王海豐

（撫順市現(xiàn)代農(nóng)業(yè)及扶貧開發(fā)促進(jìn)中心 113006）

非洲豬瘟是由非洲豬瘟病毒引起的豬的一種急性、熱性、高度接觸性動(dòng)物傳染病，以高熱、網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)出血和高死亡率為特征。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE） 將其列為法定報(bào)告動(dòng)物疫病，我國將其列為一類動(dòng)物疫病。自8 月份沈陽市發(fā)生我國首次非洲豬瘟疫情以來，截至目前全國共有17 個(gè)省、市、自治區(qū)發(fā)生60 余起疫情，造成巨大經(jīng)濟(jì)損失和社會(huì)影響。非洲豬瘟病毒感染的豬只發(fā)病臨床和剖檢癥狀非常典型，兼顧古典豬瘟和高致病性豬藍(lán)耳病的特征，需經(jīng)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)來確診。為保證實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的準(zhǔn)確，樣品采集、包裝和運(yùn)輸技術(shù)要求尤為重要。本文從采樣方法、樣品的記錄、保存、包裝和運(yùn)送等技術(shù)進(jìn)行科學(xué)系統(tǒng)的介紹，具體如下。

1 采樣方法

1.1 全血樣品

采血過程中應(yīng)保持無菌操作。采血前，先用酒精棉對(duì)采血部位進(jìn)行局部消毒。采血完畢，進(jìn)行局部消毒并用干棉球按壓止血。使用含有抗凝血?jiǎng)‥DTA） 的真空采血管從頸靜脈、前腔靜脈或耳緣靜脈抽取全血。如果豬只已經(jīng)死亡，可立即從心臟中采血。避免使用含肝素的真空采血管。

1.2 血清樣品

使用未加抗凝劑（紅色蓋子） 的真空采血管從頸靜脈、前腔靜脈、耳緣靜脈采血，或剖檢過程收集血液樣品。靜置分離后，收集血清。如果血清是紅色表明樣品發(fā)生溶血。通常已經(jīng)死亡動(dòng)物的血液樣品易發(fā)生溶血。血清樣品在分離后可以立即開展檢測(cè)，如果需要儲(chǔ)存，對(duì)于抗體檢測(cè)，儲(chǔ)存在-20℃，但對(duì)病毒檢測(cè)最好儲(chǔ)存于-80℃。

1.3 器官和組織樣品

可采集脾臟、淋巴結(jié)、肝臟、扁桃體、心臟、肺和腎臟樣品。脾臟和淋巴結(jié)的病毒含量最高。對(duì)于死亡時(shí)間較長的動(dòng)物，可采集骨髓樣品，也可采集關(guān)節(jié)內(nèi)組織液。建議將樣品保持在4℃，盡快提交給實(shí)驗(yàn)室。如無法及時(shí)送樣，可將樣品儲(chǔ)存在冷庫或液氮中。樣品用10%緩沖福爾馬林浸泡30min 以上，病毒可被滅活，可用于PCR 檢測(cè)。樣品的最小需求量：血清1ml；全血1ml；組織樣品10g。

1.4 環(huán)境樣品

可多點(diǎn)采集養(yǎng)殖場(chǎng)環(huán)境拭子，如糞便、泔水、飼料等。建議樣品4℃以下保存。

2 樣品的記錄、保存、包裝和運(yùn)送

為保證準(zhǔn)確診斷，必須在適當(dāng)溫度下，以最快速度，將樣品仔細(xì)包裝、做好標(biāo)記和相關(guān)記錄，以最快路線送到指定的實(shí)驗(yàn)室。

采樣之前必須致電相關(guān)實(shí)驗(yàn)室，確保遵循正確的樣品提交程序，保證所送樣品能在第一時(shí)間完成檢測(cè)及儲(chǔ)存。做好樣品運(yùn)輸過程中的安全保障工作，避免在運(yùn)輸途中感染其他動(dòng)物，避免樣品被污染。運(yùn)送的樣品必須附有足夠數(shù)量的冷卻材料（如冰袋），以防變質(zhì)。

3 采樣信息記錄

采樣的同時(shí)應(yīng)填寫采樣單。采樣單應(yīng)用鋼筆或簽字筆逐項(xiàng)填寫（一式三份）。樣品標(biāo)簽和封條應(yīng)用簽字筆填寫。保溫容器外封條應(yīng)用鋼筆或簽字筆填寫。小塑料離心管上可用記號(hào)筆做標(biāo)記。應(yīng)將采樣單和病史資料裝在塑料包裝袋中，并隨樣品送實(shí)驗(yàn)室，每個(gè)樣品應(yīng)能對(duì)應(yīng)到來源動(dòng)物。樣品信息至少應(yīng)包括畜主姓名和養(yǎng)殖場(chǎng)地址；養(yǎng)殖場(chǎng)飼養(yǎng)動(dòng)物品種及數(shù)量；疑似或被感染動(dòng)物或易感動(dòng)物種類及數(shù)量；首發(fā)病例和繼發(fā)病例的日期；感染動(dòng)物在畜群中的分布情況；死亡和出現(xiàn)臨床癥狀的動(dòng)物數(shù)量及年齡；臨床癥狀及其持續(xù)時(shí)間，死亡情況和時(shí)間等；飼養(yǎng)類型和標(biāo)準(zhǔn)，包括飼料來源等；送檢樣品清單和說明，包括病料種類、保存方法等；動(dòng)物免疫和治療史；送檢者的姓名、地址、郵編、電話和郵箱；送檢日期；采樣人和被采樣單位簽章。

4 樣品包裝要求

推薦樣品使用“三重包裝系統(tǒng)”，并正確標(biāo)記，以防止泄漏，內(nèi)附采樣單。

4.1 直接盛裝容器

樣品應(yīng)儲(chǔ)存在密封、無菌的主容器中，根據(jù)檢驗(yàn)樣品性狀及檢驗(yàn)?zāi)康倪x擇不同的容器。每個(gè)樣品外應(yīng)做好標(biāo)記，注明樣品名、樣品編號(hào)、采樣日期等，要能明確識(shí)別來自于哪只動(dòng)物。

4.2 二次包裝

吸收材料也應(yīng)放置在二次容器內(nèi)。如果將多個(gè)易碎的主容器放置在單個(gè)二次容器中必須單獨(dú)包裝或分離，以防止相互接觸。二次包裝容器應(yīng)貼封條，封條上應(yīng)有采樣人簽章，并注明貼封日期，標(biāo)注放置方向。

4.3 堅(jiān)硬的外部包裝

外包裝在盛裝液體的情況下不得超過4L，在固體物質(zhì)的情況下不得超過4kg （不包括冰的重量）。樣品必須保持4℃溫度或更低溫度，并就近送動(dòng)物疫病預(yù)防控機(jī)構(gòu)進(jìn)行保存。注意：切勿凍結(jié)全血或混合有血凝塊的血清。

4.4 外包裝標(biāo)簽和標(biāo)記

需粘貼“B 類感染物質(zhì)”標(biāo)簽，其正確的運(yùn)輸名稱旁邊標(biāo)注“B 類感染物質(zhì)”，采樣負(fù)責(zé)的全名、地址和電話號(hào)碼，實(shí)驗(yàn)室聯(lián)系人的全名、地址和電話號(hào)碼，標(biāo)簽上注明“在4℃”“在-20℃”或“在-80℃”保存。