楊育英 朱少美 劉集鴻 周瀟 張麗科

(惠州市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，惠州 516003)

宮頸癌是全球女性的第四大常見(jiàn)惡性腫瘤，每年新發(fā)病例有528000例，死亡數(shù)高達(dá)266000例，嚴(yán)重威脅女性健康，受到廣泛的重視[1]。研究證實(shí)，人乳頭瘤病毒(human papilloma virus, HPV)的持續(xù)感染是引起女性宮頸癌的主要病因，然而不同基因亞型對(duì)其發(fā)生發(fā)展影響不同[2-3]。據(jù)報(bào)道，目前已分離鑒定的HPV亞型就有100多種，能感染女性生殖道的有40多種，根據(jù)致病性的差異，分為高危型和低危型，其中低危型主要與外生殖器尖銳濕疣相關(guān)，而高危型與宮頸癌和癌前病變密切相關(guān)[4]。研究表明，不同地區(qū)的感染類型差異較大[5]，對(duì)不同地區(qū)進(jìn)行HPV基因型的篩查具有十分重大的意義。因此，本研究針對(duì)廣東惠州地區(qū)女性體檢人群，用流式熒光技術(shù)進(jìn)行HPV感染情況的篩查，分析其型別特征年齡分布特點(diǎn)及宮頸病變，為該地區(qū)宮頸癌的早期發(fā)現(xiàn)、預(yù)防和控制提供有力的流行病學(xué)數(shù)據(jù)及參考。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象

2016年8月—2017年6月來(lái)廣東省惠州市第一人民醫(yī)院體檢中心就診的702例女性人群，年齡范圍在19～77歲(中位年齡41歲)，準(zhǔn)入標(biāo)準(zhǔn)為無(wú)宮頸癌、無(wú)宮頸手術(shù)史、無(wú)盆腔放射治療史，目前無(wú)妊娠。按年齡區(qū)間分為≤30歲、31～40歲、41～50歲、≥50歲年齡組，例數(shù)分別是91、237、271、103例。702例體檢女性均進(jìn)行了HPV分型檢測(cè)，其中92例HPV分型陽(yáng)性患者同時(shí)進(jìn)行了液基薄層細(xì)胞檢測(cè)(thinprep cytologic test, TCT)。

1.2 標(biāo)本采集

用一次性使用無(wú)菌宮頸取樣器插入宮頸外口順時(shí)針轉(zhuǎn)動(dòng)4～5圈，采集宮頸表面及宮頸管內(nèi)的脫落細(xì)胞，然后將取樣器置于上海透景生命科技股份有限公司專用的細(xì)胞保存液中，在管口處沿刷柄折斷，刷頭留在保存液中，做好標(biāo)識(shí)，-20℃保存。

1.3 HPV分型

取出含宮頸脫落細(xì)胞的待處理標(biāo)本，將在室溫下完全溶解，震蕩混勻，取1mL樣品13000r/min離心5min，棄上清，用1mL生理鹽水進(jìn)行清洗后，用透景公司的核酸提取盒進(jìn)行核酸提取，用人乳頭瘤病毒核酸分型檢測(cè)試劑盒(流式熒光雜法)經(jīng)Luminex 200的流式熒光儀檢測(cè)后進(jìn)行分型，步驟參考試劑說(shuō)明書(shū)?？设b定27種人乳頭瘤病(HPV)的基因型，包括高危型(1種)：16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68、26、53和82，低危亞(1種)：6、11、40、42、43、44、55、61、81和83。

1.4 TCT檢測(cè)

由病理科細(xì)胞學(xué)專職醫(yī)師待檢宮頸脫落細(xì)胞標(biāo)本經(jīng)制片、95%酒精固定、染色后鏡檢。根據(jù)2001年國(guó)際防癌協(xié)會(huì)推薦的TBS(the bethesda system)分級(jí)診斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行閱片。TBS分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：未見(jiàn)上皮內(nèi)病變細(xì)胞(negative for intraepithelial lesion or malignancy,NIM)，非典型鱗狀細(xì)胞(atypical squamous cells,ASC)，低度鱗狀上皮內(nèi)病變(low-grade squamous intraepithelial lesion, LSIL)，非典型鱗狀細(xì)胞不能排除高級(jí)別上皮內(nèi)病變(atypical squamous cells incapable of excluding high-grade squamous intraepithelial lesion,ASCH)，高度鱗狀上皮內(nèi)病變(high-grade squamous intraepithelial lesion, HSIL)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

用SPSS 21.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，組間用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果

2.1 HPV基因型分布情況

女性體檢人群HPV總感染率為14.4%(101例/702例)，單一感染、多重感染分別占82.2%(83例/101例)、17.8%(18例/101例)。HPV單一感染共83例，以高危亞型為主，占83.1%(69例/83例)，前3位感染亞型分別是52(24.1%，20例/83例)、16(10.8%，9例/83例)和58(10.8%，9例/8例)。HPV單一感染中16.9%(14例/83例)是低危亞型，前3位感染亞型分別是81(4.8%，4例/8例)、43(3.6%，3例/83例)、61(3.6%，3例/83例)。多重亞型感染18例，有2種、3種、4種亞型混合感染，分別占多重亞型感染人數(shù)的55.6%(10例/18例)、33.3%(6例/18例)、11.1%(2例/18例)。多重亞型感染人群中含高危亞型占89.7(17例/18例)，僅1例不含高危亞型感(40，43，44型)(表1)。

2.2 HPV感染的年齡特征

702例女性體檢人群的年齡范圍在19～77歲(中位年齡41歲)，按如表2所示，年齡區(qū)間分為≤30歲、31～40歲、41～50歲、>50歲年齡組，例數(shù)分別是91、237、271和103例，HPV陽(yáng)性率分別為18.7%、14.4%、14.0%和11.7%，各年齡組間感染率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ2=6.065,P=0.733)。如表2和圖1所示，各年齡段均以高危型感染為主，其中≤30歲的高危型感染率和多重感染率均最高，分別為13.2%和4.4%。不同年齡組HPV基因型52、16和58的檢出情況見(jiàn)表3，≤30歲、31～40歲、41～50歲年齡組以52型為主，感染率分別為5.49%、2.11%、3.31%，>50歲年齡組以58型為主，感染率為1.94%。

2.3 HPV感染的宮頸病變情況

92例HPV分型陽(yáng)性體檢女性同時(shí)進(jìn)行了TCT檢測(cè)，結(jié)果見(jiàn)表4。25%人群宮頸有炎癥細(xì)胞或出血，10.9%人群出現(xiàn)了非典型鱗狀細(xì)胞不能排除高級(jí)別上皮內(nèi)病變(ASC-H)和低度鱗狀上皮內(nèi)病變(LSIL)。不同感染類型間病變程度無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ2=3.151,P＞0.05)。

3 討論

宮頸癌是危害女性健康的重大惡性腫瘤之一。人乳頭瘤病毒(HPV)與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。HPV分為高危型和低危型，不同型別的篩查對(duì)宮頸癌的預(yù)防和控制有重大意義。研究表明，不同地區(qū)、不同人群的HPV流行率、感染型別有明顯差異[6]。了解當(dāng)?shù)伢w檢女性人群的HPV感染狀況及基因型分布對(duì)該地區(qū)的宮頸癌防控具有必要性。

表1 HPV陽(yáng)性樣品基因型分布情況Tab. 1 The distribution of genotypes in HPV infected positive paitientssamples

據(jù)報(bào)道，我國(guó)女性人群宮頸HPV感染率為25.0%，不同地理區(qū)域的感染率差異較大(20%～34.6%)。其中華南地區(qū)最低，感染率為20.0%[7]。也有報(bào)道普通女性篩查人群中HPV感染率為15.7%[8]。本研究中廣東省惠州地區(qū)體檢人群的感染率為14.4%，低于華南地區(qū)的平均水平。造成這種結(jié)果的原因，可能是由于研究對(duì)象為健康體檢女性人群，不包括門(mén)診患者。有研究已經(jīng)明確指出，門(mén)診就診女性感染率顯著高于體檢人群，如遵義地區(qū)的門(mén)診就診女性HPV陽(yáng)性率為37.47%，而體檢女性則為13.24%[9]。廣東省地區(qū)的整體感染亞型以高危型為主，前3位感染亞型分別是16型、52型、58型[10]。本研究中廣東省惠州地區(qū)的感染亞型也以高危型為主，感染亞型與省內(nèi)整體報(bào)道相近，前3位的亞型分別是52型(24.1%)、16型(10.8%)和58型(10.8%)，與廣州地區(qū)情況基本一致[11]。

表2 HPV在各年齡組的檢出情況Tab. 2 The detection of HPV in alldifferent age groups

圖1 各年齡組HPV的感染率Fig.1 HPV infection rates in aldifferentl age groups

表3 不同年齡組HPV基因型52、16和58的檢出情況Tab. 3 The detection of HPV genotype 52, 16 and 58 in different age groups

表4 不同感染類型體檢人的液基細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果Tab. 4 Test the result of thin-prep cytology test for in different types of healthy peplewomen with different types of infection

HPV感染高低主要取決于人群的年齡和性行為習(xí)慣。有文獻(xiàn)表明，不同年齡階段的女性人群感染率有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，感染率最高的是≥61歲組(33.7%)，其次為≤20歲組(33%)，最低的是31～40歲組(16.4%)[12]。也有文獻(xiàn)報(bào)道無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異[10]。本研究中發(fā)現(xiàn)≤30歲、31～40歲、41～50歲、≥50歲年齡組HPV陽(yáng)性率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，陽(yáng)性率最高的是≤30歲年齡組(18.7%)，最低的是≥50歲年齡組(11.7%)，可能與性行為活躍程度有關(guān)。在各年齡組感染情況均以高危型為主，≤30歲、31～40歲、41～50歲年齡組以52型為主，≥50歲年齡組以58型為主(表3)。因此，不同年齡層女性人群都應(yīng)加強(qiáng)HPV的篩查，尤其是高危型的檢測(cè)。

有研究表明，HPV高危亞型與宮頸病變程度相關(guān)，其感染率越高，病變程度越嚴(yán)重(P＜0.01)[13]。在本研究中，本研究檢測(cè)了HPV感染女性體檢人群的宮頸病變。TCT結(jié)果顯示10.9%人群出現(xiàn)了非典型鱗狀細(xì)胞意義不明確(ASC-US)和低度鱗狀上皮內(nèi)病變(LSIL)。但不同感染類型間病變程度無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，可能是由于體檢人群中大部分尚未出現(xiàn)宮頸病變或病變程度低。然而，HPV的感染，尤其是高危型的感染，仍是宮頸癌變的重要病因，其作為篩查方式十分必要。本研究中使用的是流式熒光雜交法，可同時(shí)分出最常見(jiàn)的27種型別，具有較高的臨床應(yīng)用價(jià)值。

綜上所述，HPV感染普遍存在于廣東惠州地區(qū)各年齡層女性體檢人群中，主要以高危亞型為主。流式熒光技術(shù)可以精確分出27種最常見(jiàn)的HPV亞型，加強(qiáng)HPV亞型的篩查對(duì)宮頸癌的防治具有十分重要的臨床意義。