李 英，張金花，費(fèi)中海，劉 文

(川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川南充 637000)

隨著電阻抗、高頻電導(dǎo)、激光散射、細(xì)胞化學(xué)及多角度激光偏振光散射等檢測技術(shù)用于全自動血細(xì)胞分析儀，血常規(guī)的檢測速度和準(zhǔn)確性越來越高。血細(xì)胞分析儀檢測的準(zhǔn)確性主要體現(xiàn)在2個(gè)方面：(1)血細(xì)胞數(shù)量的準(zhǔn)確性；(2)血細(xì)胞形態(tài)的準(zhǔn)確性。前者的質(zhì)量保證可通過室內(nèi)質(zhì)評、室間質(zhì)評及儀器比對得以實(shí)現(xiàn)[1-2]，而后者的準(zhǔn)確性受諸多因素影響，目前，尚沒有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評價(jià)。血細(xì)胞形態(tài)的檢查沒有實(shí)現(xiàn)自動化或標(biāo)準(zhǔn)化的主要原因是離體標(biāo)本的細(xì)胞形態(tài)受患者疾病類型、涂片染色技術(shù)和檢驗(yàn)人員細(xì)胞形態(tài)識別能力的影響，而細(xì)胞形態(tài)的準(zhǔn)確識別依賴涂片及染色良好的血片。傳統(tǒng)的手工涂片染色受檢驗(yàn)人員操作水平的影響較大，不同檢驗(yàn)人員對同一患者進(jìn)行推片染色效果不一且重復(fù)性差。本研究對SC-120全自動推片染色機(jī)與傳統(tǒng)手工涂片染色效果及鏡檢結(jié)果準(zhǔn)確性進(jìn)行了對比分析，并進(jìn)行了效果評價(jià)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1標(biāo)本來源 隨機(jī)選擇在本院就診的門診健康體檢者20例、貧血患者30例、白血病患者20例及兒科患者30例(其中EB病毒抗體陽性者3例，陰性27例)共100例乙二胺四乙酸二鉀抗凝血樣本，隨機(jī)編號，樣本處理在2 h內(nèi)完成。

1.2儀器與試劑 邁瑞B(yǎng)C6800全自動血細(xì)胞分析儀、邁瑞SC-120全自動推片染色機(jī)、Olympus CX21顯微鏡、Olympus圖像采集系統(tǒng)等。所有儀器在使用前均進(jìn)行校準(zhǔn)及性能評價(jià)，各儀器均使用原裝配套試劑及質(zhì)控品，使用當(dāng)日室內(nèi)質(zhì)控在控。瑞氏-吉姆薩染液為珠海貝索生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。

1.3方法

1.3.1SC-120全自動推片染色機(jī)與傳統(tǒng)手工推片染色法的推片及染色效果評價(jià) 100例標(biāo)本隨機(jī)編號后采用SC-120全自動推片染色機(jī)和手工方法推片染色各1張，由2名有細(xì)胞形態(tài)識別經(jīng)驗(yàn)的檢驗(yàn)人員對推片效果(推片有明顯頭體尾形成，體尾交界處細(xì)胞分布均勻?yàn)橥破Ч?及染色效果(成熟紅細(xì)胞顏色為淡紅色，粒細(xì)胞質(zhì)中3種顆粒顏色易于識別為染色效果好)進(jìn)行評價(jià)。

1.3.2SC-120全自動推片染色機(jī)與傳統(tǒng)手工方法制備的血涂片鏡檢結(jié)果一致性分析 由2名檢驗(yàn)人員在Olympus圖像采集系統(tǒng)的輔助下對2種方法制備的血涂片在油鏡下的細(xì)胞形態(tài)進(jìn)行識別，每例標(biāo)本識別100個(gè)白細(xì)胞，共10 000個(gè)白細(xì)胞，同時(shí)，觀察成熟紅細(xì)胞、有核紅細(xì)胞及血小板形態(tài)[3]，分別記錄2名檢驗(yàn)人員的辨認(rèn)結(jié)果。

1.3.3SC-120全自動推片染色機(jī)與傳統(tǒng)手工方法制備的血涂片異型淋巴細(xì)胞(異淋)鏡檢結(jié)果準(zhǔn)確性分析 通過對兒科患者30例標(biāo)本進(jìn)行EB病毒抗體檢測，與鏡檢異淋檢出率進(jìn)行對比，比較SC-120全自動推片染色機(jī)與傳統(tǒng)手工涂片鏡檢結(jié)果的準(zhǔn)確性。異淋涂片鏡檢結(jié)果陽性為>5%[4]

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料以率(%)表示，2種方法間的采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1SC-120全自動推片染色機(jī)與傳統(tǒng)手工推片染色法的推片及染色效果評價(jià) SC-120全自動推片染色機(jī)與手工推片染色法的推片及染色效果比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，SC-120全自動推片染色機(jī)的推片及染色效果均優(yōu)于手工推片染色法。見表1。

2.2SC-120全自動推片染色機(jī)與傳統(tǒng)手工方法制備的血涂片鏡檢結(jié)果一致性分析 2名檢驗(yàn)人員對SC-120全自動推片染色機(jī)制備的血涂片中血細(xì)胞形態(tài)識別的符合率較高(90%～98%)。而對手工推片染色制備的血涂片中血細(xì)胞的識別率在原始細(xì)胞及原始細(xì)胞等同細(xì)胞、中性中幼粒細(xì)胞、中性晚幼粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和成熟紅細(xì)胞異常形態(tài)的識別符合率低于90%，與全自動推片染色機(jī)制備的血涂片分析結(jié)果比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

2.3SC-120全自動推片染色機(jī)與傳統(tǒng)手工方法制備的血涂片異淋鏡檢結(jié)果分析 SC-120全自動推片染色機(jī)制備的血涂片對淋巴細(xì)胞的形態(tài)影響較小，結(jié)果較準(zhǔn)確，而手工推片染色法制備的血涂片對淋巴細(xì)胞的形態(tài)影響較大，異淋的檢出率具有較高的假陽性，2種方法的鏡檢結(jié)果比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表1 SC-120全自動推片染色機(jī)與傳統(tǒng)手工推片染色法的推片及染色滿意率比較(%)

表2 SC-120全自動推片染色機(jī)與傳統(tǒng)手工涂片染色法的鏡檢符合率比較(%)

注：*原始細(xì)胞等同細(xì)胞包括急性早幼粒細(xì)胞白血病中的早幼粒細(xì)胞、幼稚單核細(xì)胞和幼稚淋巴細(xì)胞

表3 SC-120全自動推片染色機(jī)與傳統(tǒng)手工方法制備的血涂片異淋陽性率分析

注：與手工推片染色法比較，*P<0.05

3 討 論

血常規(guī)檢查的主要作用是反映患者體內(nèi)血細(xì)胞數(shù)量和形態(tài)的變化，在血液系統(tǒng)和血液系統(tǒng)相關(guān)疾病的初診、治療及效果觀察等方面均具有重要價(jià)值，同時(shí)，對一些感染性疾病也可起到一定的輔助診斷及診斷鑒別作用。但由于全自動血細(xì)胞分析儀檢測原理的局限性，目前，血細(xì)胞分析儀的準(zhǔn)確性僅限于各類血細(xì)胞的數(shù)量分析和對正常外周血細(xì)胞進(jìn)行分類，對部分血液系統(tǒng)疾病及血液系統(tǒng)相關(guān)疾病所導(dǎo)致的造血系統(tǒng)中異常釋放到外周血的細(xì)胞，如各種原始細(xì)胞、原始細(xì)胞等同細(xì)胞、幼稚細(xì)胞、有核紅細(xì)胞的分類準(zhǔn)確性較差[4-9]，且儀器對成熟紅細(xì)胞的形態(tài)僅能以紅細(xì)胞平均體積(MCV)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白量(MCH)、紅細(xì)胞分布寬度(RDW)等紅細(xì)胞平均參數(shù)進(jìn)行初步反映，不能代表真正的紅細(xì)胞形態(tài)變化，對血小板的形態(tài)異常或有抗體依賴的血細(xì)胞聚集的標(biāo)本也需進(jìn)行涂片鏡檢[10-12]。

一直以來，手工推片染色的方法是復(fù)檢的主要方法和較可靠的方法[13]，但在臨床工作中發(fā)現(xiàn)，手工推片染色鏡檢對細(xì)胞的形態(tài)影響較大，推片的手法、涂片干燥的方式、染液和緩沖液的比例及染色時(shí)間均對細(xì)胞的形態(tài)具有不同的影響，尤其是對淋巴細(xì)胞和成熟紅細(xì)胞，而粒細(xì)胞和單核細(xì)胞由于有細(xì)胞核型的變化和典型的顆粒等特征較易準(zhǔn)確識別，這在本研究中也得到了證實(shí)。

本研究結(jié)果也說明只有當(dāng)檢驗(yàn)人員在鏡下觀察到的細(xì)胞形態(tài)沒有或受到標(biāo)本制備過程中人為因素影響很小的時(shí)候，其形態(tài)檢驗(yàn)結(jié)果才是準(zhǔn)確、可靠的，而這一點(diǎn)在臨床工作中往往被忽略而導(dǎo)致部分細(xì)胞形態(tài)檢查結(jié)果不準(zhǔn)確。通過對SC-120 全自動推片染色機(jī)和手工方法進(jìn)行對比發(fā)現(xiàn)，SC-120 全自動推片染色機(jī)的推片效果和染色效果穩(wěn)定，且優(yōu)于手工方法進(jìn)行血涂片的制備。在細(xì)胞形態(tài)的觀察中，2名有經(jīng)驗(yàn)的檢驗(yàn)人員分析SC-120 全自動推片染色機(jī)和手工方法制備的同一份標(biāo)本，前者的結(jié)果一致性也優(yōu)于后者，這與標(biāo)本制備的質(zhì)量有很大關(guān)系。本研究也對2種方法制備的標(biāo)本中淋巴細(xì)胞和紅細(xì)胞的形態(tài)觀察結(jié)果進(jìn)行了探討，結(jié)果顯示，手工推片染色法較易導(dǎo)致異淋(形態(tài)似Ⅱ型異淋為主)的假陽性，這一點(diǎn)在對30例兒童患者標(biāo)本進(jìn)行EB病毒抗體檢測后得到了證實(shí)。30例中只有3例為EB病毒抗體陽性，采用SC-120 全自動推片染色機(jī)進(jìn)行血涂片制備后鏡檢異淋陽性4例，而手工方法進(jìn)行血涂片制備后鏡檢異淋陽性達(dá)20例，雖然除傳染性單核細(xì)胞增多癥患兒異淋會增加外，其他如巨細(xì)胞病毒(CMV)病毒感染、小兒肺炎等也可引起外周血異淋不同程度升高，但就2種方法的檢查結(jié)果來看，同一標(biāo)本手工推片染色法檢出異淋的陽性率確實(shí)比SC-120 全自動推片染色機(jī)高很多，雖然目前未有基礎(chǔ)研究證實(shí)推片的手法會導(dǎo)致假陽性的異淋出現(xiàn)，但在實(shí)際工作中確實(shí)發(fā)現(xiàn)不同檢驗(yàn)人員對同一標(biāo)本進(jìn)行推片染色時(shí)異淋的檢出率相差很大，說明手工推片染色法制片效果的不穩(wěn)定性和不確定性。而SC-120全自動推片染色機(jī)的標(biāo)準(zhǔn)化推片染色方式在標(biāo)本的制備過程中對淋巴細(xì)胞的形態(tài)影響較小，結(jié)果更為可靠。

紅細(xì)胞形態(tài)的觀察主要體現(xiàn)在紅細(xì)胞大小、中央淺染區(qū)、異常紅細(xì)胞形態(tài)如球形、淚滴形、靶形及紅細(xì)胞碎片等，皺縮紅細(xì)胞是常見的在標(biāo)本制備過程中受人為因素影響的紅細(xì)胞形態(tài)，在本研究的30例貧血標(biāo)本中，僅有1例中度貧血患者用SC-120 全自動推片染色機(jī)制備的標(biāo)本鏡檢為滿視野的皺縮紅細(xì)胞，而手工推片染色法卻完全正常，說明SC-120 全自動推片染色機(jī)可能對少數(shù)貧血患者的紅細(xì)胞形態(tài)造成影響，但此影響易被發(fā)現(xiàn)并可與手工推片染色法涂片鏡檢進(jìn)行比較確定。2種方法對其他的紅細(xì)胞異常形態(tài)的檢出率差異不大。

綜上所述，SC-120 全自動推片染色機(jī)推片染色效果穩(wěn)定，重復(fù)性好，適于臨床工作進(jìn)行血細(xì)胞形態(tài)的檢查，也可用于檢驗(yàn)人員形態(tài)識別能力比對，如與讀片機(jī)合用將大大提高血細(xì)胞形態(tài)檢驗(yàn)的準(zhǔn)確性，能為臨床提供準(zhǔn)確的血細(xì)胞數(shù)量和形態(tài)的檢測報(bào)告。