方磊涵，王 留，郭全海,王中華

(商丘職業(yè)技術(shù)學(xué)院，河南 商丘 476100)

雞傳染性法氏囊病(Infectious bursal disease，簡稱IBD)是由法氏囊病毒(IBDV)引起雞的免疫機能障礙，導(dǎo)致雞的免疫力降低的一種急性、高度接觸性傳染病，一旦發(fā)病可導(dǎo)致雞的死亡率高達(dá)80%以上，由于該病的病原血清型和變異株較多，給疫苗免疫帶來了很大難度，造成養(yǎng)雞業(yè)嚴(yán)重?fù)p失[1]，[2]2-3.近年來，研究發(fā)現(xiàn)許多中草藥都具有免疫增強作用，主要通過促進(jìn)免疫器官發(fā)育來實現(xiàn)[3]812-814.隨著中藥的廣泛研究，中藥不僅可以增強機體細(xì)胞免疫及體液免疫，而且還具有免疫抑制功能[4]156.大多數(shù)中草藥都含有多糖的活性成分，在激活免疫細(xì)胞，增強免疫功能等方面表現(xiàn)出了很好的作用，并成為了中藥免疫增強劑的典型代表.

本試驗利用中藥多糖成分的免疫增強作用，與IBD 疫苗配合使用，來探討中藥復(fù)方多糖和兩者混合使用對雞傳染性法氏囊疫苗免疫雛雞血清抗體效價及外周血淋巴細(xì)胞增殖變化的影響，旨在篩選出一種高效中草藥免疫增強劑，以提高雞的免疫力，同時為治療雞法氏囊病的藥理作用提供依據(jù).

1 材料與方法

1.1 試驗藥物

中藥復(fù)方多糖(CHCP) 即選用黃芪、黨參、山楂、丹參、白術(shù)、茯苓、淫羊藿、補骨脂、生地、熟地、馬齒莧、甘草12味具有補氣生津、活血化瘀、健脾和胃、溫腎壯陽、扶正祛邪的中藥(購于商丘市天倫大藥房)，由商丘華康動物藥業(yè)有限公司提取其中的多糖而成，多糖含量為69.80%.

黃芪多糖(APS)： 由商丘市華康動物藥業(yè)有限公司提供，含量為75%.

IBD活疫苗(B87株)：購自商丘市動物疫病防控中心，青島易邦生物有限公司生產(chǎn).

IBD標(biāo)準(zhǔn)血清、抗原：標(biāo)準(zhǔn)抗原(批號：2013008)、陰性血清(批號：2013020)和陽性血清(批號：2013032)，由中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所生產(chǎn)，陽性血清AGP效價1∶128.

1.2 試驗動物

選擇150羽1日齡羅曼蛋公雞，飼養(yǎng)至10日齡(母源抗體效價平均為1.0±0.0 Log2)選取120羽隨機分為4組，每組30只，14日齡和28日齡分別全部用1羽份的法氏囊疫苗點眼滴鼻，每次免疫的同時，第1組在基礎(chǔ)日糧中添加1%的中藥復(fù)方多糖，第2組在基礎(chǔ)日糧中添加1%的黃芪多糖，連續(xù)3 d，第3組為免疫不用藥疫苗對照組，第4組為不免疫不用藥空白對照組(見表1).

表1 試驗雞的分組及處理

1.3 檢測指標(biāo)

首免后第7(D7)、14(D14)、21(D21)、28(D28)、35(D35)日，每組隨機抽取6只雞，翼下靜脈采血0.3 mL，分離血清，用瓊脂擴散法(AGP)測定法氏囊特異性抗體滴度[5]127-128.首免后第7(D7)、21(D21)、35(D35)日，每組抽取5只進(jìn)行心臟采血，并用MTT法對外周血淋巴細(xì)胞增殖轉(zhuǎn)化率進(jìn)行測定[6]23-24.

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計

用SPSS 15.0軟件進(jìn)行Duncan’s差異顯著性分析.

2 結(jié)果與分析

2.1 血清抗體效價的變化

由表2可見，在D7，各用藥組AGP效價明顯高于疫苗對照組，但差異不顯著(P>0.05)；在D14，中藥復(fù)方多糖AGP效價顯著高于疫苗對照組(P<0.05)；在D 21和D28，中藥復(fù)方多糖組AGP抗體效價顯著高于黃芪多糖組和疫苗對照組(P<0.05)；在D35中藥復(fù)方多糖組AGP效價顯著高于疫苗對照組(P<0.05).

表2 各組抗體效價的動態(tài)變化(Log2)

2.2 外周血淋巴細(xì)胞增殖變化

由表3可見，各組OD570值的變化，首次免疫后第7 d和21 d，中藥復(fù)方多糖組OD570值顯著高于黃芪多糖組，后者顯著高于疫苗對照組(P<0.05)；首次免疫后第35 d，各用藥組的OD570顯著高于疫苗對照組(P<0.05)；與空白對照組相比，試驗各組OD570均顯著提高.

表3 各組淋巴細(xì)胞增殖的變化

3 討論

3.1 中藥復(fù)方多糖對雛雞體內(nèi)抗體水平的影響

免疫增強劑具有調(diào)節(jié)機體免疫功能、提高機體免疫應(yīng)答反應(yīng)的作用，在治療和預(yù)防傳染性疾病方面具有非常重要的作用[7]102-103.而抗體效價作為評價機體免疫狀態(tài)的主要指標(biāo)之一，在預(yù)防病原入侵和消滅病原體等方面起著重要作用，也是雞免疫后反映體液免疫功能的重要指標(biāo)[8]57.體液免疫主要是由T細(xì)胞輔助的B細(xì)胞產(chǎn)生的抗體，是機體抵抗疫病的一個重要因素.抗體是由B細(xì)胞分泌產(chǎn)生的，而雞法氏囊又是B細(xì)胞發(fā)育成熟的主要場所，其抗體的形成在抵御和消除病原體等方面具有非常重要的作用，因此抗體水平的高低直接反映了機體免疫應(yīng)答水平的高低[9]50-52.張瑞婷[10]研究表明，用絞股藍(lán)微粉發(fā)酵液以1%、0.5%、0.25%的量添加在雞的日糧中，均可顯著提高雞新城疫和法氏囊抗體滴度(P<0.01或P<0.05)，并延長抗體的有效存活時間.王海龍[11]采用不同劑量的玉屏風(fēng)散拌入雞的飼料中，于21、28、35、42、49日齡對免疫后的雞進(jìn)行法氏囊病毒抗體測定，結(jié)果表明，玉屏散顯著提高雞血清中的IBDV抗體水平，以1%和0.75%的量添加效果最好.

本試驗利用CHCP的免疫增強作用，與IBD 疫苗配合使用，測定法氏囊特異性抗體效價，結(jié)果顯示，中藥復(fù)方多糖能顯著提高雛雞免疫法氏囊疫苗后的抗體水平，效果優(yōu)于黃芪多糖組和疫苗對照組.胡元亮[12]3-5、張國祖[13]27-30的研究也得到了類似的結(jié)果.

3.2 中藥復(fù)方多糖對雛雞外周血淋巴細(xì)胞增殖變化的影響

外周血淋巴細(xì)胞的增殖水平能夠反映機體的細(xì)胞免疫.近年來，免疫激發(fā)型中藥對雛雞外周血淋巴細(xì)胞增殖變化影響方面有不少的報道，高雪麗等[14]907-909IBD疫苗免疫雛雞研究中發(fā)現(xiàn)，使用免疫增強劑“禽福、億妙靈”，均不同程度地提高了外周血液的細(xì)胞免疫和體液免疫應(yīng)答水平，攻毒后疫苗保護率達(dá)到 80%以上，可見“禽福、億妙靈”起到提高疫苗的免疫活性，提高血清抗體水平的作用，從而有效抵抗病毒的攻擊.郭振環(huán)等[15]1015-1019按一定規(guī)律將硫酸化黃芪多糖、硫酸化淫羊藿多糖、硫酸化香菇多糖組成 4個復(fù)方 sPSP 1、sPSP 2、sPSP 3 和 sPSP 4，用四甲基偶氮唑藍(lán) (MTT)法測定淋巴細(xì)胞增殖情況，結(jié)果表明，4個復(fù)方可以單獨或協(xié)同 PHA、LPS顯著刺激雞脾淋巴細(xì)胞增殖、協(xié)同 ConA顯著刺激外周血淋巴細(xì)胞，以sPSP1、sPSP 2 的作用最強.

本試驗用MTT法測定外周血淋巴細(xì)胞增殖，中藥復(fù)方多糖能顯著提高雛雞免疫法氏囊苗后的淋巴細(xì)胞增殖，效果優(yōu)于黃芪多糖和疫苗對照組.這表明，中藥復(fù)方多糖具有很好的免疫增強作用.

4 結(jié)論

在雞的日糧中添加中藥多糖，能顯著提高雞免疫法氏囊疫苗后的抗體水平和淋巴細(xì)胞增殖，在增強免疫功能方面表現(xiàn)出了很好的作用，其效果明顯好于黃芪多糖，在臨床應(yīng)用上中藥復(fù)方多糖效果也要好于單味多糖的效果.因此，中藥復(fù)方多糖可作為免疫增強劑廣泛應(yīng)用于家禽的生產(chǎn)上，具有很好的研究價值與應(yīng)用前景.