熊永高 彭麗紅 解緒紅 李林株 劉偉 張棟武

【摘要】 目的：探討Gli1和VEGF在前列腺增生組織中的表達及相關(guān)性。方法：選擇2013年1月-2017年1月本院術(shù)后病理確診為前列腺增生患者的病理臘塊標(biāo)本為觀察組，同期確診為前列腺癌患者病理蠟塊為陽性對照組。比較Gli1和VEGF在前列腺增生和前列腺癌的表達差異，以及Gli1和VEGF在各分度前列腺增生組織的表達差異，分析Gli1和VEGF在各分度前列腺增生組織的相關(guān)性。結(jié)果：Gli1和VEGF在前列腺增生組織中呈陰性或弱陽性，在前列腺癌中表達呈陽性或強陽性，觀察組Gli1和VEGF陽性率均明顯低于陽性對照組（P<0.05）;Gli1和VEGF陽性率在前列腺增生組織各分度中呈上升趨勢，即Ⅳ度增大>Ⅲ度增大>Ⅱ度增大>Ⅰ度增大，但組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）;Gli1和VEGF陽性率與前列腺組織Ⅰ～Ⅳ度增大無相關(guān)性（P>0.05）。結(jié)論：前列腺增生雖屬良性病變，Gli1和VEGF表達陰性或弱陽性，且陽性率不高，顯著低于前列腺癌，但由于Gli1可能異常激活，以及VEGF的新生血管供養(yǎng)，其有發(fā)展成為前列腺癌的風(fēng)險，需引起重視，及早治療。

【關(guān)鍵詞】 Gli1 VEGF 前列腺增生 前列腺癌

[Abstract] Objective： To investigate the expression and correlation of Gli1 and VEGF in progtatic hyperplasis. Method： Pathological wax specimens of patients with postoperative pathological diagnosis of prostate hyperplasia in our hospital from January 2013 to January 2017 were selected as the observation group.The pathological wax specimens of the patients diagnosed with prostatic cancer at the same time were selected as the positive control group. The expression differences of Gli1 and VEGF in prostatic hyperplasia and prostatic cancer， as well as the expression differences of Gli1 and VEGF in prostatic hyperplasia tissues of different grades were compared， and the correlation between Gli1 and VEGF in prostatic hyperplasia tissues of different grades was analyzed. Result： Gli1 and VEGF were negative or weakly positive in prostatic hyperplasia tissues， and positive or strongly positive in prostatic cancer. The positive rates of Gli1 and VEGF in the prostatic hyperplasia group were significantly lower than those in the positive control group （P<0.05）. The positive rates of Gli1 and VEGF showed an upward trend in prostatic hyperplasia tissues， Ⅳ degree increased >Ⅲ degree increased > Ⅱ degree increased > Ⅰ degree increased， but there was no statistical difference between two groups（P>0.05）. There was no correlation between the positive rate and prostate tissue enlargement （P>0.05）. Conclusion： Although prostatic hyperplasia is a benign lesion， the expression of Gli1 and VEGF are negative or weakly positive， and the positive rate is not high， which is significantly lower than that of Progtatic cancer. However， because Gli1 may be abnormally activated and VEGF can provide new blood vessels， it has the risk of developing into progtatic cancer， which requires attention and early treatment.

[Key words] Gli1 VEGF Progtatic hyperplasis Prostatic cancer

First-authors address： Foshan Gaoming Hospital Affiliated to Guangdong Medical University， Foshan 528500， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2019.31.036

隨著社會老齡化，前列腺增生（benign progtatic hyperplasis，BPH）發(fā)病人群逐年增加而備受關(guān)注[1]。BPH嚴(yán)重者可導(dǎo)致腎臟損害，甚至危及生命。有報道稱，前列腺增生是國人前列腺癌發(fā)病的危險因素[2]。因而，對前列腺增生疾病的研究尤為重視。研究發(fā)現(xiàn)Hh（Hedgehog）信號通路不僅與細(xì)胞增殖分化和各胚層組織發(fā)育有關(guān)，還與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，其中包括前列腺癌[3-4]。Hh信號通路包括分泌型糖蛋白配體Hedgehog，跨膜蛋白受體復(fù)合物（Ptched和Smo），核轉(zhuǎn)錄因子（Gli1、Gli2、Gli3）蛋白以及下游靶基因[5-6]。有研究證實Hh信號通路在前列腺癌等多種腫瘤的侵襲及血管重建中發(fā)揮重要作用[7]。Gli1是Hh信號通道的關(guān)鍵因子[8]。血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF），是一種高度特異性的內(nèi)皮細(xì)胞促分裂因子，在前列腺新生血管的生成和維持方面有重要作用[9-10]。研究表明Gli1和VEGF在癌旁正常組織、前列腺增生組織和前列腺癌中均有表達，且具有顯著性差異[5，11-13]。目前，對Gli1和VEGF在各分度前列腺增生組織的表達情況及相關(guān)性鮮有報道。本研究比較Gli1和VEGF在前列腺增生和前列腺癌的表達差異，以及Gli1和VEGF在各分度前列腺增生組織的表達差異，分析Gli1和VEGF在各分度前列腺增生組織的相關(guān)性，探索其可能的臨床意義?，F(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2013年1月-2017年1月本院術(shù)后病理確診為前列腺增生患者病理存檔臘塊標(biāo)本67例為觀察組，同期確診為前列腺癌患者病理存檔蠟塊25例為陽性對照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：術(shù)前均未經(jīng)過治療，術(shù)后病理診斷為前列腺增生或前列腺癌的患者[14-15]。排除標(biāo)準(zhǔn)：年齡<50歲或≥100歲;合并尿路結(jié)石;有盆腔手術(shù)或損傷病史;合并急性前列腺炎或性傳播性疾病;前列腺癌發(fā)生轉(zhuǎn)移;肝功能檢測ALT、AST超過正常值1.5倍或有腎功能受損;有心腦血管、肝、腎和造血系統(tǒng)等嚴(yán)重原發(fā)性疾病，控制不良的糖尿病和/或糖尿病神經(jīng)病變;精神疾病。本研究已通過本院倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 試劑與儀器 Gli1單克隆抗體和VEGF單克隆抗體（均購自美國Santa Cruz公司）。免疫組化試劑盒、濃縮型胰蛋白酶消化液、DAB底物顯色劑、多聚賴氨酸（POLY-L-LYSINE）粘片劑均購自廣州市天騏生物科技有限公司;光學(xué)顯微鏡（奧林巴斯）;隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱（潤華）;TN-100型托盤扭力天平（無錫建儀）;微量可調(diào)移液器（艾本德）;石蠟切片機（國產(chǎn)）。

1.3 方法 所有患者術(shù)前均未實施治療，且切除后經(jīng)福爾馬林固定，石蠟包埋的組織塊。制成5 μm厚的石蠟切片，行組織病理學(xué)HE染色及Gli1和VEGF免疫組織化學(xué)染色。免疫組織化學(xué)法嚴(yán)格按照說明書操作。

1.4 免疫組織化學(xué)結(jié)果評定 每次實驗均以前列腺癌為陽性對照，以PBS代替一抗作為陰性對照。染色結(jié)果陽性判斷方法：在光學(xué)顯微鏡下對每張切片隨機選擇5個低倍鏡（×20）視野，按切片中細(xì)胞著色強度情況評分：0分，細(xì)胞無顯色;1分，為淺黃色;2分，為棕黃色;3分，為棕褐色[16]。按顯色細(xì)胞比例評分：1分，顯色細(xì)胞占切片中細(xì)胞總數(shù)<25%;2分，26%～50%細(xì)胞顯色;3分，50%以上細(xì)胞顯色。兩者積分的乘積作為染色結(jié)果的判定標(biāo)準(zhǔn)，0分為陰性，1～2分為弱陽性，3～4分為陽性，>4分為強陽性。Gli1以胞漿胞核內(nèi)有棕黃色顆粒為陽性，VEGF以細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色至棕褐色顆粒為陽性。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 13.0軟件對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，計量資料用（x±s）表示，組間比較采用t檢驗，組內(nèi)比較采用配對t檢驗;計數(shù)資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗或Fisher精確概率法，采用字2檢驗（列聯(lián)系數(shù)C）進行相關(guān)性檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組一般資料比較 觀察組67例患者，年齡61～95歲，平均（71.4±10.7）歲;體重54～77 kg，平均（66.3±6.3）kg。其中Ⅰ度增大13例，年齡61～80歲，平均（67.6±9.8）歲;體重60～77 kg，平均（67.5±6.2）kg。Ⅱ度增大21例，年齡63～87歲，平均（69.4±10.1）歲;體重58～72 kg，平均（66.6±5.9）kg。Ⅲ度增大18例，年齡65～90歲，平均（71.4±10.3）歲;體重56～70 kg，平均（65.1±5.8）kg。Ⅳ度增大15例，年齡6795歲，平均（76.3±10.4）歲;體重54～68 kg，平均（64.5±6.1）kg。陽性對照組25例患者，年齡65～96歲，平均（74.4±10.2）歲;體重54～67 kg，平均（64.1±5.8）kg。兩組年齡和體重比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（t=-0.121、0.325，P=1.561、0.988），具有可比性。

2.2 Gli1和VEGF在前列腺增生和前列腺癌中的陽性率比較 Gli1和VEGF在前列腺增生組織中呈陰性或弱陽性，在前列腺癌中表達呈陽性或強陽性。觀察組Gli1和VEGF陽性率均明顯低于陽性對照組（P<0.05），見表1。

2.3 Gli1和VEGF在各分度前列腺增生組織的陽性率比較 Gli1和VEGF在前列腺增生組織中的陽性率呈上升趨勢，即Ⅳ度>Ⅲ度>Ⅱ度>Ⅰ度，但組間比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），見表2。

2.4 Gli1和VEGF與各分度前列腺增生組織的相關(guān)性分析 Gli1和VEGF陽性率與前列腺組織Ⅰ～Ⅳ度增大均無相關(guān)性（列聯(lián)系數(shù)C=0.063，P=0.966;列聯(lián)系數(shù)C=0.114，P=0.828）。

3 討論

Gli1具有很強的轉(zhuǎn)錄激活功能，能靈敏地反映Hh信號通路的活性[5]。Chen等[17]研究了前列腺癌前、前列腺癌及前列腺良性病變中的Hh信號通路相關(guān)蛋白的表達，發(fā)現(xiàn)前列腺癌中Shh、Ptch1、Gli-1均存在表達。孫皓[5]研究表明Gli1在前列腺癌中呈中至高強度表達，在癌旁正常組織中無表達或弱陽性表達。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，Gli1在前列腺增生組織中呈陰性或弱陽性，在前列腺癌中表達呈陽性或強陽性;前列腺增生組織中Gli1陽性率顯著低于前列腺癌，同孫皓[5]和唐亞司[11]研究結(jié)果一致，提示Hh信號通路參與了基底細(xì)胞增生的形成并向癌癥方向發(fā)展，推測可能是通過將正常的基底細(xì)胞轉(zhuǎn)化為腫瘤干細(xì)胞，在腫瘤形成過程中，Gli1的異常激活可能是必需的。張遠(yuǎn)東等[18]亦證實Gli1基因在前列腺癌細(xì)胞PC-3細(xì)胞中確有表達。VEGF是血管生長因子大家族的一員，其與受體結(jié)合后發(fā)揮可增加血管通透性，是目前已知最強的血管通透劑，亦可刺激內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移和體內(nèi)血管生成。李偉等[19]研究發(fā)現(xiàn)VEGF在前列腺癌組織中的陽性表達率顯著高于前列腺增生和前列腺上皮內(nèi)瘤變組織。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，前列腺增生和前列腺癌均有VEGF表達，且前者表達陰性或弱陽性，后者表達陽性和強陽性，且陽性率顯著低于前列腺癌，與前面研究結(jié)果一致，提示前列腺增生的發(fā)生依賴新生血管的生成，前列腺的增大依靠新生血管提高營養(yǎng)，同前列腺癌等大多數(shù)實體腫瘤生長相似，VEGF高表達使腫瘤血管生成增多，使腫瘤細(xì)胞得到更多營養(yǎng)而迅速增殖，從而促進癌細(xì)胞的浸潤和轉(zhuǎn)移[20]。因此，血管生成與前列腺增生和前列腺癌的發(fā)生均密切相關(guān)。倪新初等[21]研究亦證實前列腺癌的VEGF和微血管密度（MVD）的測定水平顯著高于BPH，前列腺癌和BPH的VEGF與MVD的測定水平呈正相關(guān)。

唐司亞[11]研究發(fā)現(xiàn)Gli1在前列腺增生和低級別PIN（前列腺上皮內(nèi)瘤變）中的陽性率無顯著性差異，前列腺癌>高級別PIN>低級別PIN，且組間兩兩比較均有統(tǒng)計學(xué)差異。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，Gli1在前列腺Ⅰ～Ⅳ度增生組織組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），與前面的研究結(jié)果相似，提示前列腺增生與正常前列腺細(xì)胞和低級別PIN細(xì)胞形態(tài)學(xué)區(qū)別不大，此時Gli1未被異常激活。高級別的PIN被認(rèn)為具有演變?yōu)榍傲邢侔┑娘L(fēng)險，與前列腺癌合并存在。唐亞司[11]研究發(fā)現(xiàn)相較于前列腺增生和低級別PIN，高PIN和前列腺癌組的Gli1表達顯著增加且無明顯差異，意味著高PIN患者很可能已經(jīng)具備癌變的趨勢或者已經(jīng)癌變。故而，臨床上需重視前列腺增生患者，盡早治療，防止進展至低級別PIN再到高級別PIN。李偉等[19]研究發(fā)現(xiàn)在同種病變中（前列腺增生）VEGF陽性率比較無統(tǒng)計學(xué)差異。本研究結(jié)果亦發(fā)現(xiàn)，VEGF在前列腺Ⅳ度增生組織的組間比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），提示前列腺各分度的細(xì)胞與正常前列腺細(xì)胞相似，屬于良性增生。但本研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，Gli1和VEGF陽性率在前列腺增生組織中的陽性率呈上升趨勢，即Ⅳ度>Ⅲ度>Ⅱ度>Ⅰ度，雖組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），但均提示在前列腺Ⅰ～Ⅳ度增生演變過程中，Gli1和VEGF表達陽性率逐漸增高，其兩者高表達可能對前列腺上皮內(nèi)瘤變及前列腺癌的演變過程有一定推動作用。因此，前列腺增生雖是良性，Gli1和VEGF表達陽性率不高且弱陽性，但也可能有發(fā)展成為前列腺癌的風(fēng)險，需引起重視，及早治療。

目前，關(guān)于Gli1和VEGF在前列腺增生組織中的相關(guān)性鮮有報道。Stecca等[22]研究發(fā)現(xiàn)Gli1表達程度與前列腺癌臨床分期和病理分級（Gleason分級）之間有顯著相關(guān)性。唐司亞[11]發(fā)現(xiàn)前列腺癌分化程度越低，臨床分期越晚，Gli1的表達越強。本研究結(jié)果顯示，Gli1和VEGF陽性表達率均與前列腺組織Ⅰ～Ⅳ度增大無相關(guān)性，再次驗證了前列腺Ⅰ～Ⅳ度增大的組織細(xì)胞差異不大，其Gli1和VEGF陽性表達率均不存在明顯差異。

綜上所述，前列腺增生雖屬良性病變，Gli1和VEGF表達陰性或弱陽性，且陽性率不高，顯著低于前列腺癌，但由于Gli1可能異常激活，以及VEGF的新生血管供養(yǎng)，其有發(fā)展成為前列腺癌的風(fēng)險，需引起重視，及早治療。

參考文獻

[1]王倩，楊勝楠，趙倩茹，等.高齡男性患者前列腺增生與腎功能的相關(guān)性研究[J].中華老年醫(yī)學(xué)雜志，2018，37（3）：284-287.

[2]沈興蓉，程靜，沙蕊，等.前列腺疾病史與中國人群前列腺癌發(fā)病關(guān)系的Meta分析[J].中國農(nóng)村衛(wèi)生事業(yè)管理，2015，35（5）：625-627.

[3] Wu F，Zhang Y，Sun B，et al.Hedgehog Signaling：From Basic Biology to Cancer Therapy[J].Cell Chem Biol，2017，24（3）：252-280.

[4] Gao H，Song Q，Yang J，et al.Carnosol inhibits Hedgehog signaling pathway in both LNCaP and DU145 prostate cancer cell lines[J].Cell Mol Biol（Noisy-le-grand），2017，63（8）：104-108.

[5]孫皓.Hedgehog信號通路在前列腺癌中發(fā)病機制的初步研究[D].長沙：中南大學(xué)，2013.

[6] Robbins D J，F(xiàn)ei D L，Riobo N A.The Hedgehog signal transduction network[J].Sci Signal，2012，5（246）：re6.

[7] Williamson A J，Doscas M E，Ye J，et al.The sonic hedgehog signaling pathway stimulates anaplastic thyroid cancer cell motility and invasiveness by activating Akt and c-Met[J].Oncotarget，2016，7（9）：10472-10485.