陳發(fā)菊， 彭 梅， 楊 艷， 楊 娟， 楊小生?， 王海波

（1. 貴州醫(yī)科大學(xué)藥用植物功效與利用國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 貴州 貴陽(yáng)550014； 2. 貴州省中國(guó)科學(xué)院天然產(chǎn)物化學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 貴州 貴陽(yáng)550014； 3. 貴州宏驕科技有限公司， 貴州 貴陽(yáng)550000）

乳腺增生在中年婦女人群中發(fā)病率高， 是乳腺癌發(fā)生的前期病變［1-2］， 并且發(fā)病年齡逐漸趨向于低齡化， 國(guó)內(nèi)一些地區(qū)的發(fā)病率接近30%， 對(duì)婦女的身心健康及生活質(zhì)量構(gòu)成嚴(yán)重威脅［3］。 乳腺增生是由胸腺下丘腦垂體部分免疫系統(tǒng)發(fā)生障礙引起的自身免疫性疾?。?］， 異常性激素持續(xù)刺激乳房， 導(dǎo)致正常乳房組織過(guò)度增生， 歸屬于中醫(yī)“乳癖” 的范疇。 根據(jù)中醫(yī)理論， 乳腺增生是肝臟和腎臟虧虛的功能障礙綜合征， 臨床表現(xiàn)為乳頭溢液、 乳房疼痛等， 可通過(guò)乳房X 光或彩色超聲檢查確診［5］。

目前， 西醫(yī)采用激素類藥物緩解乳腺增生癥狀， 但往往伴隨著許多副作用和嚴(yán)重并發(fā)癥， 不適合長(zhǎng)期治療［6］； 外科手術(shù)也很難被多數(shù)人接受，而且容易復(fù)發(fā)； 中藥能有效治療乳腺增生［7-8］， 并且毒副作用較小。 乳安消片由陳皮、 黨參、 夏枯草、 山藥、 蒲公英組成， 主要用于治療乳腺增生、乳腺結(jié)節(jié)、 子宮肌瘤、 月經(jīng)不調(diào)、 痛經(jīng)、 身倦乏力、 失眠多夢(mèng)、 面色失華易長(zhǎng)斑、 煩躁易怒等［9］，本實(shí)驗(yàn)將研究該制劑對(duì)乳腺增生大鼠的治療作用，并探索其可能機(jī)制。

1 材料

1.1 試藥 乳安消片（貴州宏驕科技有限公司，批號(hào)20160601）； 乳癖消片［遼寧上藥好護(hù)士（集團(tuán)） 有限公司， 批號(hào)Z21021823］。 苯甲酸雌二醇（批號(hào)E102160）、 黃體酮（批號(hào)P106426） （上海阿拉丁生化科技股份有限公司）； 大鼠雌二醇（E2）、 孕酮（PROG）、 催乳素（PRL） 酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒（武漢華聯(lián)科生物科技有限公司， 批號(hào)DRE20048、 DRE20697、 DRE20710）； 4%多聚甲醛 （索萊寶生物科技有限公司，批號(hào)20170722）。

1.2 儀器 游標(biāo)卡尺（上海匯一尺業(yè)有限公司）；TP1020 自動(dòng)組織脫水機(jī)、 包埋機(jī)、 CM2245 輪轉(zhuǎn)式石蠟切片機(jī)、 光學(xué)顯微鏡（德國(guó)Leica 公司）； 電子天平［賽多利斯科學(xué)儀器（北京） 有限公司］；-80 ℃低溫冰箱（日本三洋公司）； Milli-Q 純水處理器（美國(guó)Millipore 公司）； W-80A 型漩渦混合器（江蘇海門麒麟醫(yī)用儀器廠）； 酶標(biāo)儀（美國(guó)Bio-Rad 公司）； 烘箱（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；離心機(jī)（德國(guó)Eppendorf 公司）。

1.3 動(dòng)物 雌性SD 大鼠， 購(gòu)自重慶騰鑫生物技術(shù)有限公司［許可證號(hào)SCXK （軍） 2012-0011］。

2 方法

2.1 分組及給藥 60 只大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型組、 乳癖消片組及乳安消片低、 中、 高劑量組，每組10 只。 除空白對(duì)照組外各組大鼠后腿內(nèi)側(cè)肌內(nèi)注射苯甲酸雌二醇（0.5 mg／kg）， 每天1 次， 連續(xù)25 d， 隨后肌內(nèi)注射黃體酮（5 mg／kg）， 每天1 次，連續(xù)5 d， 以建立乳腺增生模型［10-12］。 同時(shí)， 空白對(duì)照組和模型組大鼠灌胃給予生理鹽水（1 mL／100 g），其他組大鼠分別灌胃給予乳癖消片（960 mg／kg）、 乳安消片（580、 1 160、 1 740 mg／kg）， 每天1 次，連續(xù)45 d。

2.2 指標(biāo)檢測(cè) 于末次給藥24 h 后， 游標(biāo)卡尺精密測(cè)量大鼠第2 對(duì)乳頭高度及乳房直徑。 大鼠頸動(dòng)脈取血， 4 ℃、 3 500 r／min 下離心10 min 取血清，-20 ℃保存， 按照ELISA 試劑盒說(shuō)明書測(cè)定大鼠血清E2、 PROG、 PRL 水平。 腹腔注射7%水合氯醛（0.5 mL／100 g） 麻醉大鼠， 將其以仰臥式固定于鼠板上， 取第2 對(duì)乳房的乳腺， 4%多聚甲醛固定2 d， 組織脫水， 石蠟包埋， 切片， 進(jìn)行HE 染色。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 13.0 軟件進(jìn)行處理，數(shù)據(jù)以（±s）表示， 組間比較采用單因素方差分析。 以P＜0.05 為具有顯著性差異。

3 結(jié)果

3.1 乳安消片對(duì)大鼠乳頭高度及乳房直徑的影響 表1 顯示， 與空白對(duì)照組比較， 模型組大鼠乳頭高度及乳房直徑顯著增大（P＜0.05）； 與模型組比較， 乳安消片中、 高劑量組兩者顯著減?。≒ ＜0.05）。

表1 乳安消片對(duì)大鼠乳頭高度及乳房直徑的影響（±s，n＝10）Tab.1 Effects of Ru’anxiao Tablets on rat nipple heights and breast diameters （±s， n＝10）

表1 乳安消片對(duì)大鼠乳頭高度及乳房直徑的影響（±s，n＝10）Tab.1 Effects of Ru’anxiao Tablets on rat nipple heights and breast diameters （±s， n＝10）

注：與空白對(duì)照組比較，?P＜0.05；與模型組比較，＃P＜0.05

組別 劑量／（mg·kg-1）乳頭高度／mm乳房直徑／mm空白對(duì)照組 — 1.20±0.16 0.99±0.12模型組 — 2.09±0.22? 1.68±0.19?乳癖消片組 960 1.33±0.16＃ 0.87±0.09＃乳安消片低劑量組 580 1.91±0.06 1.60±0.09乳安消片中劑量組 1 160 1.72±0.06＃ 1.44±0.11＃乳安消片高劑量組 1 740 1.49±0.24＃ 1.21±0.19＃

3.2 乳安消片對(duì)大鼠血清E2、 PROG、 PRL 水平的影響 表2 顯示， 與空白對(duì)照組比較， 模型組大鼠E2、 PRL 水平顯著增加， PROG 水平顯著降低（P＜0.05）； 與模型組比較， 乳安消片組大鼠三者水平顯著升高（P＜0.05）。

表2 乳安消片對(duì)大鼠血清E2、 PROG、 PRL 水平的影響（±s， n＝10）Tab.2 Effects of Ru’anxiao Tablets on rat serum levels of E2， PROG and PRL （±s， n＝10）

表2 乳安消片對(duì)大鼠血清E2、 PROG、 PRL 水平的影響（±s， n＝10）Tab.2 Effects of Ru’anxiao Tablets on rat serum levels of E2， PROG and PRL （±s， n＝10）

注：與空白對(duì)照組比較，?P＜0.05；與模型組比較，＃P＜0.05

組別 劑量／（mg·kg-1）E2／（pg·mL-1）PROG／（ng·mL-1）PRL／（ng·mL-1）空白對(duì)照組 — 141.5±0.51 56.14±0.25 0.69±0.002模型組 — 389.2±0.32? 15.96±0.27? 15.74±0.06?乳癖消片組 960 134.6±2.32＃ 42.90±0.42＃ 0.86±0.05＃乳安消片低劑量組 580 331.3±0.83＃ 23.83±0.11＃ 13.62±0.06＃乳安消片中劑量組 1 160 162.5±2.22＃ 43.79±0.38＃ 10.11±0.11＃乳安消片高劑量組 1 740 127.8±0.41＃ 50.19±0.62＃ 2.93±0.08＃

3.3 大鼠乳腺組織病理形態(tài) 圖1 顯示， 與空白對(duì)照組比較， 模型組大鼠乳腺小葉腺泡數(shù)增多， 小葉體積增大， 導(dǎo)管擴(kuò)張， 腺泡內(nèi)有大量分泌物； 乳癖消片組大鼠腺泡內(nèi)分泌物及乳腺小葉腺泡數(shù)較模型組減少； 乳安消片組大鼠腺泡內(nèi)分泌物及乳腺小葉腺泡數(shù)較模型組顯著減少， 以高劑量組更明顯。

4 討論

下丘腦-垂體-性腺軸是神經(jīng)結(jié)構(gòu)組成部分之一， 在維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定和機(jī)體正常生理功能中扮演著重要角色［13］， 性激素分泌異常會(huì)導(dǎo)致許多疾病的發(fā)生， 如高催乳素血癥、 乳腺增生、 子宮肌瘤等。 各種性激素水平共同調(diào)控乳腺組織， 其中催乳素（PRL） 水平升高被認(rèn)為是引起乳腺增生的重要因素， 孕酮（PROG） 水平對(duì)腺泡組織和乳腺小葉起到促進(jìn)作用， 雌二醇（E2） 水平增高對(duì)導(dǎo)管周圍纖維組織和乳腺導(dǎo)管的生長(zhǎng)起到抑制作用［14］。性激素紊亂常發(fā)生于乳腺增生模型中， 可通過(guò)調(diào)控下丘腦-垂體-性腺軸平衡來(lái)調(diào)節(jié)E2、 PROG、 PRL水平， 恢復(fù)卵巢功能， 消除小葉增生及腺泡增生。

本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)， 乳安消片在乳腺增生大鼠中擔(dān)任著重要的激素調(diào)節(jié)劑， 具有消腫止痛、 軟堅(jiān)散結(jié)、疏肝健脾、 調(diào)理各臟腑的功效， 方中山藥補(bǔ)脾養(yǎng)胃， 生津益肺， 補(bǔ)腎； 夏枯草清肝泄火， 明目， 散結(jié)消腫； 黨參健脾益肺， 增強(qiáng)免疫力， 改善微循環(huán)， 養(yǎng)血生津； 蒲公英利尿利膽， 清熱解毒， 消腫散結(jié)能； 陳皮主要用于食少吐泄、 咳嗽痰多、 胸腕脹滿。 與模型組比較， 灌胃給藥45 d 后乳安消片組大鼠血清中E2、 PRL 水平顯著下降， PROG 水平顯著升高， 表明它可通過(guò)調(diào)控性激素水平對(duì)乳腺增生起到保護(hù)或治療作用。 另外， 選擇乳癖消片作為陽(yáng)性藥物， 它主要由漏蘆、 蒲公英、 玄參、 連翹、 鹿角、 海藻、 牡丹皮、 三七、 雞血藤、 赤芍、木香組成， 方中漏蘆、 蒲公英、 玄參、 連翹消腫解毒， 鹿角、 海藻軟堅(jiān)散結(jié)， 牡丹皮、 三七活血化瘀， 雞血藤補(bǔ)血通絡(luò)， 赤芍、 木香行氣止痛， 諸藥合用， 共奏疏肝益氣、 活血化瘀、 祛瘀散結(jié)、 清熱解毒之功效， 用于乳腺增生的長(zhǎng)期治療， 而且安全有效， 無(wú)嚴(yán)重不良反應(yīng)［15］。 同時(shí)， 組織病理學(xué)結(jié)果表明， 乳安消片能緩解乳腺增生， 減少乳腺小葉腺泡數(shù)。

綜上所述， 乳安消片能調(diào)節(jié)乳腺增生大鼠體內(nèi)紊亂的激素， 表明其所含中藥材具有平衡功能， 對(duì)乳腺增生具有保護(hù)作用， 其機(jī)制可能是通過(guò)調(diào)節(jié)下丘腦-垂體-性腺軸紊亂使性激素水平恢復(fù)正常， 從而達(dá)到治療乳腺增生的目的。