趙愉風(fēng) 周清元 郜歡歡 葉 桑 王 倩 程 闖 郭彥軍 崔 翠

(西南大學(xué)農(nóng)學(xué)與生物科技學(xué)院，重慶 400715)

豌豆(Pisum sativum)為豆科(Leguminosae)豌豆屬(Pisum)一年生藤本作物，是世界上第四大食用豆類作物[1]。我國(guó)干豌豆栽培面積和總產(chǎn)量分別占全世界的 15.2%和 13.8%，青豌豆分別占全世界的23.1%和30.4%，在世界豌豆生產(chǎn)中占有十分重要的地位[2]。史料記載豌豆起源于西亞和地中海沿岸，我國(guó)豌豆的栽培歷史可追溯到2000多年前[3]。豌豆各部位包括豌豆苗、豌豆尖、豌豆莢、青豌豆、干豌豆，從發(fā)芽到生長(zhǎng)，從開(kāi)花到成熟，均可食用，且豌豆?fàn)I養(yǎng)價(jià)值豐富、用途廣泛、適應(yīng)性強(qiáng)，可用作主要旱區(qū)輪作倒茬作物；此外，豌豆種植過(guò)程中能進(jìn)行生物固氮，提高土壤肥力，也是良好的綠肥作物[4]。然而豌豆生長(zhǎng)過(guò)程中易受到干旱脅迫的影響，表現(xiàn)為植株高度降低，鮮重、干重、葉面積、葉片數(shù)下降，根系生長(zhǎng)受到抑制等[4-5]。我國(guó)52.5%的豌豆生產(chǎn)區(qū)為山區(qū)或干旱、半干旱地區(qū)[6]，水資源短缺嚴(yán)重影響了豌豆的產(chǎn)量和品質(zhì)[7]。因此篩選適宜的抗(耐)旱豌豆種質(zhì)資源對(duì)豌豆栽培生產(chǎn)具有重要意義。

種子萌發(fā)是作物生活史的重要部分，該階段與幼苗成活率、營(yíng)養(yǎng)器官生長(zhǎng)及籽實(shí)產(chǎn)量密切相關(guān)[8]。種子萌發(fā)始于靜止的干燥種子吸收水分，待胚根突破種皮，種子即萌發(fā)完成[9]。種子發(fā)芽受到水分、溫度、光照等環(huán)境因素影響[10]，若豌豆種子萌發(fā)過(guò)程中出現(xiàn)水資源短缺會(huì)導(dǎo)致萌發(fā)時(shí)間延長(zhǎng)，出苗率降低，使幼苗瘦弱，生長(zhǎng)后期嚴(yán)重缺水甚至?xí)?dǎo)致幼苗體內(nèi)物質(zhì)代謝紊亂，生長(zhǎng)緩慢甚至死亡，嚴(yán)重影響豌豆苗、豌豆尖、豌豆莢及青豌豆的產(chǎn)量和品質(zhì)[10]。前人研究主要集中在干旱脅迫對(duì)豌豆的農(nóng)藝性狀指標(biāo)和生理生態(tài)響應(yīng)方面[9-13]，對(duì)豌豆種子萌發(fā)期耐干旱種質(zhì)資源的篩選報(bào)道并不常見(jiàn)。

本試驗(yàn)對(duì)不同主產(chǎn)區(qū)收集到的菜用豌豆品種資源進(jìn)行種子萌發(fā)期的耐旱性研究，利用PEG-6000模擬干旱環(huán)境，調(diào)查種子在萌發(fā)期部分性狀并根據(jù)綜合抗旱系數(shù)值(CDC值)、耐旱性度量值(D值)、加權(quán)關(guān)聯(lián)度(WDC值)大小對(duì)供試種質(zhì)進(jìn)行排序，通過(guò)相關(guān)性分析、主成分分析、聚類分析、灰色關(guān)聯(lián)度分析和逐步回歸分析等方法相結(jié)合對(duì)其耐旱能力進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，研究豌豆種質(zhì)在萌發(fā)過(guò)程中的室內(nèi)耐旱性鑒定方法和主要參考指標(biāo)，以期篩選出耐旱性強(qiáng)的品種(系)，為耐旱性品種(系)選育和生產(chǎn)中品種優(yōu)化布局提供一定的理論參考。

1 材料與方法

1.1 材料

選擇不同豌豆生產(chǎn)區(qū)域主要種植的31份豌豆品種(系)為試驗(yàn)材料(表1)，由西南大學(xué)農(nóng)學(xué)與生物科技學(xué)院提供，于2017年3-5月進(jìn)行發(fā)芽試驗(yàn)。

表1 參試品種(系)Table1 Tested varieties(line)

1.2 適宜PEG濃度的篩選及試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選取遺傳背景不同的3份豌豆種子材料16158、16141、16106，分別用 0(CK)、1.0%、2.5%、5.0%、7.5%、10.0%6個(gè)不同梯度濃度(w/w)的PEG-6000溶液進(jìn)行處理。每品種選取360粒大小一致的種子，分別用75%乙醇溶液消毒1～2 min，清水沖洗干凈后，將種子置于培養(yǎng)皿中(每皿20粒)，并加入適量清水置于25℃RXZ智能型人工氣候箱(寧波江南儀器廠)進(jìn)行24 h吸脹作用，取出后將種子重新擺放在鋪有雙層濾紙并分別加入20 mL不同濃度PEG-6000溶液的培養(yǎng)皿中進(jìn)行干旱脅迫處理，每處理設(shè)3次重復(fù)，對(duì)照組則加蒸餾水代替PEG溶液。培養(yǎng)皿放在光照培養(yǎng)箱中進(jìn)行發(fā)芽試驗(yàn)，溫度為25℃，光周期為光照16 h/黑暗8 h，3 d后統(tǒng)計(jì)發(fā)芽勢(shì)，7 d后統(tǒng)計(jì)發(fā)芽率，根據(jù)種子萌發(fā)比例及萌發(fā)后生長(zhǎng)情況篩選適宜的干旱脅迫處理濃度。

1.3 模擬干旱脅迫處理及其性狀調(diào)查分析

選用31份豌豆種質(zhì)(表1)，按照濃度篩選時(shí)的方法和培養(yǎng)條件，以1.2中篩選得到的PEG-6000濃度作為脅迫濃度，每處理設(shè)3次重復(fù)。處理60 h后計(jì)算種子吸水率(seed water absorption ratio，WAR)；每天調(diào)查種子發(fā)芽數(shù)、3 d后統(tǒng)計(jì)發(fā)芽勢(shì)，7 d后統(tǒng)計(jì)發(fā)芽率，并每皿選取10顆籽粒測(cè)量其鮮重(fresh weight)、干重(dry weight)、根長(zhǎng)(root length，RL)、芽長(zhǎng)(buds length，BL)等性狀，計(jì)算發(fā)芽勢(shì)(germination energy，GE)、發(fā)芽率(germination rate，GR)、發(fā)芽指數(shù)(germination index，GI)、根冠比(root/shoot ratio，RSR)、活力指數(shù)(vitality index，Ⅵ)及物質(zhì)貯藏轉(zhuǎn)運(yùn)率(storage material transfer rate，STR)等指標(biāo)。計(jì)算方法如下:

式中，Gt為第t天的發(fā)芽數(shù)，Dt為相應(yīng)時(shí)間的發(fā)芽天數(shù)。

1.4 評(píng)價(jià)方法及數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

參考閆峰等[14]、羅俊杰等[15-16]、王蘭芬等[17]、汪燦等[18-20]的方法，以豌豆各品種10個(gè)指標(biāo)的測(cè)量值作為基礎(chǔ)數(shù)據(jù)，對(duì)各性狀測(cè)量值求平均后進(jìn)行差異顯著性分析，按照公式(7)、(8)分別計(jì)算單項(xiàng)耐旱系數(shù)(drought tolerance coefficient，DC)和綜合抗旱系數(shù)(comprehensive drought tolerance coefficient，CDC):

式中，Xij、CKij分別代表第i個(gè)指標(biāo)第j個(gè)品種的干旱脅迫處理和CK測(cè)定值。

按公式(9)、(10)分別計(jì)算因子權(quán)重系數(shù)(ωi)和各指標(biāo)的隸屬函數(shù)值[u(Xij)]:

式中，Pi代表第i個(gè)指標(biāo)的綜合貢獻(xiàn)率；Xijmin、Xijmax分別代表第i個(gè)指標(biāo)下第j個(gè)品種的DC值的最小值和最大值。

按公式(11)計(jì)算耐旱性度量值(drought tolerance evaluation value，D):

式中，U(Xi)為各主成分得分值；k為主成分分析中綜合因子個(gè)數(shù)。

按公式(12)、(13)計(jì)算關(guān)聯(lián)系數(shù)(ξi)和等權(quán)關(guān)聯(lián)度(γi):

式中，Δij代表品種最優(yōu)性狀與第i個(gè)指標(biāo)第j個(gè)品種(系)的的絕對(duì)差值；minΔij和maxΔij分別代表最小二級(jí)絕對(duì)差值和最大二級(jí)絕對(duì)差值；p為分辨系數(shù)(p=0.5)。

按公式(14)、(15)分別計(jì)算各指標(biāo)權(quán)重系數(shù)[ωi(γ)]和加權(quán)關(guān)聯(lián)度(weight drought tolerance coefficient，WDC):

以DC值為比較序列，分別以D值和WDC值為參考序列進(jìn)行灰色關(guān)聯(lián)度分析，獲得各指標(biāo)DC值與D值之間的關(guān)聯(lián)度(γD)及DC值與WDC值之間的關(guān)聯(lián)度(γWDC)。

根據(jù)供試豌豆各品種(系)的D值，以加權(quán)配對(duì)算術(shù)平均法和歐氏距離進(jìn)行聚類分析，并劃分出各品種的耐旱等級(jí)，分別對(duì)D值、CDC值和WDC值逐步回歸分析各指標(biāo)DC值，獲得回歸方程。采用 Microsoft Excel 2010、IBM SPSS 19.0和SPSS 24.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行整理和分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 PEG-6000適宜濃度的篩選

由表2可知，3份豌豆品種(系)在不同PEG-6000濃度處理?xiàng)l件下，根長(zhǎng)均受到不同程度的抑制。在0(CK)、1.0%、2.5%、5.0%、7.5%和 10.0%濃度下，3份豌豆品種(系)根長(zhǎng)均值分別為4.38、3.63、2.92、2.52、2.00、1.74 cm，各處理組根長(zhǎng)較 CK 分別下降 了 17.12%、33.33%、42.47%、54.33% 和60.27%。根長(zhǎng)在2.5%PEG-6000處理下，與CK差異顯著，在1.0%～2.5%PEG間豌豆根長(zhǎng)下降幅度最大。同時(shí)隨著PEG-6000濃度的增加，在5.0%時(shí)，16106根長(zhǎng)受到嚴(yán)重抑制。綜上，將2.5%PEG-6000作為菜用豌豆耐旱品種資源篩選的濃度。

表2 不同濃度的PEG-6000脅迫處理對(duì)豌豆萌發(fā)期根長(zhǎng)的影響Table2 Effects of different concentrations of PEG-6000 stress on root length during pea germination stage /cm

2.2 豌豆萌發(fā)期指標(biāo)分析

由表3可知，CK和PEG-6000處理31個(gè)品種間差異均達(dá)到極顯著水平；各性狀變異系數(shù)分別介于19.30%～95.27%和20.34%～99.63%，其中芽長(zhǎng)變異系數(shù)最大(95.27%和99.63%)，總鮮重變異系數(shù)最小(19.30%和20.34%)，按變異系數(shù)從大到小排序，CK豌豆各性狀依次為芽長(zhǎng)＞活力指數(shù)＞物質(zhì)儲(chǔ)藏轉(zhuǎn)運(yùn)率＞根冠比＞根長(zhǎng)＞發(fā)芽勢(shì)＞發(fā)芽指數(shù)＞發(fā)芽率＞種子吸水率＞總鮮重，PEG處理各性狀依次為芽長(zhǎng)＞根冠比＞活力指數(shù)＞物質(zhì)儲(chǔ)藏轉(zhuǎn)運(yùn)率＞根長(zhǎng)＞發(fā)芽勢(shì)＞發(fā)芽指數(shù)＞發(fā)芽率＞種子吸水率＞總鮮重。綜上表明，31份豌豆材料在種子萌發(fā)過(guò)程中各相關(guān)性狀均存在者廣泛的遺傳基礎(chǔ)，在其中進(jìn)行耐旱性篩選是有效的。

表3 豌豆種子萌發(fā)相關(guān)指標(biāo)分析Table3 Analysis on indexes related to pea seed germination

2.3 單項(xiàng)指標(biāo)分析

分別對(duì)各性狀的耐旱系數(shù)(DC)進(jìn)行分析(表4)，結(jié)果顯示，各性狀指標(biāo)的DC值變異系數(shù)介于5.62%～78.60%之間，其中芽長(zhǎng)的變異系數(shù)最大，達(dá)到78.60%，種子吸水率和總鮮重變異系數(shù)較小，分別為5.62%和7.60%，說(shuō)明PEG-6000脅迫處理后芽長(zhǎng)受到的影響較大，而種子吸水率和貯藏物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)率變化較??；從各性狀DC值變異系數(shù)來(lái)看，芽長(zhǎng)(78.60%)、根冠比(76.16%)、活力指數(shù)(61.15%)、貯藏物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)率(52.33%)和根長(zhǎng)(40.02%)在品種間變異幅度較大，可以作為種子萌發(fā)期耐旱資源篩選指標(biāo)。從芽長(zhǎng)DC值來(lái)看，大于平均值的品種(系)有15個(gè)，其中16104、16078、16107、16110、16139 和 16040 6 個(gè)品種(系)的DC值均大于1，說(shuō)明模擬干旱脅迫條件下，這些種質(zhì)芽長(zhǎng)并沒(méi)有受到影響，反而具有一定的促進(jìn)作用；31份豌豆根冠比 DC值平均值為 1.55，其中16147、16023、16140、16055、16105 的 DC 值較大，均大于3.0；活力指數(shù)DC值總體均值為0.77，大于均值的豌豆種質(zhì)有14份，按照其大小排名前5的分別為16110、16107、16079、16040 和 16078；按貯藏物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)率DC值大小排序，排名靠前的品種主要為16110、16107、16141和16040；按根長(zhǎng)DC 值進(jìn)行排序，16110、16141、16107、16146、16040 和 16170 排名靠前。 從各單項(xiàng)指標(biāo)來(lái)看，不同材料在不同的單項(xiàng)指標(biāo)中表現(xiàn)不同，通過(guò)單項(xiàng)指標(biāo)對(duì)31份種質(zhì)進(jìn)行耐旱性篩選結(jié)果也不相同，因此僅通過(guò)單項(xiàng)指標(biāo)對(duì)豌豆種質(zhì)萌發(fā)期耐旱性篩選存在著局限性。

表4 豌豆種質(zhì)各指標(biāo)的耐旱系數(shù)(DC)Table4 Drought-tolerance coefficients of parameter during seeds germination for pea germplasms

由表5可知，豌豆各指標(biāo)(除根冠比)都與其他至少一個(gè)指標(biāo)呈顯著或極顯著相關(guān)，表明各指標(biāo)之間具有一定程度的相關(guān)性。其中發(fā)芽勢(shì)與發(fā)芽率、發(fā)芽指數(shù)、活力指數(shù)、根長(zhǎng)、芽長(zhǎng)、物質(zhì)貯藏轉(zhuǎn)運(yùn)率呈極顯著正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)介于0.554～0.921之間，相關(guān)程度較高；物質(zhì)貯藏轉(zhuǎn)運(yùn)率與總鮮重呈顯著相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為0.387；總鮮重與活力指數(shù)、種子吸水率呈極顯著正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為0.570、0.579；種子吸水率與活力指數(shù)呈顯著正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)是0.385，說(shuō)明種子活力越強(qiáng)，其吸水保水能力越好，可進(jìn)一步使鮮重增加。根冠比是由根長(zhǎng)和芽長(zhǎng)2個(gè)單一性狀組成的復(fù)合性狀，結(jié)果顯示根冠比與2個(gè)單一性狀之間并沒(méi)有顯著相關(guān)性，說(shuō)明不同材料在受到脅迫時(shí)沒(méi)有表現(xiàn)出相同的變化趨勢(shì)。以上結(jié)果表明，干旱脅迫影響根的生長(zhǎng)發(fā)育，從而影響豌豆種子發(fā)芽(發(fā)芽勢(shì)、發(fā)芽率、發(fā)芽指數(shù))、活力指數(shù)、地上部生長(zhǎng)(芽長(zhǎng))和物質(zhì)貯藏轉(zhuǎn)運(yùn)。

表5 豌豆種質(zhì)各指標(biāo)耐旱系數(shù)(DC)的相關(guān)性Table5 Correlations of drought-tolerance coefficients between parameters during germination of pea germplasms

參照連續(xù)變數(shù)的次數(shù)分布統(tǒng)計(jì)方法[21]，以組距為0.2將各性狀耐旱系數(shù)作次數(shù)分布表(表6)。結(jié)果表明同一區(qū)間內(nèi)的各指標(biāo)DC值分布次數(shù)和頻率相差較大。0.6＜DC≤1.2范圍內(nèi)，各指標(biāo)分布較集中，發(fā)芽指數(shù)、活力指數(shù)、發(fā)芽勢(shì)、發(fā)芽率、根長(zhǎng)、貯藏物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)率、總鮮重、根冠比、種子吸水率和芽長(zhǎng)的分布頻率分別為 74%、61%、74%、74%、68%、54%、100%、35%、100%、39%；1.2＜DC≤2.0時(shí)，發(fā)芽指數(shù)、活力指數(shù)、發(fā)芽勢(shì)、發(fā)芽率、根長(zhǎng)、貯藏物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)率、根冠比、芽長(zhǎng)的分布頻率分別為 9%、3%、9%、9%、12%、6%、24%、9%，說(shuō)明這些指標(biāo)對(duì)干旱脅迫的反應(yīng)靈敏；DC＞2.0時(shí)根冠比的分布頻率為26%，表明干旱脅迫對(duì)多數(shù)品種的根冠比影響較大。各指標(biāo)對(duì)干旱脅迫反應(yīng)的敏感性從小到大依次為芽長(zhǎng)、貯藏物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)率、活力指數(shù)、種子吸水率、根長(zhǎng)、發(fā)芽率、發(fā)芽勢(shì)和發(fā)芽指數(shù)、根冠比、總鮮重。不同性狀對(duì)干旱脅迫的響應(yīng)程度存在差異，同一品種(系)不同指標(biāo)間耐旱系數(shù)也不完全一致。次數(shù)分布和單一指標(biāo)(DC值分析)均表明，豌豆耐旱性種質(zhì)資源篩選鑒定需要通過(guò)多個(gè)指標(biāo)進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，才有可能避免片面性。

2.4 萌發(fā)期主成分分析

參照唐啟義[22]數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)進(jìn)行主效因子分析，其中，因子個(gè)數(shù)的選取遵循兩條原則:一是累積貢獻(xiàn)率要占總貢獻(xiàn)率的80%以上；二是特征值要大于等于1。由表7可知，各因子特征值中前3個(gè)因子的貢獻(xiàn)率分別為52.423%、15.717%和13.344%，累計(jì)貢獻(xiàn)率達(dá)81.483%，其特征根 λ＞1.334。其中，主成分1(F1)在發(fā)芽勢(shì)、發(fā)芽率、發(fā)芽指數(shù)、活力指數(shù)和物質(zhì)貯藏轉(zhuǎn)運(yùn)率有較高載荷量，載荷量分別為0.888、0.896、0.913、0.948、0.888，這5個(gè)指標(biāo)反映了豌豆種子萌發(fā)期的萌發(fā)狀況。主成分2(F2)在根冠比和種子吸水率上載荷量較大，分別為0.656、0.641，這2個(gè)指標(biāo)反映了豌豆的生長(zhǎng)積累狀況。主成分3(F3)在總鮮重上載荷量最大，為0.783，其反映了豌豆的生長(zhǎng)狀況。

2.5 菜用豌豆種質(zhì)資源耐旱性綜合評(píng)價(jià)

由表8可知，供試種質(zhì)綜合耐旱系數(shù)(CDC值)介于0.307～1.449之間，平均值為 0.909，標(biāo)準(zhǔn)差為0.248，變異系數(shù)為27.308%。根據(jù)CDC值大小對(duì)供試種質(zhì)進(jìn)行耐旱性排序，耐旱性最強(qiáng)的4個(gè)品種依次為16110、16055、16140、16107；耐旱性最弱的3 個(gè)品種依次為16106、16175、16177，其余種質(zhì)介于兩者之間。耐旱性度量值(D值)介于2.359～11.147之間，平均值為6.603，標(biāo)準(zhǔn)差為1.779，變異系數(shù)為29.346%。根據(jù)D值大小對(duì)供試種質(zhì)進(jìn)行耐旱性排序，耐旱性最強(qiáng)的4 個(gè)品種依次為16110、16107、16055、16140，耐旱性最弱的3個(gè)品種依次為16106、16175、16177。WDC值大小為 0.307～1.441，平均值為 0.915，標(biāo)準(zhǔn)差為0.250，變異系數(shù)27.342%?；诩訖?quán)關(guān)聯(lián)度(WDC值)大小進(jìn)行耐旱性排序，結(jié)果顯示，耐旱性最強(qiáng)的4個(gè)品種依次為16110、16055、16140和16107；耐旱性最弱的3個(gè)品種依次為16106、16175和16177。D值、CDC值、WDC值對(duì)供試品種耐旱性評(píng)價(jià)結(jié)果基本吻

合，將3種排序順序相加，進(jìn)行綜合排序，耐旱性最強(qiáng)的4 個(gè)品種依次為16110、16055、16107、16140，耐旱性最弱的3個(gè)品種依次為16106、16175和16177。

表6 供試豌豆種質(zhì)各指標(biāo)耐旱系數(shù)的頻次分布Table6 Different distributions of drought-tolerance coefficients of all indices in tested pea germplasms

表7 供試豌豆種質(zhì)各指標(biāo)主成分的特征向量及貢獻(xiàn)率Table7 Eigenvectors and contribution rates of principal components of all indices in tested pea germplasms

表8 供試豌豆品種(系)耐旱性評(píng)價(jià)的DC值、WDC值、D值的綜合排序Table8 Comprehensive ranking of DC value，WDC value and D value of drought tolerance evaluation in tested pea germplasms

2.6 灰色關(guān)聯(lián)度分析

由表9可知，在干旱脅迫下，等權(quán)關(guān)聯(lián)度(γD)反映各指標(biāo)DC值與D值的密切程度，其值介于0.502 2～0.551 6之間，從大到小依次為根冠比、種子吸水率、總鮮重、發(fā)芽率、發(fā)芽指數(shù)、發(fā)芽勢(shì)、根長(zhǎng)、活力指數(shù)、物質(zhì)貯藏轉(zhuǎn)運(yùn)率和芽長(zhǎng)?；疑訖?quán)關(guān)聯(lián)度(γWDC)反映各指標(biāo)DC值與WDC值的密切程度，其值介于0.7324～0.937 5之間，從大到小依次為發(fā)芽指數(shù)、發(fā)芽率、發(fā)芽勢(shì)、總鮮重、種子吸水率、根長(zhǎng)、活力指數(shù)、貯藏物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)率、芽長(zhǎng)和根冠比。

表9 供試豌豆種質(zhì)各指標(biāo)DC值與D值和WDC值的關(guān)聯(lián)度及各指標(biāo)權(quán)重Table9 Correlation degree between DC value of all indices and D value together with WDC value and indices weight in tested pea germplasms

2.7 聚類分析及耐旱級(jí)別的劃分

以加權(quán)配對(duì)算術(shù)平均法進(jìn)行聚類分析，在歐氏距離D2=8.5處，可以將31份供試豌豆品種(系)分為4類群(圖1)。第Ⅰ類群包含16054、16142等 20份材料，占總數(shù)64.52%；第Ⅱ類群為包含16140、16079和16055共3份材料，占總數(shù)的9.68%；第Ⅲ類群包含16175、16177、16106、16096、16051 和 16104 共 6 份材料，占總數(shù)的19.35%；第Ⅳ類包含16110和16107共2份材料。統(tǒng)計(jì)4個(gè)類群各耐性評(píng)價(jià)單項(xiàng)指標(biāo)、D值、CDC值和WDC值(表10)，結(jié)果表明，第Ⅰ類材料除芽長(zhǎng)外其他各指標(biāo)數(shù)據(jù)在4個(gè)類群中最低，說(shuō)明第Ⅰ類群萌發(fā)期對(duì)干旱脅迫極敏感；第Ⅱ類群的D值、CDC值、WDC值高于第Ⅲ類群和第Ⅰ類群，可以歸類為較耐旱材料；第Ⅳ類群2份材料除根冠比外其余9個(gè)單項(xiàng)指標(biāo)和3個(gè)綜合指標(biāo)均最大，因此可以將該類群歸類為耐旱性強(qiáng)材料。綜上，4個(gè)類群耐旱性從強(qiáng)到弱依次為第Ⅳ類群＞第Ⅱ類群＞第Ⅲ類群＞第Ⅰ類群。

2.8 逐步回歸分析

圖1 基于D值的供試豌豆種質(zhì)資源(抗)耐旱性聚類圖Fig.1 Cluster map of drought tolerance of pea germplasm based on D value

表11 供試豌豆種質(zhì)抗旱性模型預(yù)測(cè)Table11 Prediction of drought resistance model for tested pea germplasms

表10 供試豌豆種質(zhì)抗性評(píng)價(jià)指標(biāo)的分級(jí)Table10 Grading evaluation of index about drought resistance of pea germplasm

分別以D值、CDC值和WDC值為參考序列，對(duì)供試豌豆品種(系)各指標(biāo)DC值進(jìn)行逐步回歸分析，得出3個(gè)逐步回歸方程(表11)，通過(guò)F檢驗(yàn)3個(gè)方程都達(dá)到極顯著水平，說(shuō)明3個(gè)方程擬合度好，預(yù)測(cè)精度較高，可用這3個(gè)方程進(jìn)行菜用豌豆品種萌發(fā)期抗(耐)旱性評(píng)價(jià)。此外，由逐步回歸方程可知，在豌豆種質(zhì)資源萌發(fā)期抗(耐)旱性鑒定中，選擇性地將與D值密切相關(guān)的指標(biāo)，如發(fā)芽指數(shù)、活力指數(shù)、發(fā)芽勢(shì)、根長(zhǎng)進(jìn)行測(cè)定，可有效鑒定豌豆種質(zhì)資源的耐旱性，從而使鑒定工作簡(jiǎn)化，提高工作效率。

3 討論

農(nóng)作物抗逆性鑒定按照生育時(shí)期可分為萌發(fā)期鑒定、苗期鑒定和成株期鑒定[23]。萌發(fā)期是作物群體數(shù)量建成的關(guān)鍵時(shí)期，具有便于操作、周期短、效率高、易受環(huán)境影響等特點(diǎn)[24]。豌豆在種子播種后，干旱脅迫會(huì)導(dǎo)致其出苗率降低、出苗時(shí)間延長(zhǎng)、生長(zhǎng)發(fā)育受阻[25]。

目前，諸多研究者針對(duì)作物萌發(fā)期進(jìn)行了抗(耐)旱性鑒定的研究，不同研究所采用的篩選鑒定指標(biāo)都有所不同，最終篩選出來(lái)的耐旱性指標(biāo)也存在差異。如陳學(xué)珍等[26]對(duì)20個(gè)大豆品種芽期耐旱性研究發(fā)現(xiàn)，在發(fā)芽勢(shì)和發(fā)芽率均高的情況下，二者可作為耐旱性鑒定的指標(biāo)。劉學(xué)義等[27]在大豆成苗期根毛與耐旱性的關(guān)系研究中發(fā)現(xiàn)胚根的長(zhǎng)短與耐旱性密切相關(guān)，耐旱品種的胚根比其他類型的品種長(zhǎng)。王利彬等[28]在大豆種質(zhì)資源芽期耐旱性鑒定中發(fā)現(xiàn)干旱脅迫下胚根和下胚軸的生長(zhǎng)狀況可作為評(píng)價(jià)大豆芽期耐旱性的生理指標(biāo)。陳新等[29]研究表明，植物抗(耐)旱性與萌發(fā)期種子活力指數(shù)具有一定的相關(guān)性，萌發(fā)期種子活力指數(shù)可以作為抗(耐)旱性鑒定的重要指標(biāo)。Bewley[30]研究認(rèn)為貯藏物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)率在一定程度上可能決定了幼苗生長(zhǎng)狀況。本試驗(yàn)最終篩選出發(fā)芽勢(shì)、發(fā)芽率、活力指數(shù)、活力指數(shù)、根長(zhǎng)作為豌豆萌發(fā)期的優(yōu)先耐旱性評(píng)價(jià)指標(biāo)。

植物的耐旱性受遺傳因子和環(huán)境共同控制，采取單項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行耐旱性評(píng)價(jià)的有效性和準(zhǔn)確性較低，因此，同時(shí)觀測(cè)多個(gè)指標(biāo)，進(jìn)行綜合分析后對(duì)試驗(yàn)材料進(jìn)行耐旱性評(píng)價(jià)很有必要[31]。本研究通過(guò)主成分分析法、隸屬函數(shù)法得到抗(耐)旱性度量值(D值)，其能夠綜合各指標(biāo)間的相互關(guān)系且避免了單一指標(biāo)存在的片面性，可較準(zhǔn)確地評(píng)價(jià)豌豆的抗(耐)旱性[32]?；疑P(guān)聯(lián)度分析作為衡量因素間關(guān)聯(lián)程度的一種方法，顯示了各指標(biāo)的重要性[33]。本研究以各指標(biāo)DC值為比較序列，D值和WDC值為參考序列，結(jié)果顯示各指標(biāo)分析在D值和WDC值間有較強(qiáng)的一致性，與朱宗河等[34]和謝小玉等[35]對(duì)油菜的研究結(jié)果一致。聚類分析是通過(guò)應(yīng)用變量的數(shù)值特征變化從而對(duì)研究對(duì)象進(jìn)行分類的統(tǒng)計(jì)方法，具有一定的可靠性[36]。本試驗(yàn)以D值、CDC值和WDC值為依據(jù)進(jìn)行各種(系)分類，在綜合耐旱評(píng)價(jià)的基礎(chǔ)上，將31份豌豆種質(zhì)材料分為4類，這與薏苡[18-20]、胡麻[37]、小麥[38]等作物的耐旱性鑒定結(jié)果一致。本研究結(jié)果為今后菜用豌豆萌發(fā)期抗旱性鑒定提供了理論依據(jù)，也為耐旱豌豆品種的選育、優(yōu)化布局與推廣應(yīng)用提供了一定的理論參考。

4 結(jié)論

本研究結(jié)果表明，31份豌豆品種資源在未干旱處理下，種子萌發(fā)相關(guān)性狀指標(biāo)變異系數(shù)介于19.30%～95.27%；而在模擬干旱處理下各指標(biāo)變異系數(shù)介于20.34%～99.63%之間。各性狀在品種間均存在著顯著差異，表明31份豌豆材料具有廣泛的遺傳基礎(chǔ)。通過(guò)單項(xiàng)指標(biāo)DC值分析，每個(gè)單項(xiàng)指標(biāo)篩選出耐旱性種質(zhì)不同，表明單項(xiàng)指標(biāo)篩選具有一定的局限性；根據(jù)綜合抗旱系數(shù)值(CDC值)、耐旱性度量值(D值)、加權(quán)關(guān)聯(lián)度(WDC值)大小對(duì)供試種質(zhì)進(jìn)行排序，其中耐旱最強(qiáng)的4個(gè)品種依次為16110、16055、16140和16107；耐旱性最弱的3個(gè)品種依次為16106、16175和16177。聚類分析將31份豌豆品種資源劃分為4個(gè)類群。逐步回歸分析表明，與D值密切相關(guān)的指標(biāo)為發(fā)芽指數(shù)、活力指數(shù)、發(fā)芽勢(shì)、根長(zhǎng)，這些可作為豌豆種質(zhì)資源萌發(fā)期耐旱性鑒定綜合選擇指標(biāo)。本研究結(jié)果為菜用豌豆耐旱機(jī)理、干旱調(diào)控緩解機(jī)制、菜用豌豆耐旱品種培育及其推廣等研究奠定了一定的理論。