曹滿園，張宇飛，王麗英，曹俊國，李文，韓玉萍，許保增※，王守富

（1.中國農(nóng)業(yè)科學院特種經(jīng)濟動物分子生物學重點實驗室，長春 130112；2.吉林農(nóng)業(yè)大學，長春 130118）

犬科動物多為季節(jié)性、單次發(fā)情動物，但經(jīng)馴養(yǎng)的家犬，其季節(jié)性發(fā)情特點逐漸消失，全年均可出現(xiàn)發(fā)情，尤其春、秋季節(jié)的發(fā)情比例較高[1]。犬的乏情期長[2]，平均可達到6～9 個月，有些犬科動物乏情期甚至能達11 個月之久[1]。與其他哺乳動物相比，犬的生殖生理具有特異性，犬卵母細胞所處的卵泡液中含有高達1 000 倍血漿濃度的孕酮[3]，犬排卵時卵母細胞處于生發(fā)泡（Germinal vesicle，GV）期，在輸卵管中恢復與完成減數(shù)分裂[4]。人以及其他許多哺乳動物可以通過人工授精（Artificial insemination，AI）、卵母細胞體外成熟（In vitro maturation，IVM）、體外受精（In vitro fertilization，IVF）和胚胎移植（Embryo transplantation，ET）等人工輔助生殖技術(shù)（Assisted reproductive technology,ART）獲得子代[1]。據(jù)報道，犬卵母細胞發(fā)育到MII 期的平均率通常在10%～20%左右，且卵母細胞的IVM率低，輔助生殖研究進展緩慢，制約了犬相關(guān)生物技術(shù)的發(fā)展與運用[5]。本文根據(jù)近幾年犬相關(guān)研究數(shù)據(jù)，綜述了犬卵母細胞體內(nèi)發(fā)育及體外成熟的研究進展。

1 犬卵母細胞的體內(nèi)成熟

在體內(nèi)，卵泡及輸卵管為犬卵母細胞的成熟提供了條件和因子，且犬卵母細胞與其周圍的顆粒細胞、輸卵管上皮細胞以及精子之間有著結(jié)構(gòu)和功能上的聯(lián)系[6]，這些細胞及其相關(guān)因子調(diào)節(jié)著卵母細胞的生長與成熟。

1.1 卵泡發(fā)育

卵泡是卵巢結(jié)構(gòu)和功能的基本單位，哺乳動物卵母細胞通常在卵泡中發(fā)育成熟，但犬卵母細胞的最后成熟是在卵泡外完成的。犬卵泡發(fā)育（從原始卵泡到排卵）需要170 d，最終的卵泡生長是在排卵前60～100 d 的休情期期間開始的[7]。發(fā)情初期，卵泡直徑1.0～1.5 mm，促黃體素（luteinizing hormone，LH）峰時達到2.0～6.5 mm（平均3.5 mm），排卵時卵泡直徑為6.0～8.0 mm[5]。犬卵泡后期生長表現(xiàn)出的特異性之一是對促性腺激素的接受能力，與其他哺乳動物相比，犬卵泡在顆粒層能非常早地獲得LH 受體，當犬卵泡直徑達到800m，亦即達到排卵卵泡直徑的25%時就能檢測到LH 的結(jié)合位點，而其他物種通常在達到排卵直徑的50%時才可檢測到[5]。犬卵泡后期生長的另一個特點是早期黃體化。

犬卵泡發(fā)育的特征是多卵卵泡（Multi-oocytic follicles，MOF）的高發(fā)生率，在小的生長卵泡中，5%～14%（甚至40%）包含2～17 個卵母細胞[5]。由于輸卵管中收集到的卵母細胞數(shù)量有時高于卵巢表面黃體的數(shù)量，研究者認為MOF 確實可以排卵。盡管如此，即使MOF能夠排出多個卵母細胞，仍需證實它們是否具有成熟和受精能力。在MOF 內(nèi)收集的各種卵丘-卵母細胞復合物（Cumulus-oocyte complexes，COCs）的形態(tài)和粘液化評分有很大差異，這表明每個多卵卵泡中都包含一個高質(zhì)量的單一卵母細胞[5,8]。

犬主要的生殖特性是排卵時釋放GV 期卵母細胞。另外，排卵后卵母細胞不能立即恢復減數(shù)分裂。大多數(shù)哺乳動物在排卵前幾小時，LH峰誘發(fā)卵丘粘液化和卵母細胞減數(shù)分裂（從GV 期到MII 期）。與其他哺乳動物相比，LH 峰的功能在犬上表現(xiàn)出更多的不同，LH 峰值持續(xù)24～72 h，LH 峰值和排卵之間的延遲大約在36～50 h[5]。

與其他哺乳動物一樣，犬科動物COCs 的粘液化發(fā)生在LH 峰后不久，即在卵泡直徑為4.0～4.5 mm 時可獲得粘液化能力。這種粘液化的一個特點是與卵母細胞緊密接觸的2～3 層顆粒細胞在排卵后2～3 d內(nèi)仍不會粘液化[5]。這表明，卵丘細胞在犬卵母細胞晚期減數(shù)分裂恢復中發(fā)揮重要作用。

1.2 排卵

確定排卵的確切時間是確保卵母細胞和胚胎生物學準確性的關(guān)鍵步驟。在犬中，使用陰道涂片法、血液LH檢測（或孕酮檢測）法、超聲波檢測法等均可以判斷犬是否排卵，但超聲波診斷是目前最為常用的檢測方法。

排卵時，卵母細胞連同2～3 mL 卵泡液排到輸卵管傘中。排卵后44 h，卵母細胞位于輸卵管的近中部，但仍處于GV 期。從排卵后48 h 開始，卵母細胞恢復減數(shù)分裂。此時，可觀察到MI 期卵母細胞，第一個完全成熟的MII 期卵母細胞大約在排卵后48～54 h 出現(xiàn)。此階段，卵母細胞具有受精能力，未成熟的卵母細胞在犬體內(nèi)也具備受精能力，但比例很低。在排卵后92～127 h 可觀察到一些退化的MII 期卵母細胞在排卵后7 d，一些卵母細胞被證明仍具有受精能力。排卵后的第9 d，受精能力喪失[5]。

有報道表明，在哺乳動物減數(shù)分裂的傳統(tǒng)模型中，顆粒細胞通過橫向突起在卵母細胞的細胞質(zhì)中維持高濃度cAMP 直至LH 峰，高濃度cAMP 致使DNA 發(fā)生去凝縮（即抑制減數(shù)分裂恢復）[8]。LH 峰后，突起縮回，卵母細胞內(nèi)的cAMP 濃度下降，使得減數(shù)分裂得以恢復[5-9]。LH 峰后卵丘細胞與卵母細胞膜的解偶聯(lián)觸發(fā)減數(shù)分裂的恢復。在犬COCs 中，放射冠中的細胞通過透明帶發(fā)出連接到達卵母細胞膜，卵母細胞膜甚至可以內(nèi)陷達到細胞核附近[10]。經(jīng)觀察，這些細胞在排卵后2～3 d 仍然牢固地附著于透明帶；在超微水平下，橫向突起排卵后2 d 開始退化，在排卵后3 d 完全消失。當卵母細胞在體外培養(yǎng)過程中自發(fā)脫落時，減數(shù)分裂恢復和中期比率增加。因此，犬與其他哺乳動物一樣，顆粒細胞在其恢復減數(shù)分裂的過程中發(fā)揮核心作用，但不是以cAMP 作為主要介質(zhì)，因為在體外中期率的增加不是因為培養(yǎng)液中加入了蛋白激酶A抑制劑RpAMPc 或cAMP 類似物-二丁?；?；在減數(shù)分裂恢復的過程中，犬血液中孕酮濃度顯著增高（10～20 ng/mL）[5]，推測孕酮可能在犬卵母細胞核成熟過程中發(fā)揮重要作用。而另一些研究表明，孕酮在犬卵母細胞減數(shù)分裂恢復過程中不發(fā)揮作用，因為在IVM 培養(yǎng)基中添加孕酮后沒有出現(xiàn)減數(shù)分裂完成率增加的現(xiàn)象。因此，應進一步研究孕酮對犬卵母細胞成熟的作用。減數(shù)分裂恢復的延遲可能是由于犬卵母細胞細胞質(zhì)中缺乏某些因子，要么是在輸卵管液中發(fā)現(xiàn)的因子，要么是卵母細胞自身合成的因子。與其他哺乳動物一樣，在排卵過程中，犬卵母細胞無轉(zhuǎn)錄活性。已證明，與轉(zhuǎn)錄激活相關(guān)的核仁結(jié)構(gòu)在排卵后27～33 h 之間發(fā)生了重構(gòu)。在減數(shù)分裂之前激活基因，對于更好地理解犬卵母細胞減數(shù)分裂的機制是非常重要的[5]。

2 體外成熟

胚胎移植（ET）、體外受精（IVF）以及輔助生殖（ART）等犬繁殖相關(guān)技術(shù)較其他哺乳動物而言發(fā)展緩慢[11]，主要是因為犬的生殖生理與其他動物相比具有特異性。王倫學等[12]研究發(fā)現(xiàn)，犬卵母細胞的體外成熟率較低，犬卵巢排出的卵母細胞處于GV期，減數(shù)分裂的恢復發(fā)生在輸卵管中。研究還發(fā)現(xiàn)，有0%～58%的犬卵母細胞可以恢復減數(shù)分裂，而平均約20%的卵母細胞能發(fā)育至MII 期。試驗或是生產(chǎn)過程中，胚胎移植和體外受精等都需要大量成熟卵母細胞。而犬卵母細胞的質(zhì)量對其體外成熟及核移植后的胚胎發(fā)育影響較大[13]。由于犬卵母細胞體外成熟機理的特異性，其體外成熟體系與其它家畜相比仍有待完善。目前，犬卵母細胞體外成熟的培養(yǎng)液多借鑒于其它動物，很少或是沒有考慮到犬的種屬特異性[12]。目前，已有較多的研究嘗試從多個方面對影響犬卵母細胞體外成熟的因素進行探討，以完善其體外培養(yǎng)系統(tǒng)，提高犬卵母細胞體外成熟效率。

2.1 影響因素

2.1.1 卵母細胞自身形態(tài)與體外成熟的關(guān)系 犬與其他哺乳動物一樣，卵母細胞的成熟與細胞直徑有關(guān)，因此選擇大小合適的犬卵母細胞做試驗材料，對其體外成熟的研究極為重要[14]。Hewitt 等[15]發(fā)現(xiàn)，直徑＞100m的卵母細胞成熟能力大于直徑＜100m的卵母細胞。T Otoi 等[16]的試驗發(fā)現(xiàn)，卵母細胞的減數(shù)分裂能力與其直徑大小成正比；直徑＜110m 的卵母細胞發(fā)育達不到MⅡ期，而卵母細胞直徑一旦達到120m 就能獲得減數(shù)分裂能力。這標志著犬卵母細胞的直徑可作為衡量IVM 效率的一個重要指標[12]。

Metcalfe S S 等[17]發(fā)現(xiàn)，犬卵巢中約20%～68%的卵母細胞會發(fā)生形態(tài)退化，嚴重影響犬卵母細胞的體外成熟。Farstad W 等[18]的研究表明，卵母細胞數(shù)量和質(zhì)量是制約犬卵母細胞體外成熟的重要因素之一。因此，犬卵母細胞體外成熟試驗應該選擇大量的較高質(zhì)量的卵母細胞。

2.1.2 供體對卵母細胞體外成熟的影響 有關(guān)供體犬卵母細胞的體外成熟能力與供體的年齡及其采集卵母細胞時犬所處的生殖生理階段之間的關(guān)系的研究結(jié)果報道不一致[19]。Hewvit 等[15]通過體外培養(yǎng)不同年齡的供體犬的卵母細胞并監(jiān)測它們的核成熟，結(jié)果表明，從特定大小的卵泡中采集的卵母細胞才有能力獲得體外成熟；通過比較1～6 歲組和7 歲及其以上年齡組的犬卵母細胞體外成熟能力時發(fā)現(xiàn)，6 歲以下供體犬卵母細胞在體外培養(yǎng)成熟的潛力更高，隨著年齡增大，卵巢組織會嚴重老化，卵母細胞獲取數(shù)量及質(zhì)量也會隨之降低，減數(shù)分裂能力減小[1,15]。Rodirgues等[20]發(fā)現(xiàn)，犬卵母細胞的體外成熟不受供體犬生殖階段的影響。更多的研究認為，生殖周期是影響犬卵母細胞體外成熟的關(guān)鍵因素之一，發(fā)情期供體犬的卵巢獲得的卵母細胞體外成熟能力更強，可能與卵泡內(nèi)含有高濃度的雌激素、孕酮及一些未知因子有關(guān)。Luvoni GC 等[21]發(fā)現(xiàn)，卵泡期犬卵母細胞恢復減數(shù)分裂和達到MI 期、MII 期的能力高于乏情期。Yamada 等[22]的研究發(fā)現(xiàn)，雖然生殖周期對犬卵母細胞體外成熟有一定的影響，但并不是關(guān)鍵因素之一。Evecen 等[23]采集了儲存在不同溫度（4℃和37℃）的乏情期、發(fā)情期和黃體期卵巢的卵母細胞，培養(yǎng)在相同的環(huán)境條件下。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，卵巢儲存在37℃的情況下，發(fā)情期和黃體期組卵巢的卵母細胞體外成熟率要高于乏情期組；卵巢儲存在4℃的情況下，乏情期組卵巢的卵母細胞體外成熟率要高于黃體期組；另外，乏情期組卵巢儲存在4℃的情況下其卵母細胞體外成熟率要高于其儲存在37℃的情況下，但是，發(fā)情期和黃體期組卵巢的卵母細胞在4℃和37℃的儲存情況下其體外成熟率無顯著差異。因此，該試驗的結(jié)果顯示，卵巢儲存溫度-發(fā)情周期的交互作用也影響了卵母細胞成熟率。

2.1.3 卵丘細胞與體外成熟的關(guān)系 卵母細胞成熟是當前動物生物技術(shù)的關(guān)鍵問題。為了提高犬卵母細胞體外成熟率，研究者通過驗證發(fā)現(xiàn)，卵母細胞的體積、胞質(zhì)顏色等對核體外成熟有一定的影響。Otoi 等[24]的研究發(fā)現(xiàn)，直徑＜100m 的卵丘卵母細胞成熟率僅為4% ～10%。Songsasen 等[25]發(fā)現(xiàn)，僅有一層顆粒細胞的犬卵母細胞培養(yǎng)至48 h 后發(fā)生退化。卵丘細胞與卵母細胞緊密連接形成COCs，卵丘細胞與卵母細胞間發(fā)生著復雜的信號傳遞，從而對卵母細胞的發(fā)育實現(xiàn)分子水平的調(diào)控[3]。卵丘細胞擴展在犬上表現(xiàn)出特殊性[12]。Rodrigues 等[26]研究發(fā)現(xiàn)，犬卵母細胞體外成熟時卵丘細胞很少發(fā)生擴展。多數(shù)研究者發(fā)現(xiàn)，犬卵丘細胞擴展與其卵母細胞的體外成熟不成正比關(guān)系[27]。N Songsasen 等[28]發(fā)現(xiàn)，GH能刺激犬卵母細胞中卵丘擴展，但對于提高犬卵母細胞體外成熟率影響不大。不同研究結(jié)果的出現(xiàn)可能與生長因子對犬科動物卵母細胞及卵丘細胞的影響不同有關(guān)[12]。

2.1.4 培養(yǎng)條件對體外成熟的影響 犬在GV 期排卵，經(jīng)過48～72 h 在輸卵管遠端成熟。由于與其他家養(yǎng)哺乳動物的這些差異，犬卵母細胞IVM的效率非常低。研究顯示，不同的培養(yǎng)基對犬卵母細胞成熟率的影響差異顯著。N Songsasen 等[28]的研究表明，犬卵母細胞在無蛋白培養(yǎng)基中能完成核體外成熟。Oh HJ等[29]研究不同發(fā)情期犬血清對從不同生殖狀態(tài)（卵泡，黃體或衰老期）卵巢中獲得的犬卵母細胞體外成熟的作用，研究表明，用10%犬發(fā)情血清補充培養(yǎng)基可改善犬卵母細胞的體外成熟。另外，犬卵母細胞對卵巢儲存溫度以及卵母細胞培養(yǎng)溫度非常敏感。潘和平等[30]在蘭州土狗卵丘-卵母細胞復合體的顆粒細胞擴展時研究發(fā)現(xiàn)，卵丘-卵母細胞復合體體外培養(yǎng)在37.0℃組要好于在36.5 ℃組。HSLEE 等[31]將犬卵巢分別儲存在4 ℃和38 ℃5 h 后采集不同儲存溫度的卵母細胞，并分別將其培養(yǎng)在38℃溫度條件下培養(yǎng)，觀察其在不同培養(yǎng)時間體外培養(yǎng)的卵母細胞的活性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，4 ℃組和38 ℃組的卵母細胞活力在0～4 h 之間差異不顯著（活力分別為79.6%和83.9%），但在24 h 和48 h后卵母細胞的活力有顯著差異（24 h 分別為13.2%和77.8%；48 h 分別為0%和72.9%）。

2.1.5 其他因子對體外成熟的影響 向培養(yǎng)體系中補充一些因子或是某些激素對卵母細胞體外成熟有一定的作用。人絨毛膜促性腺激素（Human chorionic gonadotroin，hCG）在犬卵母細胞減數(shù)分裂恢復過程中的作用顯著，Monica 等[32]在體外分段培養(yǎng)的前48 h（總培養(yǎng)時間為96 h）添加適量hCG，與對照組相比，卵母細胞的體外成熟率明顯增高。有研究表明，在培養(yǎng)體系中添加適宜濃度的雌激素或孕激素對提高犬卵母細胞的體外成熟率有顯著的影響[33]。N Songsasen 等[25]研究發(fā)現(xiàn)，減數(shù)分裂抑制劑Roscovitine 對犬卵母細胞減數(shù)分裂的抑制能力不顯著，同時發(fā)現(xiàn)，dbcAMP能夠顯著抑制犬卵母細胞減數(shù)分裂恢復能力。在IVM 培養(yǎng)基中補充-巰基乙醇（ -mercaptoethanol，-ME）和表皮生長因子（Epidermal growth factor，EGF）可以改善IVF 后卵母細胞的體外成熟和胚胎發(fā)育[12,34]。這兩種化合物的作用被認為是通過合成谷胱甘肽（GSH）來介導的，GSH 在保護細胞或胚胎免受氧化損傷方面發(fā)揮重要作用。KimMK等[34]在犬卵母細胞體外成熟研究試驗中向犬卵母細胞IVM 培養(yǎng)基中補充 -ME 或EGF，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，用25mol/L 或100mol/L 的 -ME 培養(yǎng)的卵母細胞發(fā)育至MI 期能力顯著增加，與其他實驗組相比，添加50mol/L 或100mol/L -ME 培養(yǎng)的卵母細胞發(fā)育至MII 期能力顯著增加。另外，20 ng/mL EGF 能顯著促進卵泡期犬卵母細胞發(fā)育至MII 期的能力[34]。

2.2 培養(yǎng)體系

由于犬科動物生殖生理的特異性，目前已報道的犬、銀狐等犬科動物卵母細胞的體外培養(yǎng)方法多采用細胞共培養(yǎng)、卵泡培養(yǎng)、液滴培養(yǎng)以及在游離輸卵管中培養(yǎng)。

2.2.1 細胞共培養(yǎng) 細胞共培養(yǎng)包括胚胎成纖維細胞共培養(yǎng)、顆粒細胞共培養(yǎng)和輸卵管上皮細胞共培養(yǎng)[1]。Hatoya S 等[35]利用MEF 和CEF 對犬卵母細胞的IVM、IVF和IVC的影響研究發(fā)現(xiàn)，胚胎成纖維細胞的共培養(yǎng)能增強犬卵母細胞細胞核和細胞質(zhì)成熟。有研究發(fā)現(xiàn)，顆粒細胞對犬卵母細胞的體外成熟有一定促進作用[12]。Digbo Bolamba 等[36]使用人工合成輸卵管液（SOF）培養(yǎng)基對來自腔前卵泡的卵母細胞體外成熟能力進行評估，其研究結(jié)果表明，在培養(yǎng)基中補充4%牛血清蛋白（BSA）能顯著促進犬卵母細胞核成熟。一些研究者將輸卵管上皮細胞與犬卵母細胞共培養(yǎng)時發(fā)現(xiàn)，卵母細胞成熟率明顯增高，但其對IVF 后的胚胎發(fā)育無明顯作用[1]。另外，研究指出，采集試驗所需的輸卵管上皮細胞的供體母犬生殖周期及采集部位對試驗結(jié)果有一定的影響[1]。

2.2.2 卵泡培養(yǎng) Bolamba D 等[37]指出，大部分家養(yǎng)犬的晚期腔前卵泡（APAN）和早期有腔卵泡（EAN）含有具有體外發(fā)育成熟能力的卵母細胞，且這些卵母細胞已經(jīng)獲得了排卵前卵母細胞致密的胞質(zhì)脂質(zhì)特征。將APAN 和EAN 卵泡通過膠原酶和DNA 酶處理從卵巢分離后置于培養(yǎng)基中分別培養(yǎng)0h、24 h、48 h、72 h。結(jié)果顯示，培養(yǎng)24 h 后，來自APAN 濾泡的卵母細胞能顯著地達到MI 至MII 期（5.3%），與在0 h 觀察到的對照濾泡的百分比（0.9%）差異顯著[37]。繼續(xù)培養(yǎng)至48 h 達到MI 至MII 期的卵母細胞百分比進一步增加（11.5%），培養(yǎng)至72 h 時發(fā)育率保持不變；培養(yǎng)24 h后，EAN 濾泡中達到MI 至MII 期的卵母細胞的百分比與對照組比沒有顯著增加，培養(yǎng)48 h 后發(fā)育率增加（8.7%），培養(yǎng)72 h 后發(fā)育率保持不變[37]。研究證明，早期卵泡內(nèi)的犬卵母細胞能夠恢復減數(shù)分裂到中期階段。

2.2.3 液滴培養(yǎng) 液滴培養(yǎng)是卵母細胞體外成熟試驗中最常用的培養(yǎng)體系，即在適宜的溫度和濕度下，將分離得到的COCs 放在用礦物油覆蓋的培養(yǎng)液滴中培養(yǎng)，其關(guān)鍵影響因素在于培養(yǎng)COCs 的密度[1]。Otoi T等[38]對卵母細胞與培養(yǎng)基的適宜比例進行了研究，將不同數(shù)量的COCs 在100L 成熟培養(yǎng)基中培養(yǎng)72 h，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，來自乏情期卵巢的卵母細胞的減數(shù)分裂能力受培養(yǎng)的COCs 的密度影響較大，而來自發(fā)情期卵巢的卵母細胞的減數(shù)分裂能力受培養(yǎng)的COCs的密度影響較小。

2.2.4 在游離輸卵管中培養(yǎng) Luvoni GC等[39]將采集的犬卵母細胞在輸卵管峽部-壺腹部中置于培養(yǎng)液中培養(yǎng)，試驗結(jié)果表明，培養(yǎng)30 h，結(jié)扎輸卵管組的卵母細胞恢復減數(shù)分裂的比例（63.8%）高于下降組（20.4%）或開放輸卵管組（27.1%）（P<0.001）。培養(yǎng)24 h 和30 h，減數(shù)分裂恢復比例高于48 h（分別為69.2%和59.1%比35.8%，P<0.005）。卵母細胞減數(shù)分裂的恢復主要由減數(shù)分裂前的卵母細胞決定，而結(jié)扎輸卵管后MI和MII 期占12.5%～31.9%。與24 h 和30 h 的培養(yǎng)（分別為18.7 和27.3%）相比，培養(yǎng)時間延長至48 h后，顯著增加了卵母細胞的退化（59.3%），且輸卵管上皮表現(xiàn)出培養(yǎng)后的核損傷和變性。研究表明，將犬卵母細胞置于游離輸卵管中培養(yǎng)，減數(shù)分裂在培養(yǎng)的30 h內(nèi)即恢復，對犬卵母細胞的成熟影響顯著。此外，與較傳統(tǒng)液滴培養(yǎng)或開放輸卵管培養(yǎng)相比，在游離輸卵管培養(yǎng)30 h 的卵母細胞存活率更高，但結(jié)扎的輸卵管不能保證培養(yǎng)至48 h 的卵母細胞存活率。

3 展望

由于犬生殖生理的獨特性，犬繁殖相關(guān)技術(shù)較其他動物發(fā)展緩慢，尤其國內(nèi)對犬卵母細胞體外成熟的相關(guān)研究較少，犬卵母細胞體外成熟也成為限制犬IVF、ET 等繁殖技術(shù)發(fā)展的重要原因之一[5]。因此，應通過研究犬卵母細胞體外成熟的相關(guān)機理及技術(shù)來提高犬卵母細胞體外成熟率，為犬科動物輔助生殖的相關(guān)研究奠定基礎(chǔ)。在其他哺乳動物卵母細胞體外成熟研究的基礎(chǔ)上開拓新思路，采用先進技術(shù)來優(yōu)化犬卵母細胞體外成熟體系[12]。據(jù)2005年已發(fā)布的犬全基因組序列數(shù)據(jù)，犬基因組與人的相似性達95.7 %[40]，且有研究表明，犬的多種遺傳疾病與人相似。因此，深入研究犬科動物繁殖生物學的分子機制和人工調(diào)控方法，可以為創(chuàng)制人類疾病的犬科動物模型提供理論基礎(chǔ)和技術(shù)支持，對進一步提高人類醫(yī)療保健水平以及拯救瀕危犬科動物都具有重要意義[1]。