李風梅 張龔敏 吳林蔚 廣東省藥品監(jiān)督管理局審評認證中心 （廣東 廣州 510080）

內(nèi)容提要： 根據(jù)《體外診斷試劑注冊管理辦法》《體外診斷試劑臨床試驗技術指導原則》及《免于進行臨床試驗的體外診斷試劑臨床評價資料基本要求（試行）》等的要求，對藥敏檢測試劑盒的性能指標、臨床評價等方面進行研究分析。

隨著醫(yī)學的日益發(fā)展進步，疾病治療中如何合理使用抗生素，進而達到有效減少或避免耐藥菌株的產(chǎn)生，已成為現(xiàn)今衛(wèi)生領域的一大重要任務。故而臨床上在控制患者感染時，實驗室診斷中抗菌藥物敏感性試驗的結(jié)果至關重要。藥敏檢測不但可以直接指導患者用藥，預測抗菌藥物治療效果的好壞，亦可評估耐藥菌感染的一些流行病學特征，從而為控制及預防耐藥菌的流行擴散提供應對措施[1]。

目前臨床診斷實驗室多采用自動化藥敏分析系統(tǒng)進行藥敏檢測，相比傳統(tǒng)的手工法，自動化操作的重現(xiàn)性、檢測結(jié)果的準確性及可靠性都得到了大幅提升。進而，市場上大量自動化藥敏分析系統(tǒng)應運而生。

一般而言，藥敏控制系統(tǒng)包括藥敏檢測試劑盒及其配套的微生物鑒定藥敏分析儀器兩部分。本文結(jié)合注冊技術審評的要求，對自動化藥敏分析系統(tǒng)中藥敏檢測試劑盒的安全有效性進行研究[2]。

1.性能要求

藥敏分析系統(tǒng)中藥敏試劑盒部分應結(jié)合常規(guī)注冊中體外診斷試劑的性能要求進行考慮。藥敏試劑盒介于定性檢測試劑與定量檢測試劑之間，沒有完全清晰的界定，使用時先接種培養(yǎng)出鑒定細菌，最終確定出鑒定細菌的最低殺菌濃度。

在確定最低殺菌濃度之前，應先保證使用產(chǎn)品如下的一些基本性能要求：

1.1 無菌要求

培養(yǎng)鑒定菌株的前體時，培養(yǎng)基應保持無菌環(huán)境，無其他雜菌的干擾。驗證該性能要求時，可抽取5%的培養(yǎng)基進行無菌試驗，培養(yǎng)結(jié)果應無細菌生長。若抽檢的5%培養(yǎng)基中出現(xiàn)污染，則全部培養(yǎng)基應進行無菌試驗，出現(xiàn)污染的培養(yǎng)基棄去不用。

1.2 pH要求

細菌對pH的敏感性也是影響其生長的重要因素，偏酸性或偏堿性的生存環(huán)境都可能出現(xiàn)抑菌的現(xiàn)象，從而造成結(jié)果判斷的假陰性出現(xiàn)。故臨床上，無菌培養(yǎng)基的pH一般要求7.2左右，或結(jié)合產(chǎn)品定位菌種的實際生長特點進行考慮，如結(jié)核桿菌、鏈球菌等菌種pH要求存在不同程度的差異。

1.3 生長試驗

所謂生長試驗，即前述無菌、pH兩個基本性能滿足要求后，應采用對照菌株（或質(zhì)控菌株）進行培養(yǎng)，確定該培養(yǎng)基可長出培養(yǎng)菌。排除培養(yǎng)基因為營養(yǎng)不足或其他原因造成無菌生長的假陰性出現(xiàn)。不同的鑒定菌種其藥敏對照菌種存在差異，如結(jié)核桿菌的質(zhì)控菌種可采用結(jié)核分枝桿菌標準敏感株H37Ra（Mycobacterium tuberculosis H37Ra）ATCC 25177，[CMCC（B）93020]無毒菌株。

1.4 最低殺菌濃度

明確培養(yǎng)基可以培養(yǎng)出正常對照菌株（或質(zhì)控菌株）后，可對鑒定菌種進行下一步的最小殺菌濃度探索。衛(wèi)健委每年發(fā)布一系列針對不同菌種藥物敏感性濃度的相關指南性文件?？紤]到臨床實際情況中，不同地區(qū)、不同人群、不同實驗室中病原微生物的分布及生長、耐藥等流行病學存在差異。具體應用過程中，參考該指南性文件內(nèi)容的同時，應結(jié)合實際環(huán)境特點，對不同鑒定菌種的抗菌敏感濃度進行研究。驗證該性能要求時，應針對不同的細菌分開進行研究。每個細菌再分不同的抗菌藥物及不同抗菌藥物的不同濃度，依次梯度逐步遞增進行培養(yǎng)，從而最終與對照菌種進行對比，選出抑菌或者殺菌的最低藥物濃度。如結(jié)核桿菌大多選異煙肼、鏈霉素、利福平、卡那霉素等多種抗菌藥物進行研究，其中異煙肼抗菌濃度結(jié)合衛(wèi)生部藥敏指南濃度進行擴展探索。

2.生產(chǎn)過程控制

藥敏試劑盒生產(chǎn)工藝基本以基礎液的分裝配置、過濾除菌為主，最終培養(yǎng)基無菌則是關鍵所在。故生產(chǎn)控制中涉及到的無菌室、微生物室、陽性對照室的空調(diào)系統(tǒng)應能夠有效避免交叉污染[3]。檢測用到的質(zhì)控菌株應可溯源并記錄其詳細來源，如菌株的批號、效期、溯源途徑、主要技術指標、保存狀態(tài)等信息。藥敏試劑盒作為微生物檢測試劑盒中的一種，除生產(chǎn)設備要有要求之外，其工作人員亦應該具備一定的衛(wèi)生及微生物專業(yè)知識，應對其菌種的操作，包括菌種復蘇、傳代、培養(yǎng)增菌以及使用過程中的潔凈操作、防護等工作熟悉掌握，從而以確保生產(chǎn)人員的安全及產(chǎn)品的有效。

3.臨床驗證[4-6]

新版的免臨床目錄已發(fā)布，免臨床的體外診斷試劑已增加至將近400個品種。用于淋病奈瑟菌紙片擴散法藥敏試驗及用于真菌的紙片擴散法藥物敏感實驗的藥敏試紙屬于免臨床的范疇，具體評價方法應參照《免于進行臨床試驗的體外診斷試劑臨床評價資料基本要求（試行）》的要求進行臨床評價。

非免臨床的藥敏檢測試劑應按照《體外診斷試劑臨床試驗技術指導原則》的要求開展臨床試驗。這里以結(jié)核桿菌為例，進行簡單闡述。藥敏檢測試劑盒進行注冊檢驗合格之后，應選擇兩家國家局備案的醫(yī)療器械臨床試驗機構(gòu)開展臨床研究。通過各臨床單位倫理委員會審批，并向當?shù)乇O(jiān)管部門進行臨床備案之后，則可開展臨床樣本的收集。藥敏檢測試劑相對特殊，不同的抗菌藥物臨床試驗應單獨分別達到法規(guī)的要求。如結(jié)核桿菌要驗證異煙肼、鏈霉素、利福平三種抗生素的敏感性時，首先選取前期研發(fā)研究的濃度生產(chǎn)相應

的培養(yǎng)基，如0.2μg/mL異煙肼培養(yǎng)基、4μg/mL鏈霉素培養(yǎng)基、40μg/mL利福平培養(yǎng)基。試驗過程中，這三種抗菌藥物異煙肼、鏈霉素、利福平在兩家臨床單位各自開展不少于200例的樣本研究。每種陽性率不低于30%，即60例的要求。若每種抗菌藥物涉及不同濃度，則每種濃度應達到統(tǒng)計學要求進行研究。與合適的對比產(chǎn)品同步進行試驗后，最終應將試驗結(jié)果應分別進行統(tǒng)計，形成統(tǒng)計報告。若簡單的定性，則每種抗菌藥物應與對比產(chǎn)品試驗結(jié)果進行陰陽性、總符合率及一致性的統(tǒng)計分析。若涉及到不同的抗菌濃度，統(tǒng)計過程則應考慮不同抗菌濃度的分布及結(jié)果，選擇合理的統(tǒng)計方法進行統(tǒng)計分析。

4.結(jié)語

目前，體外診斷試劑管理的法規(guī)相對全面完善。在眾多指南文件中，生化、免疫類產(chǎn)品已發(fā)布的國、行標及指導原則相對較多；而微生物檢測方面的試劑一直尚未有相關的、比較系統(tǒng)的指導性文件發(fā)布。

本文結(jié)合現(xiàn)行法規(guī)要求及藥敏檢測試劑盒的實際特點，對涉及藥敏檢測試劑盒安全有效性的幾個關鍵點進行簡要分析?？蔀榧夹g審評部門審評該類產(chǎn)品的注冊申報資料提供參考，同時也間接指導相關企業(yè)產(chǎn)品注冊申報資料的準備及撰寫。