陳慧玲 劉宗坤 楊彥玲 張新葉 劉正言 龐宏東 李振芳 劉濤 陳華超 馬林江 彭嬋

中圖分類號：S792.99?文獻標識碼：A?文章編號：1004-3020（2019）06-0089-02

1?范圍

本標準規(guī)定了湖北主要藥用植物石斛組培育苗的術(shù)語與定義、種類選擇、種苗繁育、煉苗與健化、病蟲害防治及種苗出圃。本標準適用于湖北省范圍內(nèi)主要藥用植物石斛的組培育苗生產(chǎn)。

2?規(guī)范性引用文件

農(nóng)藥合理使用應(yīng)符合國家、行業(yè)發(fā)布的標準。詳情見表1注。

3?術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本標準。

（1）石斛菌根共生菌。一種或幾種侵染石斛屬植物根部，與之共生的內(nèi)生真菌，石斛屬植物種子萌發(fā)、幼苗生長的碳源、水源以及成年植株部分營養(yǎng)均依賴這些真菌來獲取。

（2）石斛菌根共生菌液。藥用植物石斛進行組織培養(yǎng)時，在其培養(yǎng)基中添加的由石斛菌根共生菌經(jīng)無菌分離培養(yǎng)后得到的液體菌劑。

（3）煉苗。采取通風(fēng)、降溫、適當控水等措施對設(shè)施培育的幼苗進行強迫鍛煉，提高抗性，使其定植后能夠迅速適應(yīng)陸地的自然環(huán)境條件的過程。

4?種類選擇

霍山石斛Dendrobium?huoshanense、鐵皮石斛D.officinale、細莖石斛D.monilifolme為主要栽培種。注：石斛屬植物約1?500種，中國有75種2個變種，湖北有8種，以上3種在湖北栽培表現(xiàn)好。

5?種苗繁育

（1）蒴果采收。對現(xiàn)有種子園中多糖含量高、高產(chǎn)的2～3?a生健康植株進行人工授粉后精心管理，于9月～11月采收無病蟲害、無機械損傷的成熟蒴果，以果皮綠黃色未開裂為宜。

（2）消毒播種：①消毒。在超凈工作臺上將蒴果表面用70%酒精棉球擦拭干凈后，浸泡于70%酒精中30?s，再用0.1%升汞消毒15?min，無菌水沖洗5次后用無菌濾紙吸干表面水分。②播種。在超凈工作臺上用滅菌手術(shù)刀沿中縫線縱向切開消毒好的蒴果，刮出種子于適量的無菌水中分別制成懸浮液，搖勻懸浮液后，吸取適量懸浮液加入裝有1/2?MS+1%石斛菌根共生菌液培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，并使之均勻分布，用封口膜封口。③培養(yǎng)條件。將已播種的培養(yǎng)瓶放入溫度為（25±1）?℃，光照10～12?h、光照強度1?500～2?000?1x組培室培養(yǎng)。

（3）增殖培養(yǎng)。30?d后將培養(yǎng)基上萌生的原球莖轉(zhuǎn)接到MS?+?2.0?mg/L?6-BA?+?0.2?mg/L?NAA?+?10%香蕉汁+1%石斛菌根共生菌液的增殖培養(yǎng)上培養(yǎng)，培養(yǎng)條件參照本標準5.2.3執(zhí)行。

（4）分化培養(yǎng)。60?d后將增殖的原球莖轉(zhuǎn)接到MS+0.6?mg/L?6-BA+1.2?mg/L?NAA+10%香蕉汁的分化培養(yǎng)基上培養(yǎng)，培養(yǎng)條件參照本標準5.2.3執(zhí)行。

（5）生根培養(yǎng)。60?d后將分化的叢生芽轉(zhuǎn)接到1/2?MS+1.0?mg/L?NAA+15%馬鈴薯+2%石斛菌根共生菌液的生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)，培養(yǎng)條件參照本標準5.2.3執(zhí)行。

6?煉苗與健化

（1）搭建蔭棚。選擇地勢平坦處搭建長40～50?m、寬8?m、高3.3?m的鋼架大棚，覆蓋避雨薄膜和遮光度75%～80%的遮陽網(wǎng)，棚內(nèi)安裝微噴霧設(shè)備。

（2）煉苗。組培苗生根培養(yǎng)60?d后即可開瓶煉苗移栽。將苗高3～4?cm、長小葉5片～8片，根4～5條的試管苗帶培養(yǎng)瓶一起移至蔭棚內(nèi)，進行常溫閉瓶煉苗，7?d后再開瓶煉苗3～7?d。煉苗溫度宜15～30?℃，光照小于7?000?lx。

（3）健化。①健化基質(zhì)準備。采用樹皮+花崗巖瓜米石的雙層基質(zhì)作為健化基質(zhì)，上層為厚度2?cm發(fā)酵過的1?cm大小碎松樹樹皮，下層為厚度2?cm的粒徑0.5～1.0?cm花崗巖瓜米石，基質(zhì)在組培苗健化前用高溫蒸汽消毒后裝入育苗盤。②組培苗健化前預(yù)處理。將已進行煉苗處理的生根組培苗從培養(yǎng)瓶中取出，先用清水將根系上的瓊脂沖洗干凈，再用5%甲基托布津1000倍液浸根3～5?min，放在陰涼通風(fēng)處晾至根系呈白色后即可進行組培苗健化。③健化方法。用42?cm×42?cm×5?cm的育苗盤，按10?cm×10?cm密度進行健化，每個育苗盤栽種16蔸，每蔸5～6株叢植，移栽時基質(zhì)含水量控制在30%～40%。④健化管理。健化種苗需噴霧保持幼苗相對濕潤，10～15?d后，開始用自制石斛營養(yǎng)液和磷酸二氫鉀1000～2000倍液交替噴施，每隔15?d噴1次。

7?病蟲害防治

（1）防治原則。病蟲害防治遵循“預(yù)防為主，科學(xué)防控，依法治理，促進健康”的16字方針，實行生物、物理、化學(xué)防治相結(jié)合的綜合防治措施。

（2）主要病蟲害及防治方法。藥用植物石斛主要病害有石斛黑斑病Dendrobium?alternaria、石斛炭疽病D.anthracnose?disease和石斛煤污病D.sooty?blotch。預(yù)防病害發(fā)生應(yīng)保持生長環(huán)境衛(wèi)生，增強環(huán)境通風(fēng)透光，及時清除有病植株、雜草及殘枝落葉。藥用植物石斛主要蟲害有蛞蝓Agriolimax?agrestis、蝸牛Fruticicolidae和石斛菲盾蚧Phenacaspis?dendrobii。預(yù)防蟲害發(fā)生應(yīng)及時捕捉害蟲，同時利用生物農(nóng)藥防蟲，及時清除有蟲植株、雜草及殘枝落葉，改善環(huán)境條件。主要的防治方法見表1。

8?種苗出圃

（1）出圃時間。種苗在蔭棚內(nèi)健化1～2?a后才能出圃上山定植，以春季3～5月為宜。

（2）種苗規(guī)格。單株苗高4～5?cm，葉片濃綠，葉數(shù)5～8?片，根數(shù)4～5?條，根長2.5～3.5?cm，每蔸8～10?株。

（3）出圃要求。起苗前2～3?d應(yīng)噴水保證基質(zhì)濕潤，減少起苗傷根。種苗要求生長健壯、無感染、無黃化，無檢疫性病蟲，無病蟲害。根系發(fā)達，分布均勻，無機械損傷。

（責(zé)任編輯：鄭京津）