劉偉平，楊新春，殷明剛

(自貢市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川自貢 643000)

測量不確定度是一個與測量結(jié)果相聯(lián)系的參數(shù)，其表征合理地賦予被測量之值的分散性[1-2]。國際標(biāo)準(zhǔn)化組織(ISO)15189：2012《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力的專用要求》明確指出，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)為檢驗(yàn)過程中用于報(bào)告患者樣品被測量值的每個測量程序確定測量不確定度。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)規(guī)定每個測量程序的測量不確定度性能要求，并定期評審測量不確定度的評估結(jié)果[3]。因此，進(jìn)行測量不確定度評估對實(shí)驗(yàn)室具有重要意義。檢驗(yàn)項(xiàng)目的不確定評定可通過實(shí)驗(yàn)室的室內(nèi)質(zhì)量控制和室間質(zhì)量評價(jià)數(shù)據(jù)計(jì)算出來[4-7]。本研究采用實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)質(zhì)量控制的中間精密度和衛(wèi)生部室間質(zhì)量評價(jià)結(jié)果，計(jì)算了乙型肝炎病毒(HBV)DNA定量項(xiàng)目的測量不確定度。

1 材料與方法

1.1儀器與試劑 StrataGene Mx3005P實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀購自美國Agilent公司，HBV-DNA熒光定量檢測試劑盒購自湖南圣湘生物科技有限公司，室內(nèi)質(zhì)控品為自制質(zhì)控品。

1.2方法

1.2.1檢測程序 每年定期對StrataGene Mx3005P實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測系統(tǒng)進(jìn)行校準(zhǔn)，同時(shí)，每年對HBV-DNA熒光定量檢測試劑盒進(jìn)行性能評價(jià)，每批次試劑均進(jìn)行留樣再測比對，確定檢測試劑盒的性能達(dá)到要求。自制HBV-DNA室內(nèi)質(zhì)控品，保存于-70 ℃超低溫冰箱，使用前進(jìn)行全面性能評價(jià)，穩(wěn)定性好。

1.2.2中間精密度測定 收集2016年10-12月獲得的相同批號室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果，計(jì)算批間變異系數(shù)(CV%)，其數(shù)值等于實(shí)驗(yàn)室內(nèi)測量重復(fù)性引入的相對測量不確定度[urel(Rw)]。

2 結(jié) 果

2.1偏倚引入的測量不確定度評估結(jié)果 通過2014-2016年衛(wèi)生部室間質(zhì)量評價(jià)結(jié)果計(jì)算所得HBV-DNA偏倚引入的相對測量不確定度為5.27%。見表1。

2.2實(shí)驗(yàn)室內(nèi)測量重復(fù)性引入的測量不確定度評估結(jié)果 質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)均值為4.03，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)測量重復(fù)性引入的相對測量不確定度(urel)為3.45%。見表2。

表1 偏倚引入的測量不確定度評估結(jié)果

表2 HBV-DNA的中間精密度測定結(jié)果(n=40)

2.3HBV-DNA的相對擴(kuò)展不確定度 由表1、表2計(jì)算得到相對合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度(ucref)為6.3%；相對擴(kuò)展不確定度為12.6%(K=2)。

3 討 論

醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可已成為我國三級甲等醫(yī)院檢驗(yàn)科提升檢驗(yàn)質(zhì)量和能力的重要途徑。ISO15189實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可明確要求實(shí)驗(yàn)室要評估定量項(xiàng)目的測量不確定度。測量不確定度與檢驗(yàn)總誤差概念和意義有一定區(qū)別[7]。

評定測量不確定度評定的意義主要體現(xiàn)在以下2個方面：(1)確認(rèn)患者結(jié)果是否符合實(shí)驗(yàn)室設(shè)定的質(zhì)量目標(biāo)，確定將患者結(jié)果與之前相同類型的結(jié)果或臨床決定值進(jìn)行比對時(shí)其變化或波動值在多大范圍內(nèi)有意義。(2)實(shí)驗(yàn)室在解釋測量結(jié)果量值時(shí)應(yīng)考慮測量不確定度。通過對不確定度的評價(jià),可提高實(shí)驗(yàn)室的檢測水平，有助于臨床醫(yī)生更好地理解、使用檢驗(yàn)結(jié)果[8]。HBV-DNA定量已廣泛用于乙型肝炎患者臨床療效判斷和預(yù)后評估，測量不確定度結(jié)果可作為檢驗(yàn)結(jié)果質(zhì)量的參考依據(jù)[9-10]。

測量不確定度可在中間精密度條件下通過測量質(zhì)控物獲得的量值進(jìn)行計(jì)算，這些條件包括測量程序標(biāo)準(zhǔn)操作中盡可能多而合理的常規(guī)變化。評定偏倚的測量不確定度主要通過測量有證參考物質(zhì)、利用室間質(zhì)評等獲得[11-12]。

本研究采用弱陽性水平HBV-DNA質(zhì)控品獲得的中間精密度和室間質(zhì)量評價(jià)結(jié)果評定了HBV-DNA在該水平上的不確定度。實(shí)際測量過程相關(guān)聯(lián)的不確定度分量應(yīng)從接收樣品啟動測量程序開始，至輸出測量結(jié)果終止。按本方法計(jì)算所得測量不確定度不確定來源上主要包含了分析測量階段中各種影響組分(如操作人員、儀器、試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品、環(huán)境條件等)的變異。但未包括與分析前和分析后階段相關(guān)的測量不確定度分量，也未包括由于人群生物學(xué)變異而產(chǎn)生的測量不確定度。

每個實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立自己的目標(biāo)不確定度，以評價(jià)各檢驗(yàn)指標(biāo)是否滿足臨床要求[13-14]。目前，尚未有檢驗(yàn)程序的測量不確定度的國家標(biāo)準(zhǔn)或性能規(guī)范，據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，擴(kuò)展不確定度若大于10%，需改善檢測系統(tǒng)性能及穩(wěn)定性，提高檢測的準(zhǔn)確度和精密度[15]。本實(shí)驗(yàn)室根據(jù)實(shí)驗(yàn)室自身的條件，制定HBV-DNA的目標(biāo)不確定度為10%。而本研究評定得到的相對不確定度(12.6%)略高于實(shí)驗(yàn)室設(shè)定的目標(biāo)不確定度，提示應(yīng)從檢測人員、檢測儀器、檢測試劑和方法、所使用的校準(zhǔn)品和質(zhì)控品、環(huán)境溫濕度條件等方面入手，采取加強(qiáng)人員培訓(xùn)、提高試劑質(zhì)量、變更方法、加強(qiáng)儀器檢定和校準(zhǔn)、嚴(yán)格控制環(huán)境溫濕度，逐步改進(jìn)檢驗(yàn)質(zhì)量，以縮小測量不確定度，為臨床疾病的診治提供更有價(jià)值的參考依據(jù)。

4 結(jié) 論

HBV-DNA實(shí)時(shí)熒光定量檢測程序的測量不確定度評定具有重要意義，可作為臨床實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)結(jié)果質(zhì)量持續(xù)改進(jìn)的依據(jù)，并用于解釋臨床檢驗(yàn)結(jié)果。