，

腦血管病已逐漸發(fā)展成為危害人類健康的主要疾病之一，其中缺血性腦血管病占80%，具有較高的致殘率和致死率[1]。缺血性腦血管病病理機制復(fù)雜。曾聰彥等[2-3]研究發(fā)現(xiàn)，腦缺血再灌注后常并發(fā)血液流變學改變，是腦缺血再灌注損傷后重要病理機制之一。白芍總苷(total glucosides of paeony，TGP)為中藥白芍的主要活性成分之一，具有多種生物學活性[4-5]，李蘭芳等[6-7]研究發(fā)現(xiàn)，白芍具有改善痛經(jīng)模型大鼠和血瘀癥狀大鼠血液流變學指標作用。本研究擬通過制備局灶性腦缺血再灌注大鼠模型，探討TGP對腦缺血再灌注后血液流變學指標的影響，進一步分析TGP對腦缺血再灌注損傷的保護作用機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 健康清潔級SD大鼠(雌雄不限)，7周齡，200 g～240 g，河北醫(yī)科大學實驗動物中心提供[SCXK(冀)：2013-1-003]。

1.2 實驗藥物與試劑 白芍總苷膠囊(寧波立華制藥有限公司，規(guī)格：每粒300 mg)。HE試劑盒(北京博奧森生物技術(shù)有限公司)；2，3，5-氯化三苯基四氮唑(TTC，上?；瘜W試劑公司)；超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)、丙二醛(MDA)試劑盒(安徽欣樂生物技術(shù)有限公司)。

1.3 模型制備與分組 參照Longa等[8]報道的線栓法制備大鼠腦缺血再灌注模型，取80只模型大鼠隨機分為模型組和TGP低劑量組、中劑量組、高劑量組[50 mg/(kg·d)、100 mg/(kg·d)、200 mg/(kg·d)]，另設(shè)假手術(shù)組(20只)，假手術(shù)組不插入栓線外，其余操作同造模過程；取TGP并加入適量生理鹽水配制成濃度為100 mg/mL、50 mg/mL、25 mg/mL TGP溶液，各組大鼠分別給藥(2 mL/kg)，模型組和假手術(shù)組分別給予等體積生理鹽水(2 mL/kg)。療程均為28 d。

1.4 實驗方法

1.4.1 神經(jīng)功能評分 參照10分制評分方法行盲法評分：置地上，向缺血對側(cè)轉(zhuǎn)圈，計1分；提鼠尾，缺血對側(cè)前肢腕屈曲計1分、肘屈曲計2分、肩內(nèi)旋計3分；對側(cè)推動時阻力下降，據(jù)下降程度計1分～3分；置金屬網(wǎng)上，據(jù)缺血對側(cè)肌張力下降程度計1分～3分。

1.4.2 腦組織含水量和梗死體積測定 麻醉后斷頭取腦，去除小腦和低位腦干后稱重大腦組織重量，即為腦濕重；110 ℃恒溫烘烤48 h后稱重為腦干重：腦含水量(%)=(腦濕重-腦干重)/腦濕重×100%；大腦組織沿冠狀切片，厚度約2 mm，置于2% TTC染色液中避光孵育0.5 h(梗死區(qū)呈蒼白色)，運用圖像分析軟件計算大腦組織梗死百分比。

1.4.3 腦組織海馬CA1區(qū)病變觀察 麻醉后剝?nèi)∧X組織，置于多聚甲醛溶液(濃度為4%)固定72 h，依次進行石蠟包埋、切片(3 μm)和常規(guī)脫蠟水化處理，按照HE染色試劑盒說明進行處理，封片后通過顯微鏡觀察腦組織海馬CA1區(qū)神經(jīng)元病變。

1.4.4 SOD、CAT活性和MDA含量的測定 麻醉后斷頭取腦，加入適量冷裂解液行研磨勻漿，離心(3 000 r/min，10 min)取上清液，按照試劑盒方法測定腦組織SOD、CAT活性和MDA含量。

1.4.5 血液流變學指標及紅細胞膜流動性指標監(jiān)測 麻醉后，開腹經(jīng)腹主動脈取血(抗凝處理)，用R-80錐板型血液流變檢測儀測定全血黏度(低切、中切、高切)和血漿黏度，計算紅細胞聚集指數(shù)、紅細胞變性指數(shù)、紅細胞剛性指數(shù)、血細胞比容，測定紅細胞沉降率；測定紅細胞膜流動性指標：熒光偏振度、平均微黏度、各向異性。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠神經(jīng)功能評分、腦組織含水量及腦組織梗死體積比較 腦缺血再灌注模型組大鼠神經(jīng)功能評分、腦組織含水量和梗死體積較假手術(shù)組均升高，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，提示造模成功；TGP中劑量組、高劑量組能顯著降低腦組織含水量(P<0.01)，并可顯著降低腦缺血再灌注大鼠神經(jīng)功能評分和梗死體積(P<0.01)。詳見表1。

表1 各組大鼠神經(jīng)功能評分、腦組織含水量及腦組織梗死體積比較(±s)

2.2 TGP對腦缺血再灌注損傷大鼠腦組織病變的影響 假手術(shù)組大鼠腦組織海馬CA1區(qū)神經(jīng)元未見異常：層次清晰，排列整齊，形態(tài)完整，染色均勻，核膜、核仁清晰；模型組海馬CA1區(qū)神經(jīng)元形態(tài)結(jié)構(gòu)呈現(xiàn)明顯異常：層次紊亂，神經(jīng)元數(shù)量減少、排列稀疏、間隙增大，胞體腫脹變形，部分神經(jīng)元胞核固縮或溶解，核仁消失等，提示造模成功；TGP各劑量組海馬CA1區(qū)神經(jīng)元病變呈不同程度減輕，該藥理學作用呈現(xiàn)一定的劑量依賴性，以TGP高劑量組效果最明顯。詳見圖1。

A為假手術(shù)組；B為模型組；C為TGP低劑量組；D為TGP中劑量組；E為TGP高劑量組

2.3 各組大鼠腦組織SOD、CAT活性和MDA含量比較 腦缺血再灌注模型組較假手術(shù)組抗氧化酶(SOD、CAT)活性顯著降低，MDA含量顯著升高(P<0.01)，提示造模成功；TGP中劑量組、高劑量組能顯著提高腦缺血再灌注大鼠腦組織SOD、CAT活性(P<0.05或P<0.01)，TGP各劑量組能顯著降低其MDA含量(P<0.01)。詳見表2。

表2 各組大鼠腦組織SOD、CAT活性和MDA含量比較(±s)

2.4 TGP對腦缺血再灌注大鼠血液流變學指標的影響

2.4.1 各組大鼠全血黏度(低切、中切、高切)與血漿黏度比較 腦缺血再灌注模型組大鼠全血低切、中切、高切黏度較假手術(shù)組均明顯升高(P<0.01)，血漿黏度明顯升高(P<0.01)，提示造模成功；TGP各劑量組能顯著降低腦缺血再灌注大鼠全血中切、高切黏度(P<0.05或P<0.01)，TGP中劑量組、高劑量組能顯著降低全血黏度低切及血漿黏度(P<0.01)。詳見表3。

表3 各組大鼠全血黏度與血漿黏度比較(±s) mPa·s

2.4.2 各組大鼠紅細胞聚集指數(shù)、剛性指數(shù)和變形指數(shù)比較 腦缺血再灌注模型組較假手術(shù)組紅細胞聚集指數(shù)、血細胞剛性指數(shù)均顯著升高(P<0.01)，紅細胞變形指數(shù)顯著降低(P<0.01)，提示造模成功；TGP各劑量組能顯著降低腦缺血再灌注大鼠紅細胞聚集指數(shù)(P<0.05或P<0.01)，其中TGP中劑量組、高劑量組能降低血細胞剛性指數(shù)，并升高紅細胞變形指數(shù)(P<0.01)。詳見表4。

表4 各組大鼠紅細胞聚集指數(shù)、剛性指數(shù)和變形指數(shù)比較(±s)

2.4.3 各組大鼠血細胞比容和紅細胞沉降率比較 腦缺血再灌注模型組較假手術(shù)組血細胞比容、紅細胞沉降率均顯著升高(P<0.01)，提示造模成功；TGP各劑量組能明顯降低腦缺血再灌注大鼠紅細胞沉降率(P<0.05或P<0.01)，其中TGP中劑量組、高劑量組能明顯降低血細胞比容(P<0.01)。詳見表5。

表5 各組大鼠血細胞比容和紅細胞沉降率比較(±s)

3 討 論

腦梗死是致殘率和致死率較高的疾病之一，嚴重危害人類的生命健康。陳立杰等[9-10]研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，急性腦梗死病人血液黏度增高，呈濃、黏、凝、聚狀態(tài)；蔣翡翎等[11]進一步研究發(fā)現(xiàn)，腦梗死病人組血液流變學指標均顯著高于正常對照組，包括紅細胞變形能力下降、聚集程度升高及血液黏度增加等。血液高凝狀態(tài)致使局部血液微循環(huán)持續(xù)惡化誘發(fā)神經(jīng)細胞凋亡[3，12]，是腦梗死病癥惡化的重要原因之一。因此，臨床上對腦梗死的治療，除及時溶栓或介入治療恢復(fù)血流供應(yīng)外，應(yīng)注重改善血液流變學指標以預(yù)防梗死灶擴大和二次腦梗死發(fā)生。

TGP是我國傳統(tǒng)中藥白芍的主要活性成分之一，既往研究發(fā)現(xiàn)白芍對痛經(jīng)模型大鼠和血瘀癥模型大鼠血液流變學的藥理學作用[6-7]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，經(jīng)TGP干預(yù)治療能明顯降低腦缺血再灌注大鼠神經(jīng)功能評分，改善神經(jīng)功能癥狀，降低腦組織含水量，減小腦組織梗死體積，抑制腦組織海馬CA1區(qū)病變，改善腦組織抗氧化酶活性，抑制腦組織氧化應(yīng)激損傷，提示TGP對腦缺血再灌注損傷具有一定的保護作用。

維持正常血液流變學對機體組織血液灌注尤其是對微循環(huán)十分重要，影響血液流變學因素較多，包括全血黏度(低切、中切、高切)、血漿黏度、紅細胞聚集指數(shù)、變性指數(shù)、剛性指數(shù)等，此外，紅細胞膜流動性指標(熒光偏振度、平均微黏度、各向異性)對血液流變學有一定影響[13-15]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，經(jīng)TGP干預(yù)治療能明顯降低腦缺血再灌注大鼠全血低切、中切、高切黏度及血漿黏度，降低紅細胞聚集指數(shù)、剛性指數(shù)并提高紅細胞變性指數(shù)，降低血細胞比容和紅細胞沉降率，提示TGP具有改善腦缺血再灌注損傷大鼠血液流變學、改善血液高凝狀態(tài)、改善局部微循環(huán)的作用。

綜上所述，TGP通過改善腦缺血再灌注損傷大鼠血液流變學和局部微循環(huán)指標，對腦缺血再灌注損傷具有一定的保護作用。