周震宇，許 奇

(蘇州市藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究中心，蘇州 215014)

復(fù)方薄荷柳酯搽劑又名清涼止癢水，是OTC乙類皮膚外用制劑，具有清涼、消炎、止癢、消腫和止痛的作用，臨床用于皮炎、痱子、皮膚瘙癢等皮膚病，療效顯著。其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[1]較為簡(jiǎn)單，未對(duì)有效成分進(jìn)行含量測(cè)定。該搽劑的主藥成分有薄荷腦、樟腦、水楊酸甲酯和桉油精等。薄荷腦是從薄荷的葉和莖中提取，其含量可用GC法測(cè)定[2-4]；樟腦是萜類化合物，室溫下為白色或透明的蠟狀固體，其含量測(cè)定也可用GC法[5]；水楊酸甲酯和桉油精分別是冬青油和桉葉油的主要成分，水楊酸甲酯的檢測(cè)方法通常為液相色譜法[6-7]，而桉油精則在《中國(guó)藥典》中有專屬的檢測(cè)方法[8]。有文獻(xiàn)報(bào)道，使用毛細(xì)管氣相色譜法，能對(duì)其主藥成分中的2或3種成分進(jìn)行含量測(cè)定[9-14]，但未見文獻(xiàn)報(bào)道能同時(shí)測(cè)定4種主要成分的含量。筆者采用毛細(xì)管氣相色譜法同時(shí)測(cè)定薄荷腦、樟腦、水楊酸甲酯和桉油精的含量，該方法操作簡(jiǎn)便，定量準(zhǔn)確，結(jié)果滿意。

1 儀器與試藥

1.1儀器 Agilent 7890B氣相色譜儀，EZ Chrome軟件控制儀器和數(shù)據(jù)采集(美國(guó)安捷倫公司)；XS205DU電子天平(瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司)；TGH-300氫氣發(fā)生器(蘇州市萊頓科學(xué)儀器有限公司)；LGA-5000W空氣壓縮機(jī)(上海市安譜科學(xué)儀器有限公司)。

1.2試藥 復(fù)方薄荷柳酯搽劑(江蘇省蘇州市常熟星海制藥有限公司，批號(hào)：20160501，20160502和20160503)；對(duì)照品：薄荷腦(批號(hào)110728-200506)，樟腦(批號(hào)110747-201409)，水楊酸甲酯(批號(hào)110707-201413)和桉油精(批號(hào)110788-201506)，均由中國(guó)食品藥品檢定研究院提供；萘(內(nèi)標(biāo))(批號(hào)40035561，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；無水乙醇為色譜純(德國(guó)默克公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件 色譜柱：Agilent DB-WAX毛細(xì)管色譜柱(30 m×0.32 mm，0.50 μm)，分流進(jìn)樣，分流比為5∶1；載氣為N2；流速為2.0 mL·min-1；空氣流速為400 mL·min-1；氫氣流速為40 mL·min-1；檢測(cè)器為FID；進(jìn)樣口溫度為160 ℃，檢測(cè)器溫度為210 ℃；程序升溫：起始溫度為100 ℃，保持4 min，以50 ℃·min-1速率升溫到200 ℃，維持7 min；進(jìn)樣量為1.0 μL，分析時(shí)間為13 min。在上述色譜條件下，各組分的理論塔板數(shù)均不低于30 000，各待測(cè)組分與相鄰峰分離度均大于1.5，色譜圖見圖1。

2.2溶液的制備

2.2.1混合對(duì)照品溶液 分別精密稱取薄荷腦對(duì)照品、樟腦對(duì)照品、水楊酸甲酯對(duì)照品和桉油精對(duì)照品243.62，100.14，102.87和101.19 mg，置于同一100 mL量瓶中，加無水乙醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，得薄荷腦、樟腦、水楊酸甲酯和桉油精質(zhì)量濃度分別為2.436 2，1.001 4，1.028 7 和1.011 9 mg·mL-1的混合對(duì)照品溶液，置于4 ℃冰箱中保存，備用。

2.2.2內(nèi)標(biāo)溶液 精密稱取萘100.21 mg，置于100 mL量瓶中，用無水乙醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成質(zhì)量濃度為1.002 1 mg·mL-1的溶液。

2.2.3對(duì)照品溶液 精密量取2.2.1項(xiàng)下制備的混合對(duì)照品溶液10 mL，置于100 mL量瓶中，精密量取2.2.2項(xiàng)下制備的內(nèi)標(biāo)溶液10 mL，置于同一量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.4供試品溶液 精密量取復(fù)方薄荷柳酯搽劑2 mL，置于100 mL量瓶中，精密量取2.2.2項(xiàng)下制備的內(nèi)標(biāo)溶液10 mL，置于同一量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，再用0.45 μm微孔濾膜過濾，即得。

2.2.5陰性樣品溶液 根據(jù)處方比例制備不含薄荷腦、樟腦、水楊酸甲酯和桉油精的陰性樣品，按照2.2.4項(xiàng)下制備方法制成陰性樣品溶液，按照2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果表明，陰性樣品無干擾，見圖1。

2.3線性關(guān)系、檢出限與定量限 分別精密量取2.2.1項(xiàng)下制備的混合對(duì)照品溶液2，4，10，14和20 mL，分別置于5個(gè)100 mL量瓶中，在上述各量瓶中精密加入內(nèi)標(biāo)溶液10 mL，再用無水乙醇稀釋至刻度，搖勻；按照2.1項(xiàng)下色譜條件對(duì)系列對(duì)照品溶液進(jìn)行測(cè)定，分別以薄荷腦、樟腦、水楊酸甲酯和桉油精的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(x)、薄荷腦、樟腦、水楊酸甲酯和桉油精與內(nèi)標(biāo)峰面積的比值為縱坐標(biāo)(y)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程及線性范圍見表1。另將混合對(duì)照品溶液逐級(jí)稀釋至一定質(zhì)量濃度，以儀器的信噪比S/N為10時(shí)測(cè)定定量限，信噪比S/N為3時(shí)測(cè)定檢出限，見表1。結(jié)果表明，4種主藥成分化合物均呈良好的線性關(guān)系。

圖1GC圖

A.薄荷腦、樟腦、水楊酸甲酯和桉油精混合對(duì)照品；B.復(fù)方薄荷柳酯搽劑樣品；C.陰性樣品；1.桉油精；2.樟腦；3.薄荷腦；4.萘；5.水楊酸甲酯。

Fig.1 GC chromatograms

A.mixed standards of menthol，camphor，methylsalicylate and eucalyptol；B.sample of Fufang Boheliuzhi Liniment;C.negative sample；1.eucalyptol；2.camphor；3.menthol；4.naphthalene；5.methylsalicylate.

表14個(gè)主藥成分化合物的回歸方程及線性范圍

Tab.1 Regression equations and linear ranges of the 4 main compounds

成分回歸方程r線性范圍/μg·mL-1定量限/ng檢出限/ng薄荷腦y1=0.007 9x1-0.004 40.999 948.72^487.240.30.1樟腦y2=0.007 9x2+0.004 50.999 920.03^200.280.20.1水楊酸甲酯y3=0.005 2x3+0.002 70.999 920.57^205.740.40.1桉油精y4=0.007 5x4+0.010 40.999 620.24^202.390.50.2

2.4精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取2.2.1項(xiàng)下制備的混合對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定各組分峰面積，計(jì)算RSD值，結(jié)果符合精密度實(shí)驗(yàn)的要求，說明該儀器精密度良好。見表2。

2.5重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取同一批樣品(批號(hào)20160501)，按照2.2.4項(xiàng)下方法制備供試品溶液，平行操作6份，制得樣品溶液，按照2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算4種主藥成分含量的RSD值，見表2，薄荷腦、樟腦、水楊酸甲酯和桉油精的平均含量分別為100.5%，98.8%，96.4%和82.9%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.6穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取同一供試品溶液，按照2.1項(xiàng)下色譜條件，在0，2，4，8，12和16 h進(jìn)行測(cè)定，各組分的RSD值見表2，結(jié)果表明，供試品溶液在16 h內(nèi)穩(wěn)定。

表24種主藥成分精密度、重復(fù)性和穩(wěn)定性的實(shí)驗(yàn)結(jié)果

Tab.2 Results of the precision，repeatability and stability of the 4 main components

成分RSD/%精密度重復(fù)性穩(wěn)定性薄荷腦0.480.341.93樟腦0.130.170.79水楊酸甲酯0.230.130.71桉油精0.650.411.44

2.7回收率實(shí)驗(yàn) 精密量取已知含量的樣品(批號(hào)20160503)1 mL，共9份，分別置于100 mL量瓶中，按照低、中和高3個(gè)質(zhì)量濃度分別精密加入混合對(duì)照品溶液4，5和6 mL，按照2.2.4項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按照2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定3組質(zhì)量濃度共9份樣品，計(jì)算回收率，結(jié)果見表3。

表34種主藥成分回收率的實(shí)驗(yàn)結(jié)果

Tab.3 Results of the recovery test of the 4 main components (n=9)

成分樣品中含量/mg加入量/mg測(cè)定量/mg回收率/%平均回收率/%RSD/%薄荷腦12.199.7522.10101.66101.903.3012.199.7521.95100.1312.199.7521.95100.1712.1912.1824.57101.6312.1912.1824.47100.8112.1912.1824.48100.8712.1914.6228.38110.7312.1914.6226.89100.5612.1914.6226.88100.51樟腦4.924.018.94100.27100.241.704.924.018.9299.894.924.018.93100.164.925.019.98101.114.925.019.8598.444.925.019.8498.164.926.0111.19104.084.926.0110.9399.974.926.0110.93100.04水楊酸4.844.119.00101.10100.611.65甲酯4.844.118.99100.764.844.118.99100.864.845.149.98101.014.845.149.9098.354.845.149.8998.184.846.1711.25103.874.846.1711.05100.624.846.1711.06100.73桉油精4.054.058.0298.1097.321.334.054.058.0298.034.054.058.0298.184.055.068.9095.904.055.068.9095.804.055.068.9195.824.056.079.9196.494.056.0710.0498.714.056.0710.0598.85

2.8含量測(cè)定 取樣品3批，精密量取2 mL，按照2.2.4項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按照2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，以內(nèi)標(biāo)法計(jì)算含量，結(jié)果見表4。

表4復(fù)方薄荷柳酯搽劑中4種主藥成分的含量

Tab.4 The contents of the 4 main components in Fufang Boheliuzhi Liniment (n=3)

成分不同批號(hào)搽劑中的含量(標(biāo)示量)/%201605012016050220160503薄荷腦100.5100.1101.6樟腦98.897.998.4水楊酸甲酯96.496.496.8桉油精82.981.581.0

3 討論

分別選用正十六烷、正三十二烷、環(huán)己酮和萘作為內(nèi)標(biāo)物，綜合其沸點(diǎn)和出峰情況等因素，最后選定萘為最佳內(nèi)標(biāo)物，且供試品溶液在萘峰的位置上沒有出現(xiàn)色譜峰，不存在干擾。內(nèi)標(biāo)法測(cè)定使結(jié)果更加準(zhǔn)確。

當(dāng)柱溫低時(shí)，樣品中的其他揮發(fā)性成分保留時(shí)間太長(zhǎng)；當(dāng)柱溫高時(shí)，桉油精與溶劑峰不能有效分離。經(jīng)過摸索和優(yōu)化，采用色譜柱程序升溫測(cè)定，分離效果好，分析時(shí)間合適；同時(shí)優(yōu)選Agilent DB-WAX毛細(xì)管色譜柱(30 m×0.32 mm，0.50 μm)，比較HP-INNOWAX、OV-17和HP-5等毛細(xì)管色譜柱；結(jié)果表明，本文中的方法適用于HP-INNOWAX，而使用OV-17和HP-5的毛細(xì)管色譜柱并不能將各主藥成分有效分離。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，采用文中介紹的毛細(xì)管氣相色譜法能夠同時(shí)測(cè)定薄荷腦、樟腦、水楊酸甲酯和桉油精的含量，且該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，有利于制劑的質(zhì)量控制。本文所述方法，較之填充柱氣相色譜法[15]，無論是理論塔板數(shù)還是分離度都有顯著的提高，分析時(shí)間也更短，更有利于定性定量分析。

處方中含有桉葉油。桉葉油是一種無色油狀液體，其主要成分是桉油精[16-20]。因此，桉油精的含量可通過桉葉油的標(biāo)示量進(jìn)行計(jì)算，桉葉油的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)可通過桉油精的含量來體現(xiàn)。

綜上所述，筆者建議對(duì)現(xiàn)行的執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行修訂，使用毛細(xì)管氣相色譜法進(jìn)行定性鑒別和含量測(cè)定，薄荷腦、樟腦和水楊酸甲酯的限度定為標(biāo)示量90.0%～110.0%，桉油精的限度定為不少于桉葉油標(biāo)示量的70%[21]。