董麗英，李國生，趙秀蘭，劉樹芳，李迅東，釧興寬，康洪燦，楊勤忠*

(1. 云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)環(huán)境資源研究所，云南 昆明 650205；2.保山市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所，云南 保山 678000；3.滄源佤族自治縣植保植檢站，云南 臨滄 677400)

【研究意義】水稻是世界上最重要的糧食作物之一，全球約有1/2的人口以稻米為主食[1-2]。在水稻生產(chǎn)中，由稻瘟病菌(MagnaportheoryzaeCouch & Kohn)[3]引起的稻瘟病是水稻生產(chǎn)區(qū)危害最為嚴(yán)重的病害之一，全球超過85個國家的水稻種植區(qū)均有稻瘟病的危害，其對世界的糧食安全構(gòu)成嚴(yán)重威脅[4-7]。生產(chǎn)實踐證明，利用抗病基因進行抗病品種的選育及合理地利用是水稻生產(chǎn)上控制該病害最經(jīng)濟、有效、環(huán)保的防治措施[5,8]。評價和篩選優(yōu)異的抗源材料用于水稻的抗病育種以解決品種抗性持久性的問題具有重要的現(xiàn)實意義?！厩叭搜芯窟M展】采用田間自然誘發(fā)結(jié)合室內(nèi)接種病原菌，開展水稻材料的稻瘟病抗性鑒定，已被廣泛用于水稻資源的抗抗病性評價,以水稻材料的抗性水平，為抗病新品種的選育提供科學(xué)依據(jù)[9-11]?！颈狙芯壳腥朦c】水稻是云南省的主要糧食作物，種植的面積約為68.36萬hm2[12]，從海拔76～2500 m均有水稻分布；由于其獨特的立體氣候，在云南秈稻和粳稻均有種植，其中粳稻占60 %左右，以常規(guī)粳稻為主，在云南省的水稻生產(chǎn)中具有重要的地位。稻瘟病是云南省水稻產(chǎn)區(qū)的主要病害，全省常年發(fā)生面積20萬hm2左右，年損失稻谷2～3萬t[13]。開展云南已育成的粳稻品種(系)的稻瘟病抗性評價，明確云南粳稻品種(系)的抗性水平，對于有效控制水稻生產(chǎn)上稻瘟病的危害起著至關(guān)重要的作用?！緮M解決的關(guān)鍵問題】明確云南省自20世紀(jì)60年代以來引進及選育品種稻瘟病抗性水平，為云南水稻品種選育、布局以及利用抗病品種持續(xù)控制稻瘟病的發(fā)生提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

188個粳稻品種(系)包括云南省20世紀(jì)60年代引進的西南175、黎明及2013年以前育成的粳稻品種(品系)(表1)。用9個采自云南省不同稻區(qū)且致病性較強的單孢菌株，對在病圃表現(xiàn)抗病的材料進行接種分析(表2)。

1.2 田間病圃自然誘發(fā)鑒定

1.2.1 田間鑒定病圃選擇 病圃位于保山市隆陽區(qū)(海拔1650 m)。188個粳稻品種(系)于2015年4月10日播種于鑒定圃秧田，并于5月20日移栽至大田，按株行距10 cm×20 cm 進行移栽，每品種(系)移栽2行，每行10苗。田塊的四周移栽80 cm寬的蒙古稻作誘行，并于鑒定材料每行的兩端分別移栽1叢感病的蒙古稻作誘發(fā)。

1.2.2 葉瘟分級及調(diào)查 調(diào)查于水稻分蘗盛期進行，分級標(biāo)準(zhǔn)按以下方法進行[11]：0級：無?。?級：針頭褐點；2級：稍大褐色；3級：小圓至稍長的灰色斑，邊緣褐色，病斑長1～2 mm；4級：典型紡錘狀，病斑長2 mm以上，通常在二條葉脈間，危害面積不超過葉面2 %；5級：典型病斑，危害面積為2.1 %～10 %；6級：典型病斑，危害面積為10.1 %～25%；7級：典型病斑，危害面積為25.1 %～50 %；；8級：典型病斑，危害面積為50.1 %～75 %；9級：大部分葉枯死，占葉面積的75 %～90 %；10級：全部莖葉枯死，整株枯死。其中0～1級為高抗(HR)；2～3級為抗(R)；4級為中抗(MR)；5級為中感(MS)，6～7級為感病(S)；8～10級別為高感(HS)。

表1 188個云南粳稻品種(系)田間葉、穗瘟抗性鑒定結(jié)果

續(xù)表1 Continued table 1

品種(品系)Cultivar(line)發(fā)病級別Disease scores葉瘟Leaf blast穗瘟Panicle blast品種名稱Cultivar(line)發(fā)病級別Disease scores葉瘟Leaf blast穗瘟Panicle blast楚粳26號17合系6號59楚粳27號00合系7號49楚粳28號37合系8號49楚粳29號47合系9號49楚粳30號33合系10號59楚粳31號00合系11號35昌粳8號50合系12號59昌粳9號70合系13號59昌粳10號00合系14號89昌粳11號70合系15號09昌粳12號00合系16號45鳳稻9號79合系17號49鳳稻10號79合系18號49鳳稻11號59合系19號69鳳稻12號79合系20號33合系21號35靖粳14號15合系22號79靖粳16號39合系23號69靖粳17號05合系24號39靖粳18號03合系25號49靖粳優(yōu)1號69合系26號79靖粳優(yōu)2號49合系27號09靖粳優(yōu)3號49合系28號59麗粳2號89合系29號59麗粳3號79合系30號39麗粳4號50合系31號49麗粳5號69合系32號49麗粳6號69合系33號49麗粳8號37合系34號55麗粳9號39合系35號69麗粳10號49合系36號45麗粳11號39合系37號79麗粳314號39合系38號49岫03-8號00合系39號69岫粳19號00合系40號35岫07-33號30合系41號49岫粳11號00合系42號39岫136-16號00滇粳優(yōu)2號39岫糯3號31滇粳優(yōu)2號39岫191-10號00滇系1號19岫191-23號00

續(xù)表1 Continued table 1

品種(品系)Cultivar(line)發(fā)病級別Disease scores葉瘟Leaf blast穗瘟Panicle blast品種名稱Cultivar(line)發(fā)病級別Disease scores葉瘟Leaf blast穗瘟Panicle blast滇系4號49岫191-7號00滇系6號79岫5-15號25劍粳3號47岫87-15號00劍粳6號39岫87-22號00劍粳7號39岫粳5號15靖粳7號89岫粳12號00靖粳8號10岫粳13號09靖粳9號30岫粳14號00靖粳9B號30岫粳15號00靖粳10號00云粳1號49靖粳11號09云粳2號39靖粳12號15云粳3號49靖粳13號37云粳4號67云粳5號29云粳30號47云粳6號49云粳31號39云粳7號47云粳32號29云粳8號49云粳33號39云粳9號85云粳優(yōu)1號59云粳10號39云粳優(yōu)3號19云粳12號17云粳優(yōu)5號59云粳135-2號39轟雜135號23云粳136號37粘粳7號79云粳14號19沾粳9號89云粳15號07銀光39云粳16號49玉粳13號00云粳17號29玉粳14號00云粳18號05云稻1號35云粳19號59云稻2號11云粳20號49昆粳4號59云粳21號59晉寧78-10239云粳219號39合靖9號39云粳22號17楚恢8號05云粳23號33滇靖8號25云粳24號37鶴16號27云粳25號37轟早生89云粳26號49西南17589云粳27號69滇榆一號89云粳29號45黎明89

1.2.3 穗瘟分級及調(diào)查 穗瘟的調(diào)查于鑒定圃中水稻蠟熟后進行調(diào)查，按如下標(biāo)準(zhǔn)進行(GB/T 15790-2009)：0級：無病；1級：個別枝梗發(fā)病，損失在5 %以下；3級：枝梗或主軸發(fā)病，損失在6 %～20 %；5級：主軸或穗頸發(fā)病，造成谷粒半癟，損失在21 %～50 %；7級：穗頸發(fā)病，大部分空癟，損失在51 %～70 %；9級：穗頸大部分發(fā)病，造成白穗，損失在71 %～100 %；其中0級為高抗(HR)；1級為抗(R)；3級為中抗(MR)；5級為感病(S)；7～9級為高感(HS)。

1.3 苗期室內(nèi)人工接種鑒定

1.3.1 水稻育苗、病原菌培養(yǎng)與接種 田間鑒定表現(xiàn)抗病水稻品種(系)在浸種催芽后，播于裝有秧田土的塑料育苗盒(12 cm×18 cm×5 cm)內(nèi)，每個品種(系)播種5粒，設(shè)3次重復(fù)。在溫室內(nèi)育苗，2葉期開始追施尿素0.5 g/盒，共施2次。將實驗室保存于-20 ℃濾紙片上的單孢菌株轉(zhuǎn)移到PDA斜面培養(yǎng)基上進行活化，并將活化后的病原菌轉(zhuǎn)接到燕麥片培養(yǎng)基上，于25 ℃下培養(yǎng)7 d，待菌絲長滿培養(yǎng)基后，用滅菌水洗去氣生菌絲，并在30W的日光燈連續(xù)照射下培養(yǎng)3 d進行產(chǎn)孢。用蒸餾水洗下分生孢子并加入0.02 %的Tween-20制成孢子懸浮液用于噴霧接種，孢子濃度為20～50個/150倍視野(2×105～5×105孢子/mL)。當(dāng)水稻苗長到3.5葉期時進行噴霧接種，接種后的苗置于保濕培養(yǎng)箱(日本池田理化產(chǎn))內(nèi)25 ℃暗培養(yǎng)24 h。然后從保濕培養(yǎng)箱中取出放在溫室(溫度25～30 ℃)內(nèi)，每天進行定時清水噴霧以保持溫室的濕度，創(chuàng)造有利發(fā)病的條件。

1.3.2 分級調(diào)查 接種7 d后按照下列標(biāo)準(zhǔn)調(diào)查發(fā)病情況[14]。0級：無任何病斑；1級：褐點型病斑，直徑≤ 1 mm，不具產(chǎn)孢能力；2級：橢圓形病斑，1<直徑≤ 2 mm，病斑周圍具褐色邊緣，中央灰白色，具產(chǎn)孢能力；3級：橢圓形病斑，直徑為2<直徑≤ 3 mm，病斑周圍具褐色邊緣，中央灰白色，具產(chǎn)孢能力；4級：典型梭形或紡錘形病斑，病斑無融合或略微融合；5級：病斑類型與4級相同，但由于病斑間融合，葉片上半部出現(xiàn)枯萎。其中0～2級為抗病反應(yīng)(R)，3～5級為感病反應(yīng)(S)。

2 結(jié)果與分析

2.1 粳稻品種(系)葉瘟的抗性鑒定

在保山稻瘟病鑒定圃，共計鑒定了188個粳稻品種(系)，各材料的葉瘟發(fā)病情況見表1所示。在這些品種(系)中，高抗葉瘟的品種(系)(0～1級)占鑒定品種(系)的29.26 %；表現(xiàn)抗葉瘟的品種(系)(2～3級)占鑒定品種(系)的28.72 %；中抗葉瘟的品種(系)占15.96 %；中感葉瘟的品種(系)(5級)占鑒定品種(系)的10.11 %；感病葉瘟的品種(系)(6～7級)占鑒定品種(系)的10.64 %；高感葉瘟的品種(系)(8級別)占鑒定品種(系)的5.32 %；未發(fā)現(xiàn)葉瘟發(fā)病為9～10級的品種，各級別品種(系)的數(shù)量見圖1。

2.2 粳稻品種(系)穗瘟的抗性鑒定

188個品種(系)穗瘟鑒定的結(jié)果見表1。其中對穗瘟表現(xiàn)高抗(0級)占全部鑒定品種(系)的17.02 %；對穗瘟表現(xiàn)抗病(1級)的品種(系)占全部鑒定品種(系)的1.60 %；對穗瘟表現(xiàn)中抗(3級)的品種(系)占全部鑒定品種(系)的3.72 %；表現(xiàn)感(5級)穗瘟的品種(系)占全部鑒定品種(系)的11.70 %；表現(xiàn)高感穗瘟(7～9級)的品種(系)占全部鑒定品種(系)的65.96 %；各級別的品種(系)數(shù)量見圖1。

2.3 水稻品種(系)的室內(nèi)抗性鑒定評價及抗源篩選

在葉瘟和穗瘟評價中，38個品種(系)在田間對葉、穗瘟表現(xiàn)出較好的抗性(0～3級)，為進一步評價這些品種(系)的抗性水平(表2)，利用收集自不同稻區(qū)且致病性較強的9個稻瘟病菌單孢菌株對32份材料作了進一步的室內(nèi)評價鑒定，結(jié)果見表2。實驗結(jié)果表明，楚粳13號、鳳稻16號和岫03-8號等13個品種(系)對所用的菌株均表現(xiàn)抗病；楚粳19號、楚粳31號和鳳稻19號等6個品種(系)均表現(xiàn)出了較好的抗性；鳳稻17號、靖粳9號B和轟雜35等3個品種(系)對9個菌株中的5個表現(xiàn)感病，而靖粳9號對8個菌株感病，表現(xiàn)出對所使用菌株極高的感病頻率，表明雖然在保山病圃表現(xiàn)出好的抗性，但在生產(chǎn)上使用時存在易感病的風(fēng)險。室內(nèi)和室外對品種(系)抗性評價的結(jié)果分析表明，楚粳13號、鳳稻16號和岫03-8號等13個表現(xiàn)高抗和抗的品種(系)可作為抗病育種中重要的抗源材料加以利用。

圖1 188份云南粳稻品種在保山病圃葉瘟和穗瘟的級別分布Fig.1 Distribution of 188 japonica cultivars(lines) to leaf blast and panicle blast

品種(品系)Cultivar(line)發(fā)病級別Disease grades稻瘟病菌株M. oryzae strains葉瘟Leaf blast穗瘟Panicle blast30620007-11-2C-136309-1-72aY88-27809-3-23A09-6-5D09-10-5A楚粳13號00RRRRRRRRR楚粳14號00RRRRRRRRR楚粳19號00RRRRSRRRR楚粳27號00RRRRRRRRR楚粳31號00RRRRSRRRR昌粳10號00---------昌粳12號00---------鳳稻16號00RRRRRRRRR鳳稻17號00RRRRSSSSS靖粳10號00RRRRSRRR-岫03-8號 00RRRRRRRRR岫粳19號00RRRSRRRRR岫粳11號 00RRRRRRR-R岫136-16號00RSRRRRRRR岫191-10號00RRRRRRRRR岫191-23號00RRRRRRRRR岫191-7號00RRRRRRRRR岫87-15號00RRRRRRRRR岫87-22號00RRRSRRRR-岫粳12號00RR-RRRRRR岫粳14號00---------岫粳15號00---------玉粳13號00R--------玉粳14號00R--------靖粳8號10RRSRSRRRR靖粳9號30SRSSSSSSS靖粳9B號30SRRRSRSSS岫07-33號30RRRRSRSRS楚粳22號11RRRRRRRRR云稻2號11RRRRSRRRR岫糯3號31RRRRRRRRR鳳稻19號03RRSRSRRRR靖粳18號03RRSRSRRRR楚粳21號13RRRRRRRRR轟雜13523SRSRRRSSS楚粳30號33SRRRSRRRS合系20號33RRRRRRRRR云粳23號33SRRRRRRRR

注：“R”表示抗??；“S”表示感病；“-”表示未測定。

Notes: ‘R’ referred to resistant; ‘S’ referred to susceptible; ‘-’ referred to non-determined.

3 討 論

采用田間自然誘發(fā)對水稻材料進行抗性鑒定是有效開展抗病育種、新育成品種的抗性評價及重要抗源發(fā)掘的重要手段[9-10]。本研究對云南近40年育成的188個粳稻品種(系)對稻瘟病葉、穗瘟的抗性進行鑒定，其中有147個品種(系)感或高感穗瘟，占全部鑒定品種(系)的77.78 %。通過田間病圃鑒定，篩選出38份葉瘟和穗瘟均表現(xiàn)抗病的品種；并進一步結(jié)合室內(nèi)接種分析，從188個材料中篩選出了楚粳13號、鳳稻16號和岫03-8號等13個抗性表現(xiàn)好的抗源材料可供抗病育種利用。但值得注意的是，近年來新育成的品種如鳳稻23號、靖粳16號、云粳20號和麗粳11號等品種在抗性鑒定圃中均高感稻瘟病，表明這些品種在推廣種植時存在大面積感病的風(fēng)險。這也反映出在當(dāng)前的抗病育種中存在抗性資源利用少、稻種抗性遺傳基礎(chǔ)狹窄的問題。利用地方品種資源和野生稻拓寬栽培稻遺傳基礎(chǔ)是解決水稻品種遺傳基礎(chǔ)狹窄、抗逆性弱的有效途徑[15-17]。進一步充分挖掘有效抗源并合理地應(yīng)用于水稻抗病育種，可更好解決現(xiàn)有品種遺傳基礎(chǔ)狹窄、抗性弱的瓶頸問題，促進水稻產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展[10]。

由于氣候類型、水稻品種布局的差異，不同稻區(qū)間存在稻瘟病菌致病種群結(jié)構(gòu)的差異以及稻瘟病菌的易變性[1, 4, 7]，在一個病圃中表現(xiàn)抗病的品種(系)并不代表其能在生產(chǎn)上所有的區(qū)域進行大面積的推廣。鳳稻17號在保山病圃中對葉瘟、穗瘟均表現(xiàn)出了很好的抗性，但室內(nèi)接種表明該品種對5個菌株表現(xiàn)感病，在生產(chǎn)上應(yīng)用存在感病的風(fēng)險。該品種近年在云南的東川、羅平等地種植后的感病現(xiàn)象就說明了這個問題。因此，要更加準(zhǔn)確地進行育成品種(系)的抗性評價，一方面可采用多點設(shè)圃進行鑒定，另一方面可同時結(jié)合室內(nèi)不同稻區(qū)稻瘟病菌的接種分析，明確品種(系)的抗性，為新品種的合理布局和推廣提供科學(xué)依據(jù)。同時，多稻區(qū)表現(xiàn)抗病的材料或?qū)Φ疚敛∪后w表現(xiàn)廣譜抗性的基因用于抗病育種或品種抗性的改良，將大大降低育成品種在生產(chǎn)上快速感病的風(fēng)險[9-10, 14]。

開展水稻品種的稻瘟病抗性評價分析，品種的葉瘟和穗瘟之間存在一定的相關(guān)性，但也有部分品種例外，出現(xiàn)葉穗瘟表現(xiàn)抗感相反的結(jié)果[9-10,18-20]。本研究對188份材料的稻瘟病抗性進行鑒定，有15個品種(系)的葉瘟抗性和穗瘟抗性表現(xiàn)有差異，其中楚粳23號、楚粳25號和鳳稻21號等11個品種(系)抗葉瘟但感染穗瘟；而昌粳8號、昌粳9號、昌粳11號和麗粳04號則中感或感葉瘟但抗穗瘟。這與否是由于田間苗期和抽穗期稻瘟病菌致病種群存在差異，還是預(yù)示著這些品種(系)在葉瘟和穗瘟的抗性上存在不同的抗性基因，如持有穗瘟抗性基因Pb1的水稻品種在苗期表現(xiàn)感病但卻抗穗稻瘟[21];或者在這些品種(系)中抗葉瘟的基因不一定抗穗瘟等問題，尚有待于進一步的研究。

4 結(jié) 論

本研究采用田間自然發(fā)病結(jié)合室內(nèi)人工接種稻瘟病菌單孢菌株的方法，對云南的188份水稻品種(系)進行稻瘟病抗性評價分析，明確了這些品種的稻瘟病抗性水平；篩選獲得的12份在田間和室內(nèi)接種均表現(xiàn)抗病的品種(系)可作為有效的抗源用于抗病育種。