王梓樂，張艷芳，鄭丕苗，任禎慧，江海洋

（中國農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院，北京 100193）

阿托品（atropine）是一種主要從茄科植物（顛茄、曼陀羅或莨菪）中提取的有毒生物堿，因具有解除平滑肌痙攣、改善微循環(huán)、抑制腺體分泌、加快心搏、升高眼壓、興奮呼吸中樞等功效，在人醫(yī)及獸醫(yī)臨床上作為抗膽堿藥物使用[1]。數(shù)年來，科研工作者對于阿托品的研究大多停留在醫(yī)學領(lǐng)域[2-3]，關(guān)于其超過治療劑量使用的危害及非法使用的監(jiān)測則鮮有文獻報道，我國目前暫未制定阿托品在動物源性食品中相關(guān)殘留限量，歐盟也僅僅對嬰幼兒食品中阿托品殘留設(shè)有1 ng/g 的最高殘留限量標準。然而大量實驗數(shù)據(jù)表明，過量使用阿托品會引發(fā)人體出現(xiàn)視力模糊、瞳孔擴張、口干、皮膚紅腫、嘔吐、心動過速等癥狀甚至導致人體死亡[4]。近年來，少數(shù)不法分子為謀求經(jīng)濟利益，在動物屠宰前向動物大量注射阿托品，利用其抑制腺體分泌的作用特點在短時間內(nèi)引起動物口渴自主大量飲水，最終達到增加動物體重的目的[5]。然而阿托品具有較大的殘留毒性，超量注射直接導致阿托品在動物可食組織中大量殘留，若消費者食用含過量阿托品殘留的動物源性食品，將對消費者的身體健康與生命安全造成威脅[6-8]。因此，規(guī)范阿托品使用及建立健全相關(guān)殘留檢測的監(jiān)察機制對保障人體健康具有重要意義，同時建立動物源性食品中阿托品殘留相關(guān)檢測方法也十分必要。本文綜述了目前常見動物源食品中殘留檢測方法，以期為阿托品的合理使用與殘留監(jiān)測提供文獻參考。

1 阿托品檢測方法

目前常用于動物源性食品中阿托品殘留檢測的方法主要包括分光光度法、高效液相色譜法（HPLC）和儀器聯(lián)用法。

1.1 分光光度法

分光光度法是一種通過測定待測樣品在特定波長處或一定波長范圍內(nèi)光的吸收度，對該樣品進行定性和定量分析的方法，具有靈敏度高、操作簡便、快速等優(yōu)點。朱福卓等[9]利用分光光度法對牛肉中阿托品殘留量進行了測定，將待測牛肉樣品切為細條，采用pH4 的80%乙醇溶液作為反應(yīng)液，于50℃進行攪拌24 h 后過濾蒸干備用，添加梯度濃度的硫酸阿托品溶液各10 mL，于冰浴中沿管壁加入硫氫化鉻銨進行沉淀，沉淀物經(jīng)洗滌后丙酮復溶，加入比色皿，置于721 分光光度計525 nm 波長處測定其吸光度，其回歸方程為y=0.000 3+0.020 05x，相關(guān)系數(shù)γ=0.999 8。該方法測得牛肉樣本中阿托品的殘留量為0.32 mg/g。分光光度法不受儀器與設(shè)備等條件的限制，檢測便捷快速，適用于基層阿托品殘留檢測。

1.2 高效液相色譜法（HPLC）

高效液相色譜法以液體作為流動相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將待測樣品中多種成分于色譜柱內(nèi)進行分離后進入檢測器進行檢測。利用該方法對動物源性食品中阿托品殘留進行檢測具有高準確度與靈敏度的優(yōu)勢。李長纓等[10]以羊肉作為檢測樣本，采用超聲波提取工藝以高效液相色譜法實現(xiàn)了對肉制品中硫酸阿托品含量的檢測。該方法選取C18作為色譜柱，以甲醇與0.1%、pH5.8 的三乙胺水溶液（35:65，V/V）作為方法的流動相，于206 nm 的檢測波長下進行樣品的檢測。同時根據(jù)不同的硫酸阿托品標準品濃度建立標準曲線，在硫酸阿托品0.002～0.02 mg/mL 的范圍內(nèi)，其回歸方程為y=17 680x-4.362 5。得出該方法的檢測限為2 mg/kg。

1.3 儀器聯(lián)用法

目前用于動物源食品中阿托品殘留檢測的儀器聯(lián)用法包括超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（UPLC-MS/MS）、高相液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（HPLC-MS/MS）、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（LCMS）和氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（GC-MS）。

1.3.1 超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（UPLC-MS/MS）胡興娟等[11]成功建立的豬肉和豬肝中阿托品殘留檢測UPLC-MS/MS，采用乙腈-0.1%甲酸水（V/V，90:10）對待測樣品進行提取，并經(jīng)過固相萃取柱凈化后外標法定量。該方法表明阿托品含量在0.2～10.0 ng/mL 的范圍內(nèi)時線性關(guān)系良好，在0.5～2.5 ng/g 的添加濃度范圍內(nèi)批間平均回收率為78.3%～98.2%，該方法的檢測限為0.2 ng/g，定量限為0.5 ng/g。段科等[12]則選取豬肉、雞肉、牛肉等作為檢測樣本實現(xiàn)了生肉中阿托品的殘留檢測，該方法中生肉樣本經(jīng)乙腈超聲提取之后采用正己烷除油，色譜柱選用C18柱，以0.1%甲酸水溶液-甲醇作為流動相對其進行檢測。試驗結(jié)果表明，阿托品在0.5～20.0 ng/mL 的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，其方法檢出限為0.056 μg/kg，定量限為0.072 μg/kg。

1.3.2 高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（HPLC-MS/MS）李志剛等[13]建立的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜方法，為鮮肉中阿托品等違禁注水藥物的同時檢測提供了可能。該方法中鮮肉樣本經(jīng)過磷酸鹽緩沖液，HLB 固相萃取柱凈化后，以甲酸-水（1:99，V/V）及乙腈作為流動相。結(jié)果表明，該方法在0.25～50.00 ng/mL 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回收率在78.07%～96.76%之間，檢測限與定量限分別為0.5 μg/kg 和2.0 μg/kg，能夠滿足實際檢測分析的需要。

1.3.3 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS）Zheng 等[14]以一種優(yōu)化后的QuEChERS（Quick、Easy、Cheap、Effective、Rugged、Safe）方法結(jié)合LC-MS，實現(xiàn)了豬肉、雞蛋、牛奶等動物源性食品中阿托品殘留檢測。該方法以乙二胺四乙酸二鈉緩沖液和0.5%三氟乙酸酸化的乙腈的組合作為提取溶液，QuEChERS 試劑盒與吸附劑用于樣本的凈化，以蒸餾水與含有10 mmol/L 甲酸銨的0.1%甲酸的流動相實現(xiàn)了最佳分離。豬肉、牛奶樣本基質(zhì)中的阿托品加標濃度為1～10 mg/kg 時，回收率為60%～120%。該方法的檢測限為0.4 mg/kg，定量限為2 mg/kg。

1.3.4 氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（GC-MS）董仕林等[15]建立的GC-MS 為羊肉中阿托品的檢測提供了新的途徑。該方法采用酸性水對羊肉瘦肉樣本進行萃取，經(jīng)過濾處理、甲醇溶解之后以氣相色譜-質(zhì)譜儀進行檢測。該方法在標準品進樣20 ng時能夠清晰分辨阿托品出峰，在0～100 ng 的檢測范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，在0.5 mg 的添加水平時回收率為84%，方法檢測限為20 ng。

2 討論

目前有關(guān)動物源性食品中阿托品殘留檢測方法的文獻報道較少。在已建立的分光光度法、高效液相色譜法與儀器聯(lián)用方法中，后兩種方法的檢測需要使用多種儀器，而且儀器價格昂貴，對試驗操作人員的專業(yè)要求較高，其中高效液相色譜的方法對樣品純度或含量的要求高，檢測限高，難以滿足痕量檢測的要求，因此這兩種方法在基層檢測中具有很大的限制。與此同時，隨著我國經(jīng)濟快速發(fā)展，人民生活水平明顯提高，人民對動物源性食品的需求量急速增加。在此背景之下，建立更加快速、操作簡單、低成本的免疫學方法具有十分重要的意義?；诳乖贵w特異性結(jié)合的免疫學方法，其核心試劑為抗阿托品特異性抗體，然而目前國內(nèi)外均未見抗阿托品特異性抗體的文獻報道，且其同類化合物東莨菪堿抗體對其交叉反應(yīng)弱，因此制備抗阿托品特異性抗體，建立相關(guān)免疫學方法，是檢測阿托品在動物源性食品中殘留的重要跨越，也是科研工作者可以進行延伸探究的方面。