賀 薪

（江蘇省徐州市畜牧獸醫(yī)站，江蘇 徐州 221000）

1 材料與方法

1.1 材 料

1.1.1 免疫監(jiān)測雞群 （1）A蛋雞場，第一批雞，2015.10.21進(jìn)雞，2017.3.10淘汰，2.5萬只；第二批雞，2017.3.20進(jìn)雞，2.5萬只。（2）B蛋雞場，第一批雞，2015.11.10進(jìn)雞，2017.3.28淘汰，2萬只；第二批雞，2016.10.18進(jìn)雞，2萬只。（3）C蛋雞場，第一批雞，2016.3.1進(jìn)雞 2017.7.15淘汰，2.5萬只；第二批雞，2016.6.15進(jìn)雞，2017.10.25淘汰，2.5萬只。

1.1.2 試驗(yàn)用病毒抗原 用于新城疫抗體監(jiān)測的標(biāo)準(zhǔn)參考抗原購自于維科生物。新城疫參考毒株尿囊液購自哈爾濱獸醫(yī)研究所。

1.2 方 法

1.2.1 免疫程序 針對之前的免疫和雞群疾病發(fā)生情況，我們對養(yǎng)殖場所用免疫程序進(jìn)行了適當(dāng)調(diào)整，試驗(yàn)雞群及對照雞群免疫程序如下：

（1）實(shí)驗(yàn)組雞群免疫程序：7日齡用新支H120弱毒苗2羽份點(diǎn)眼、滴鼻；28日齡用新支H120弱毒苗2.5羽份點(diǎn)眼、滴鼻；60日齡用新城疫IV系苗3羽份飲水；110日齡用新城疫IV系苗3羽份飲水，同時(shí)用新支減三聯(lián)苗1mL肌肉注射；以后每2個(gè)月用新城疫IV系苗飲水一次。

（2）對照組雞群免疫程序：5日齡用新支H120弱毒苗2羽份點(diǎn)眼、滴鼻；12日齡用新支H120弱毒苗2.5羽份點(diǎn)眼、滴鼻；60日齡用新城疫IV系苗3羽份飲水；110日齡用新城疫IV系苗3羽份飲水，同時(shí)用新支減三聯(lián)苗1mL肌肉注射；以后每3～4個(gè)月用新城疫IV系苗飲水一次。

1.2.2 完善免疫效果監(jiān)測 根據(jù)監(jiān)測方案，從2016年5月起每場每月監(jiān)測100份血樣，對新城疫抗體進(jìn)行監(jiān)測，到2017年11月共監(jiān)測樣品1800份。

1.2.3 監(jiān)測分組及采樣情況 將每一批雞對半分成試驗(yàn)組和對照組，從2016年5月開始采樣監(jiān)測，每個(gè)雞場每月分別各采取100份血樣（試驗(yàn)組和對照組各50份），被采樣的一批雞淘汰后，接著更換另一批雞采樣，連續(xù)采樣監(jiān)測18個(gè)月。

1.2.4 監(jiān)測時(shí)間及免疫情況 選擇A、B、C三個(gè)蛋雞場各2個(gè)批次的雞群，其中A蛋雞場的第一批、B蛋雞場的第一批、第二批、C蛋雞場的第二批等4個(gè)批次的雞群從產(chǎn)蛋期開始監(jiān)測，A蛋雞場的第二批雞從育雛期開始監(jiān)測，C蛋雞場的第一批雞從育成期開始監(jiān)測。

1.2.5 血凝試驗(yàn)和血凝抑制試驗(yàn)

1.2.5.1 血凝試驗(yàn) 取新城疫標(biāo)準(zhǔn)參考毒株尿囊液測定血凝價(jià)，實(shí)驗(yàn)操作程序如下：（1）取96孔V形微量反應(yīng)板，用微量移液器在 1～12孔沒孔加 0.025mL PBS；（2） 吸取0.025mL病毒懸液加入第1孔中，吹打3～5次充分混勻；（3）從第1孔中吸取0.025mL，混勻后的病毒懸液加到第2孔，混勻后吸取0.025mL加入到第3孔，依次進(jìn)行系列倍比稀釋到第11孔，最后從第11孔吸0.025mL棄之，設(shè)第12孔位 PBS 對照；（4） 每孔再加 0.025mL PBS；（5） 每孔加入0.025mL體積分?jǐn)?shù)為1%的雞紅細(xì)胞懸液；（6）震蕩混勻反應(yīng)混合液，室溫37℃下靜置10min后觀察結(jié)果，PBS對照孔的紅細(xì)胞成明顯的紐扣狀沉到孔底時(shí)判定結(jié)果。

1.2.5.2 血凝抑制試驗(yàn) 用來源于哈爾濱研究所的針對新城疫的標(biāo)準(zhǔn)陽性血清及監(jiān)測血清樣品與參考病毒進(jìn)行HI實(shí)驗(yàn)。（1）根據(jù)血凝試驗(yàn)結(jié)果配制4個(gè)血凝單位（4HAU）抗原，以能引起100%血凝的病毒最高稀釋倍數(shù)代表1個(gè)血凝單位。（2）取96孔V形微量反應(yīng)板，用微量移液器在1孔～11孔每孔加0.025mL PBS，第12孔加0.05mL PBS；（3）在第一孔加入0.025mL新城疫標(biāo)準(zhǔn)陽性血清，充分混勻后移出0.025mL至第2孔，依次類推，倍比稀釋至第10孔，第10孔棄去0.025mL，第11孔位陽性對照，第12孔為PBS對照。（4）在第1～11孔各加入0.025mL含4HAU抗原輕扣反應(yīng)板，是反應(yīng)物混合均勻，室溫下靜置不少于30min，4不少于60min。（5）每孔加入0.025mL體積分?jǐn)?shù)為1%的紅細(xì)胞懸液，震蕩混勻反應(yīng)混合液，室溫37℃下靜置10min后觀察結(jié)果，PBS對照孔的紅細(xì)胞成明顯的紐扣狀沉到孔底時(shí)判定結(jié)果。

2 結(jié)果

對試驗(yàn)雞群在不同階段采集血樣分離血清，對新城疫的抗體水平采用血凝抑制試驗(yàn)進(jìn)行監(jiān)測。

對A蛋雞場第一批雞從產(chǎn)蛋期開始采血樣進(jìn)行監(jiān)測，第二批雞從育雛期開始采血樣監(jiān)測，A雞場實(shí)驗(yàn)組和對照組雞群監(jiān)測結(jié)果及強(qiáng)化免疫時(shí)間（見表1）。

表1 A蛋雞場雞群抗體監(jiān)測結(jié)果及強(qiáng)化免疫日齡

對B蛋雞場試驗(yàn)雞群從產(chǎn)蛋期開始采血樣進(jìn)行監(jiān)測，B雞場實(shí)驗(yàn)組和對照組雞群監(jiān)測結(jié)果及強(qiáng)化免疫時(shí)間（見表2）。

表2 B蛋雞場雞群抗體監(jiān)測結(jié)果及強(qiáng)化免疫日齡

對C蛋雞場第一批雞從育成期開始采血樣進(jìn)行監(jiān)測，第二批雞從產(chǎn)蛋期開始采血樣監(jiān)測，C雞場實(shí)驗(yàn)組和對照組雞群監(jiān)測結(jié)果及強(qiáng)化免疫時(shí)間（見表3）。

表3 C蛋雞場雞群抗體監(jiān)測結(jié)果及強(qiáng)化免疫日齡

3 分析與討論

本研究中，新城疫抗體監(jiān)測結(jié)果顯示：育雛期和育成期對照組，原免疫程序在5日齡首免，12日齡二免，60日齡強(qiáng)化免疫，60日齡前免疫抗體已降到4log2以下，二免和強(qiáng)化免疫間隔時(shí)間過長，出現(xiàn)了免疫空白期。一般認(rèn)為對7日齡前的雛雞，新城疫母源抗體即能起到保護(hù)性作用錯(cuò)誤！未找到引用源。7日齡后，雛雞雖然體內(nèi)還有母源抗體，但已不能有效保護(hù)。試驗(yàn)組在7日齡進(jìn)行新城疫首免，28日齡強(qiáng)化免疫一次，60日齡左右進(jìn)行第3次免疫，育成期免疫抗體監(jiān)測結(jié)果比對照組高出1個(gè)滴度以上，且能有效保護(hù)整個(gè)育雛期和育成期。產(chǎn)蛋期對照組雞群，在110日齡以后每3～4個(gè)月用新城疫Ⅳ系苗飲水一次，抗體監(jiān)測結(jié)果顯示強(qiáng)化免疫間隔3個(gè)月時(shí)有部分雞已沒有免疫保護(hù)力。試驗(yàn)組雞群在110日齡以后每2個(gè)月用新城疫Ⅳ系苗飲水一次，平均抗體效價(jià)可維持在5log2以上，保護(hù)力加強(qiáng)。建議對新城疫弱毒疫苗的強(qiáng)化免疫，間隔2個(gè)月效果較好，對新城疫滅活疫苗的強(qiáng)化免疫，間隔4個(gè)月效果較好，而新城疫弱毒疫苗配合新城疫滅活疫苗進(jìn)行強(qiáng)化免疫，間隔6個(gè)月效果較好。

本研究結(jié)果表明，實(shí)時(shí)監(jiān)測，調(diào)整和完善免疫程序，能有效提高免疫效果。