾病的發(fā)生、發(fā)展過程中起到重要作用。B細胞經(jīng)Toll樣受體（TLRs）誘導(dǎo)可產(chǎn)生IL-10，而抑制STAT3和ERK的活化可明顯減少TLRs誘導(dǎo)產(chǎn)生的IL-10[8]。

在RA中血清IL-10水平較正常人升高。IL-10似乎發(fā)揮了雙重作用，一方面可以抑制炎癥因子，另一方面可以激活體液免疫反應(yīng)[9]。有研究利用IL-10的免疫抑制作用治療RA，但未取得滿意的療效。分析其原因，人工合成IL-10的半衰期為2.7～4.5 h，半衰期較短;而且體內(nèi)存在復(fù)雜的調(diào)節(jié)、反饋機制，使外源性IL-10難于達到靶細胞、組織發(fā)揮免疫抑制作用。因此，目前研究利用F8-IL10人重組免疫細胞因子治療RA進入臨床試驗階段[10]。F8為一種可以特異性結(jié)合纖維連接蛋白的抗體，它可以將連接的IL-10帶到關(guān)節(jié)病灶處發(fā)揮作用。

3 Bregs的表型

區(qū)別于調(diào)節(jié)性T細胞（Tregs）明確的細胞表型（CD4+CD25+Foxp3+），目前Bregs尚無明確的特異性細胞表型。對于Bregs表型的確定，主要為具有分泌IL-10功能的B細胞亞群。不同文獻報道Bregs的表型繁多。較為公認的，在鼠類為CD19+CD1dhiCD5+，在人類主要表型為CD19+CD24hiCD38hi和CD19+CD24hiCD27+的B細胞[11]。CD19+CD24hiCD38hiB細胞也被稱為“過渡期B細胞”，占外周血B細胞比例約10%，其包含了約71%的CD19+CD1dhiCD5+B細胞。而CD19+CD24hiCD27+中60%表達CD38+，其中40%的B細胞可能是祖B細胞，具有分化為分泌IL-10的B細胞的潛能[12]。

另外，CD25hiCD71hiCD73-、CD19+CD1dhiCD5+、

CD39+CD73+或CD25hiCD27hiCD86hiCD1dhiTGFβhi均有報道可用來標記分泌IL-10的Bregs[13]。

4 Bregs的功能

目前研究認為，Bregs是一種具有免疫調(diào)節(jié)作用的B細胞亞群，主要通過分泌IL-10發(fā)揮免疫抑制作用。Bregs可以抑制炎癥性Th1和Th17的分化，誘導(dǎo)Tregs通過抑制IFN-γ和腫瘤壞死因子-α（TNF-α）阻止自身免疫反應(yīng)[14]。而另一方面，Bregs也可通過抑制CD8+T細胞和自然殺傷細胞的殺傷作用從而阻礙病原體和腫瘤細胞的清除[15]。

5 Bregs的調(diào)控

Bregs的調(diào)控可分為內(nèi)源性調(diào)控、外源性調(diào)控[16]。內(nèi)源性調(diào)控包括B細胞膜表面的Toll樣受體（TLRs）、CD40、Tim-1、BCR和CD19及其下游信號通路的激活能誘導(dǎo)初始B細胞向Bregs方向的分化。外源性調(diào)控包括細胞因子B淋巴細胞刺激因子（BAFF）、IL-21、IL-6、IL-1β、IL-35、TGF-β和Ⅰ型干擾素（IFN-α/β）也具有誘導(dǎo)Bregs分化的功能。此外，凋亡細胞和體內(nèi)特殊的微環(huán)境對Bregs的誘導(dǎo)也十分重要[17]。因為其中TLRs、BAFF/增殖誘導(dǎo)配體（APRIL）是公認最重要的調(diào)節(jié)通路，且相關(guān)研究較多。

5.1 TLRs TLRs作為一類信號轉(zhuǎn)導(dǎo)受體，參與B細胞的活化。越來越多的證據(jù)表明，它們與自身免疫病的發(fā)病關(guān)系密切[18]。研究顯示，TLR7、TLR9分別通過其配體R848、CpG活化可誘導(dǎo)產(chǎn)生分泌IL-10的Bregs[19-20]。進一步研究分子機制，TLR7、TLR9通過接頭蛋白MyD88經(jīng)STAT3和ERK通路促進B細胞分泌IL-10，而阻滯STAT3或ERK活化可明顯抑制IL-10的分泌。INF-α僅對TLR7通路的STAT3和ERK有活化作用，對TLR9通路無促進作用[21]。另外有研究發(fā)現(xiàn)，一種非典型的IκB蛋白（IκBNS）經(jīng)TLRs通路參與了Bregs的分化[22]，敲除IκBNS的小鼠生成IL-10的B細胞明顯減少，且Prdm1和Irf4表達下降，不能生成分泌IL-10的CD138+漿細胞。

5.2 BAFF/APRIL BAFF和APRIL均屬于TNF家族成員，后者是前者的同源物。BAFF受體包括3種：BAFF受體（BAFF-R）、B細胞成熟抗原（BCMA）和轉(zhuǎn)膜激活劑-鈣調(diào)節(jié)劑-親環(huán)素配體相互作用物（TACI）。BAFF可與3種受體結(jié)合，而APRIL只能與TACI、BCMA結(jié)合。BAFF對于B細胞的成熟和存活具有至關(guān)重要的作用。研究報道，BAFF可通過TACI調(diào)節(jié)Bregs的分化，促進IL-10的分泌[23]。在BAFF轉(zhuǎn)基因小鼠實驗中，TLRs的表達受TACI的調(diào)控，敲除掉TACI的小鼠B細胞分泌IL-10明顯減少[24]。另有報道，APRIL在TLR9-CpG刺激下可活化STAT3，促進Bregs分泌，其作用強于BAFF，相關(guān)受體TACI表達上調(diào)，BAFFR表達下降[25]。

6 Bregs在RA中的作用

目前，關(guān)于Bregs在RA中發(fā)揮的作用逐漸成為研究的熱點，但Bregs的作用機制及對于RA診斷、治療、預(yù)后的影響尚未明確。研究報道，在RA中Bregs在數(shù)量和功能上均發(fā)生了改變[26-27]，但研究結(jié)論并不一致。FLORES-BORJA等[28]研究顯示，RA患者CD19+CD24hiCD38hiB細胞不能將CD4+CD25-T細胞轉(zhuǎn)化為具有免疫抑制功能的Tregs，而且活動期RA患者外周血CD19+CD24hiCD38hiB細胞數(shù)量少于穩(wěn)定期RA和健康人。提示活動期RA的CD19+CD24hiCD38hiB細胞免疫調(diào)節(jié)功能受損，不能阻止自身免疫反應(yīng)和炎癥進展，從而導(dǎo)致RA發(fā)生。有研究報道，病程少于5年的RA患者其CD24hiCD38hiB細胞、CD24hiCD27+、CD5+B細胞數(shù)量與健康人類似，但分泌IL-10的B細胞（B10）水平低于健康人，且B10水平與DAS28、類風濕因子、C-反應(yīng)蛋白呈負相關(guān)，提示B10水平影響RA病情，反映疾病活動度[29]。我國研究人員發(fā)現(xiàn)，與健康對照組相比，RA患者外周血CD19+CD24hiCD38hiB細胞比例顯著降低，其分泌IL-10水平顯著降低，導(dǎo)致免疫抑制功能降低，進而引起CD4 T細胞比例升高和IFN-γ水平升高，影響RA病情進展[26]。

Bregs還可以異位表達RANKL[30]。在RA時表達RANKL的Bregs明顯增加，其比例與疾病活動度、腫脹關(guān)節(jié)數(shù)呈正相關(guān)，且與表達IL-10的Bregs呈負相關(guān)。表達RANKL的Bregs明顯促進骨破壞、骨侵蝕。有趣的是，隨著有效治療和病情的緩解，生成IL-10的Bregs增加，這種表達RANKL的Bregs逐漸減少。提示調(diào)節(jié)Bregs的分泌狀態(tài)可能對RA治療有效。

目前對于RA患者Bregs的調(diào)控研究較少。有研究認為，與健康人群相似，TLR9、CD40、IL-21對于RA患者B細胞產(chǎn)生IL-10存在促進作用。TLR9、CD40通過活化CREB通路，IL-21通過活化STAT3，協(xié)同調(diào)節(jié)Bregs分泌IL-10[31]。

治療始終是醫(yī)生最為關(guān)注的一個問題。Bregs有可能幫助判斷RA預(yù)后和生物制劑選擇[32]?；€時CD24hiCd27+Breg水平與治療6個月后DAS28緩解率呈正相關(guān)，具有提示Abatacept治療能否有效的作用[33-34]。考慮到IL-10的免疫調(diào)節(jié)作用，曾認為IL-10將會是一種有效的RA治療藥物。但相關(guān)的臨床藥物試驗證實外源性IL-10對于RA治療效果并不理想。分析原因，有學(xué)者認為IL-10半衰期短，且在人體內(nèi)代謝復(fù)雜，故認為促進Bregs生成分泌內(nèi)源性IL-10，可能對于控制RA更為有效[35-36]。

7 小結(jié)與展望

總之，因為Bregs具有免疫抑制作用，目前已成為自身免疫性疾病研究的一個重要靶點。Bregs在RA中數(shù)量減少，功能受損，故可能對RA的發(fā)生、發(fā)展、預(yù)后產(chǎn)生重要影響。但Bregs尚無明確的特異性表型，作用機制還需進一步完善，特別是在RA中Bregs信號通路的調(diào)控尚不明確。隨著研究的不斷深入，未來Bregs很有可能成為RA治療的新靶點。

8 參考文獻

[1] PALA O，DIAZ A，BLOMBERG BB，et al.B Lymphocytes in Rheumatoid Arthritis and the Effects of Anti-TNF-alpha Agents on B Lymphocytes：A Review of the Literature[J].Clin Ther，2018，40（6）：1034-1045.

[2] RINC?N-AR?VALO H，SANCHEZ-PARRA CC，CASTA?O D，et al.Regulatory B Cells and Mechanisms[J].Int Rev Immunol，2016，35（2）：156-176.

[3] NETA R，SALVIN SB.Specific suppression of delayed hypersensitivity： the possible presence of a suppressor B cell in the regulation of delayed hypersensitivity[J].J Immunol，1974，113（6）：1716-1725.

[4] MIZOGUCHI A，MIZOGUCHI E，SMITH RN，et al.Suppressive role of B cells in chronic colitis of T cell receptor alpha mutant mice[J].J Exp Med，1997，186（10）：1749-1756.

[5] WASIK M，NAZIMEK K，BRYNIARSKI K.Regulatory B cell phenotype and mechanism of action：the impact of stimulating conditions[J].Microbiol Immunol，2018，62（8）：485-496.

[6] WANG T，MEI Y，LI Z.Research Progress on Regulatory B Cells in Systemic Lupus Erythematosus[J].Biomed Res Int，2019，2019（1）：1-7.

[7] MALUTAN AM，DRUGAN C，WALCH K，et al.The association between interleukin-10（IL-10）-592C/A，-819T/C，-1082G/A promoter polymorphisms and endometriosis[J].Arch Gynecol Obstet，2017，295（2）：503-510.

[8] MIGUEZ JSG，DELA JUSTINA V，BRESSAN AFM，et al.O-Glycosylation with O-linked beta-N-acetylglucosamine increases vascular contraction：Possible modulatory role on Interleukin-10 signaling pathway[J].Life Sci，2018，209（15）：78-84.

[9] BERTI FCB，PEREIRA APL，CEBINELLI GCM，et al.

The role of interleukin 10 in human papilloma virus infection and progression to cervical carcinoma[J].Cytokine Growth Factor Rev，2017（34）：1-13.

[10] BRUIJNEN STG，CHANDRUPATLA DMSH，GIOVANONNI L，et al.F8-IL10：A New Potential Antirheumatic Drug Evaluated by a PET-Guided Translational Approach[J].Mol Pharm，2019，16（1）：273-281.

[11] 陶磊，王鏗，張悅陽，等.調(diào)節(jié)性B細胞亞群及其相關(guān)表面標志[J].細胞與分子免疫學(xué)雜志，2017，33（3）：406-409.

[12] 李記，李建紅，石連杰.調(diào)節(jié)性B細胞在類風濕關(guān)節(jié)炎中的研究進展[J].中華醫(yī)學(xué)雜志，2017，97（29）：2311-2313.

[13] SAKKAS L I，DAOUSSIS D，MAVROPOULOS A，et al.

Regulatory B cells：New players in inflammatory and autoimmune rheumatic diseases[J].Semin Arthritis Rheum，2019，48（6）：1133-1141.

[14] VAN DE VEEN W.The role of regulatory B cells in allergen immunotherapy[J].Curr Opin Allergy Clin Immunol，2017，17（6）：447-452.

[15] GEGINAT J，LARGHI P，PARONI M，et al.The light and the dark sides of Interleukin-10 in immune-mediated diseases and cancer[J].Cytokine Growth Factor Rev，2016（30）：87-93.

[16] 呂揚，張鵬.調(diào)節(jié)性B細胞的相關(guān)研究進展[J].天津醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2017，23（2）：178-181，185.

[17] 馬孔陽，呂力為.調(diào)節(jié)性B細胞的功能及其調(diào)控機制研究進展[J].中國免疫學(xué)雜志，2016，32（7）：929-938.

[18] PAWARIA S，SHARMA S，BAUM R，et al.Taking the STING out of TLR-driven autoimmune diseases：

good，bad，or indifferent？[J].J Leukoc Biol，2017，101（1）：121-126.

[19] JENKS SA，CASHMAN KS，ZUMAQUERO E，et al.Distinct Effector B Cells Induced by Unregulated Toll-like Receptor 7 Contribute to Pathogenic Responses in Systemic Lupus Erythematosus[J].Immunity，2018，49（4）：725-739.

[20] IMBRECHTS M，DE SAMBLANCX K，F(xiàn)IERENS K，et al.

IFN-gamma stimulates CpG-induced IL-10 production in B cells via p38 and JNK signalling pathways[J].Eur J Immunol，2018，48（9）：1506-1521.

[21] LIU B，CAO Y，HUIZINGA TW，et al.TLR-mediated STAT3 and ERK activation controls IL-10 secretion by human B cells[J].Euro J Immunol，2014，44（7）：2121-2129.

[22] MIURA M，HASEGAWA N，NOGUCHI M，et al.The atypical IkappaB protein IkappaB（NS）is important for Toll-like receptor-induced interleukin-10 production in B cells[J].Immunology，2016，147（4）：453-463.

[23] SAULEP-EASTON D，VINCENT FB，QUAH PS，et al.

The BAFF receptor TACI controls IL-10 production by regulatory B cells and CLL B cells[J].Leukemia，2016，30（1）：163-172.

[24] LIU L，INOUYE KE，ALLMAN WR，et al.TACI-Deficient Macrophages Protect Mice Against Metaflammation and Obesity-Induced Dysregulation of Glucose Homeostasis[J].Diabetes，2018，67（8）：1589-1603.

[25] HUA C，AUDO R，YEREMENKO N，et al.A proliferation inducing ligand（APRIL）promotes IL-10 production and regulatory functions of human B cells[J].J Autoimmun，2016，73（29）：64-72.

[26] 于文文，趙東寶.類風濕關(guān)節(jié)炎患者外周血調(diào)節(jié)性B細胞比例及功能變化的研究[J].中華全科醫(yī)學(xué)，2016，14（11）：1794-1797，1862.

[27] BANK? Z，POZSGAY J，G?TI T，et al.Regulatory B cells in rheumatoid arthritis：Alterations in patients receiving anti-TNF therapy[J].Clin Immunol，2017，184（12）：63-69.

[28] FLORES-BORJA F，BOSMA A，NG D，et al.CD19+CD-

24hiCD38hi B cells maintain regulatory T cells while limiting TH1 and TH17 differentiation[J].Sci Transl Med，2013，5（173）：17-23.

[29] DAIEN CI，GAILHAC S，MURA T，et al.Regulatory B10 Cells Are Decreased in Patients With Rheumatoid Arthritis and Are Inversely Correlated With Disease Activity[J].Arthritis Rheumatol，2014，66（8）：2037-2046.

[30] HU F，LIU H，LIU X，et al.Pathogenic conversion of regulatory B10 cells into osteoclast-priming cells in rheumatoid arthritis[J].J Autoimmun，2017（76）：53-62.

[31] BANK? Z，POZSGAY J，SZILI D，et al.Induction and Differentiation of IL-10-Producing Regulatory B Cells from Healthy Blood Donors and Rheumatoid Arthritis Patients[J].J Immunol，2017，198（4）：1512-1520.

[32] SALOMON S，GUIGNANT C，MOREL P，et al.Th17 and CD24hiCD27+ regulatory B lymphocytes are biomarkers of response to biologics in rheumatoid arthritis[J].

Arthritis Res Ther，2017，19（1）：33.

[33] NAKACHI S，SUMITOMO S，TSUCHIDA Y，et al.Interleukin-10-producing LAG3+ regulatory T cells are associated with disease activity and abatacept treatment in rheumatoid arthritis[J].Arthritis Rese Ther，2017，19（1）：97.

[34] LORENZETTI R，JANOWSKA I，SMULSKI CR，et al.

Abatacept modulates CD80 and CD86 expression and memory formation in human B-cells[J].J Autoimmun，2019，101（1）：145-152.

[35] LEE YS，LEE SY，PARK SY，et al.Cilostazol add-on therapy for celecoxib synergistically inhibits proinflammatory cytokines by activating IL-10 and SOCS3 in the synovial fibroblasts of patients with rheumatoid arthritis[J].

Inflammopharmacology，2019，27（6）：1205-1216.

[36] TIAN S，YAN Y，QI X，et al.Treatment of typeⅡcollagen-induced rat rheumatoid arthritis model by Interleukin 10（IL10）-mesenchymal stem cells（BMSCs）[J].Med Sci Monit，2019，25（21）：2923-2934.

收稿日期：2019-08-09;修回日期：2019-10-12