■ 吳峰洋 崔 嘉 夏雪如 劉婷婷 谷子林 陳寶江，2*

（1.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，河北保定071001；河北省牛羊胚胎工程技術(shù)研究中心，河北保定071001）

寡糖類添加劑是當(dāng)前生物飼料領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)之一，具有安全、穩(wěn)定、無耐藥性、無殘留等優(yōu)點(diǎn)，因而，應(yīng)用前景廣闊。魔芋甘露寡糖(KON-MOS)是一種由天南星科植物魔芋酶解獲得的功能性寡聚糖，其結(jié)構(gòu)主鏈?zhǔn)怯赡柋葹?∶1.5的葡萄糖和甘露糖殘基經(jīng)β-1，4-D-甘露吡喃糖苷鍵連接而成，側(cè)鏈由β-1，3糖苷鍵連接而成。甘露寡糖易溶于水等極性溶劑，難溶于有機(jī)溶劑，其黏度易受環(huán)境溫度的影響，且具有一定的甜味。甘露寡糖的性質(zhì)比較穩(wěn)定，可以在一定的pH值范圍（3～9）內(nèi)和飼料調(diào)制及制粒的高溫環(huán)境下保持自身結(jié)構(gòu)和功能的相對(duì)完整。相關(guān)研究表明，甘露寡糖可以通過優(yōu)化腸道菌群組成[1-2]，改善腸道結(jié)構(gòu)形態(tài)[3]，來增強(qiáng)腸道機(jī)能，提高營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率，促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)[4]。也可以通過促進(jìn)免疫器官發(fā)育[5]，增強(qiáng)免疫細(xì)胞和免疫活性因子的作用以及充當(dāng)佐劑等方式來提高動(dòng)物的免疫性能[6]。我國擁有豐富的魔芋資源，開發(fā)和利用KON-MOS具有天然的優(yōu)勢(shì)。但是，到目前為止，鮮有其在獺兔生產(chǎn)中的研究報(bào)道，由于缺乏生產(chǎn)實(shí)際以及理論機(jī)制方面的研究，限制了其在獺兔生產(chǎn)中的應(yīng)用。本試驗(yàn)通過飼喂添加不同水平KON-MOS的飼糧，研究其對(duì)生長(zhǎng)獺兔營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)利用率、免疫器官指數(shù)及血清指標(biāo)的影響，為其在兔生產(chǎn)中的進(jìn)一步研究和應(yīng)用提供科學(xué)參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料與飼糧設(shè)計(jì)

本試驗(yàn)選用的KON-MOS來自河北科納生物科技有限公司，為棕黃色粉末狀，KON-MOS的含量≥25%。

基礎(chǔ)飼糧的配制參照NRC（1977）[7]和谷子林[8]推薦的兔營(yíng)養(yǎng)需要進(jìn)行配制(見表1)。試驗(yàn)飼糧制成直徑為4～5 mm、長(zhǎng)10 mm的顆粒飼料。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物與試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選取42日齡左右平均體重為(0.84±0.07)kg的健康白色獺兔120只（公母各60只），按性別和體重隨機(jī)分為5組（每組24個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)1只）。分別飼喂在基礎(chǔ)飼料中添加0（對(duì)照組）、50、100、150、200 mg/kg KON-MOS的試驗(yàn)飼糧。

試驗(yàn)前對(duì)兔舍和籠具進(jìn)行清潔和消毒，試驗(yàn)兔單籠單兔飼喂，常規(guī)飼養(yǎng)管理，正常通風(fēng)光照，自由采食飲水。預(yù)試期7 d，正試期60 d。

1.3 測(cè)定指標(biāo)與方法

1.3.1 營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率

飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束前7 d，各組隨機(jī)選取6只試驗(yàn)兔，移入消化代謝籠內(nèi)進(jìn)行為期7 d的消化試驗(yàn)。消化試驗(yàn)采用全收糞法，記錄各試驗(yàn)兔實(shí)際采食量，收集全部糞便，稱重后分為兩份，一份混合10%鹽酸固氮測(cè)量粗蛋白質(zhì)，另一份測(cè)量其他營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。試驗(yàn)結(jié)束后將糞樣烘干粉碎，放入樣品瓶中備測(cè)。各常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分的測(cè)定方法及營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的表觀消化率的計(jì)算，參照陳丹丹等[9]的方法進(jìn)行。

1.3.2 免疫器官指數(shù)

試驗(yàn)結(jié)束后，對(duì)試驗(yàn)兔進(jìn)行12 h的禁食處理，各組內(nèi)隨機(jī)挑選4只試驗(yàn)兔（公母各半）進(jìn)行屠宰，宰前稱量活重，宰后稱量各內(nèi)臟器官重。

器官指數(shù)（g/kg）=器官鮮重（g）/宰前活重（kg）

1.3.3 血清指標(biāo)

于試驗(yàn)進(jìn)行第60 d，每組隨機(jī)選取8只試驗(yàn)兔，心臟采血，每只采集5 ml，將血液注入離心管內(nèi)傾斜靜置，待血凝后3 000 r/min離心10 min，分離血清，于-20℃條件下冷凍保存。將血清樣品送至河北大學(xué)附屬醫(yī)院血液檢測(cè)中心檢測(cè)，使用貝克曼庫爾特AU5800生化儀測(cè)量樣品中總膽固醇（TCHO）、甘油三酯（TG）、葡萄糖（GLU）、尿素（UREA）、總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLO）、白球比（A/G）、免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白M（IgM）以及補(bǔ)體C4（C4）含量。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

使用Excel 2010軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。One-Way ANOVA檢驗(yàn)組間差異顯著性，LSD法進(jìn)行多重比較。P＜0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 KON-MOS對(duì)生長(zhǎng)獺兔營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率的影響(見表2)

表2 KON-MOS對(duì)生長(zhǎng)獺兔營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率的影響(%)

由表2可知，KON-MOS對(duì)生長(zhǎng)獺兔對(duì)DM、GE、CP以及CF的表觀消化率均有不同程度的影響，且四種營(yíng)養(yǎng)物的的表觀消化率各試驗(yàn)組均高于對(duì)照組。與對(duì)照組相比，DM的表觀消化率各試驗(yàn)組分別提高 3.67%（P＞0.05）、6.13%（P＜0.05）、4.29%（P＜0.05）和4.49%（P＜0.05）；對(duì)GE的表觀消化率分別提高 3.68%（P＞0.05）、8.28%（P＜0.05）、5.66%（P＜0.05）和4.86%（P＞0.05）；對(duì)CP的表觀消化率分別提高3.11%（P＞0.05）、5.15%（P＜0.05）、5.68%（P＜0.05）和4.94%（P＜0.05）；對(duì)CF表觀消化率分別提高4.09%（P＞0.05）、5.13%（P＞0.05）、6.85%（P＞0.05）和10.25%（P＜0.05）。生長(zhǎng)獺兔對(duì)NDF和ADF的表觀消化率無顯著影響（P＞0.05），且各試驗(yàn)組兩者均高于對(duì)照組。

2.2 KON-MOS對(duì)生長(zhǎng)獺兔免疫器官指數(shù)的影響（見表3）

表3 KON-MOS對(duì)生長(zhǎng)獺兔免疫器官指數(shù)的影響（g/kg）

由表3可知，KON-MOS對(duì)生長(zhǎng)獺兔的脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)均無顯著影響（P＞0.05），但各試驗(yàn)組兩者均高于對(duì)照組，脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)分別以第Ⅱ組和第Ⅲ組最高，分別比對(duì)照組高23.40%和24.71%。

2.3 KON-MOS對(duì)生長(zhǎng)獺兔血液生化指標(biāo)的影響(見表4)

由表4可知，KON-MO對(duì)生長(zhǎng)獺兔血清中TCHO、TG、GLU、UREA、TP、ALB、GLO以及A/G均無顯著影響（P＞0.05）。其中TCHO、TG和UREA含量各試驗(yàn)組均低于對(duì)照組，且TCHO含量隨添加水平的提高呈降低趨勢(shì)，以第Ⅴ組最低，比對(duì)照組低19.09%（P＞0.05）。TG和UREA分別以第Ⅳ組和第Ⅲ組最低，分別比對(duì)照組低11.86%和12.05%。GLU、TP、ALB、GLO含量則各試驗(yàn)組均高于對(duì)照組，且GLU含量以第Ⅳ組最高，其余均以第Ⅲ組最高，分別比對(duì)照組高12.19%、7.18%、9.03%和10.92%。

表4 KON-MOS對(duì)生長(zhǎng)獺兔血液生化指標(biāo)的影響

2.4 KON-MOS對(duì)生長(zhǎng)獺兔血清免疫球蛋白和補(bǔ)體C4水平的影響（見表5）

由表5可知，KON-MOS對(duì)生長(zhǎng)獺兔血清中IgG、IgM和補(bǔ)體C4的含量均無顯著影響（P＜0.05），其中IgG和IgM含量均以第Ⅲ組最高，分別比對(duì)照組高7.76%和31.25%，補(bǔ)體C4含量以第Ⅳ組最高，比對(duì)照組高24.00%。

3 討論

表5 KON-MOS對(duì)生長(zhǎng)獺兔血清免疫球蛋白和補(bǔ)體水平的影響（g/l）

3.1 KON-MOS對(duì)生長(zhǎng)獺兔營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率的影響

飼糧中養(yǎng)分在機(jī)體內(nèi)的利用情況可以由利用率反映，本試驗(yàn)中，試驗(yàn)組獺兔對(duì)DM、GE、CP、CF的表觀消化率均高于對(duì)照組，說明適量添加KON-MOS可以促進(jìn)生長(zhǎng)獺兔對(duì)部分營(yíng)養(yǎng)素的利用。這與KONMOS對(duì)各試驗(yàn)組生長(zhǎng)獺兔平均日增重和料重比的改善趨勢(shì)基本一致[10]。引起這一現(xiàn)象可能的原因是：①添加KON-MOS能改善腸道的內(nèi)環(huán)境，為營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收提供有利的環(huán)境。Jahanian等[11]報(bào)道，在蛋雞飼糧中添加甘露寡糖發(fā)現(xiàn)，對(duì)回腸細(xì)菌總數(shù)無顯著影響，但可以極顯著提高乳酸菌的含量，極顯著降低沙門氏菌的含量。②KON-MOS可以促進(jìn)腸道發(fā)育，改善腸道結(jié)構(gòu)形態(tài)，增強(qiáng)腸道機(jī)能，提高腸道對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的利用效率。這在Dostal等[12]、Pinheiro等[13]的研究中得到了驗(yàn)證。③KON-MOS可以提高腸道內(nèi)揮發(fā)性脂肪酸濃度[14]，降低腸道pH值。丁酸可被結(jié)腸優(yōu)先利用，低濃度的丁酸可以促進(jìn)腸上皮細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖[15]。同時(shí)，pH值的下降可以間接抑制一些酸敏感有害菌的增殖。④KON-MOS還可以提高畜禽的抗病抗應(yīng)激以及抗氧化能力，減少疾病以及外界因素對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)利用率的影響。Che等[16]報(bào)道，酵母甘露寡糖可以影響IL-10等抗炎性因子的分泌，從而對(duì)過度免疫和免疫應(yīng)激反應(yīng)進(jìn)行調(diào)節(jié)。武威等[4]在肉仔雞飼糧中添加50 mg/kg的甘露寡糖后發(fā)現(xiàn)，總抗氧化力和超氧化物歧化酶活性顯著提高，谷胱甘肽過氧化物酶活性也有提高的趨勢(shì)。KON-MOS通過對(duì)各個(gè)方面影響的綜合作用，一方面有益于保持營(yíng)養(yǎng)素吸收所需的良好環(huán)境，一方面增強(qiáng)了腸道對(duì)營(yíng)養(yǎng)素的吸收和利用能力，均有助于對(duì)營(yíng)養(yǎng)素的消化。

3.2 KON-MOS對(duì)生長(zhǎng)獺兔免疫器官指數(shù)的影響

胸腺和脾臟是獺兔重要的免疫器官，胸腺是中樞免疫器官，具有產(chǎn)生T淋巴細(xì)胞和分泌胸腺激素等作用，脾臟是外周免疫器官，是獺兔體液免疫和細(xì)胞免疫的中心。免疫器官指數(shù)與機(jī)體的免疫水平具有一定的正相關(guān)性，免疫器官指數(shù)的提高，一定程度上表示機(jī)體的免疫機(jī)能增強(qiáng)[17]。甘露寡糖具有促進(jìn)免疫器官發(fā)育的作用，Veronika等[5]報(bào)道甘露寡糖可以促進(jìn)免疫器官的發(fā)育及免疫機(jī)能的成熟，促進(jìn)漿細(xì)胞的形成，延長(zhǎng)免疫記憶時(shí)間，顯著提高機(jī)體的抗病和抗應(yīng)激能力。本試驗(yàn)中，各試驗(yàn)組胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)均高于對(duì)照組，說明適量添加KON-MOS可以促進(jìn)生長(zhǎng)獺兔胸腺和脾臟的發(fā)育。這與武威等[4]在肉仔雞、沈文康等[18]在小鼠飼糧中添加甘露寡糖等到的結(jié)果相近。營(yíng)養(yǎng)素是免疫器官生長(zhǎng)發(fā)育的物質(zhì)基礎(chǔ)，對(duì)營(yíng)養(yǎng)素消化率的改善有益于免疫器官的充分發(fā)育。

3.3 KON-MOS對(duì)生長(zhǎng)獺兔血清生化指標(biāo)影響

血液具有運(yùn)輸營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的功能，血液生化指標(biāo)可以一定程度上反映機(jī)體對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的利用情況。TCHO和TG是反映機(jī)體脂代謝情況的重要指標(biāo)[19]，CHO是機(jī)體生存生長(zhǎng)所必需的物質(zhì)，血液中CHO的含量與肌肉中的含量有正相關(guān)性，通常也可作為衡量肉品質(zhì)高低的指標(biāo)之一[20]。本試驗(yàn)中各試驗(yàn)組的TCHO和TG含量均低于對(duì)照組，說明KON-MOS有降低血清TCHO和TG的趨勢(shì)。這與宋永[21]在肉鴨、萬丹等[22]在黃羽肉雞飼糧中添加甘露寡糖得到的結(jié)果相近。引起這一現(xiàn)象的原因可能是，乳酸桿菌和雙歧桿菌對(duì)CHO有同化作用，而KON-MOS可以促進(jìn)乳酸桿菌和雙歧桿菌的增殖，從而使血清CHO的含量降低[23]。GLU的含量可以反映機(jī)體對(duì)碳水化合物的利用水平，本試驗(yàn)中各試驗(yàn)組血清GLU含量均高于對(duì)照組，說明碳水化合物的利用率有改善的趨勢(shì)。這與宋永在肉鴨飼糧中添加甘露寡糖得到的結(jié)果一致[21]，也與表2中CF、NDF和ADF消化率的變化趨勢(shì)相近。UREA、ALB和GLO是反映機(jī)體蛋白代謝水平的重要指標(biāo)，UREA是機(jī)體蛋白質(zhì)代謝的終產(chǎn)物，氨基酸平衡較好時(shí)，血液中UREA含量低。ALB是血漿中含量最多的蛋白，GLO與免疫力的強(qiáng)弱有關(guān)，ALB與GLO含量高時(shí)，蛋白質(zhì)的利用效率高，體組織沉積增強(qiáng)，機(jī)體的免疫機(jī)能提高。本試驗(yàn)中各試驗(yàn)組UREA均低于對(duì)照組，TP、ALB和GLO含量均高于對(duì)照組，說明KON-MOS對(duì)生長(zhǎng)獺兔蛋白質(zhì)的利用有改善的趨勢(shì)，這與于艷梅[24]在黃顙魚飼糧中添加KON-MOS得到的結(jié)果相近，也與表2中CP的消化率的變化趨勢(shì)相近。本試驗(yàn)中，血清指標(biāo)含量的變化趨勢(shì)與各營(yíng)養(yǎng)素的消化率變化趨勢(shì)基本對(duì)應(yīng)，共同反映了KON-MOS對(duì)部分營(yíng)養(yǎng)素消化率的提高作用。

3.4 KON-MOS對(duì)生長(zhǎng)獺兔血清免疫球蛋白和補(bǔ)體水平的影響

甘露寡糖具有增強(qiáng)免疫細(xì)胞和免疫因子的作用。Nochta等[25]研究發(fā)現(xiàn)，在斷奶仔豬的日糧中添加0.1%甘露寡糖，仔豬PHA淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率和吞噬細(xì)胞吞噬能力顯著提高；甘露寡糖具有免疫調(diào)節(jié)作用，能通過作用于腸絨毛免疫細(xì)胞表面蛋白質(zhì)受體或淋巴結(jié)和黏膜固有層記憶細(xì)胞上的信號(hào)系統(tǒng)進(jìn)行免疫調(diào)節(jié)。甘露寡糖還可以用作佐劑，通過與真核生物、細(xì)菌、病毒、毒素等外源性抗原結(jié)合，來減緩抗原的吸收，增加抗原的效價(jià)，提高機(jī)體細(xì)胞免疫和體液免疫水平[26]。王越[27]的研究表明，KON-MOS混合減毒HAV抗原進(jìn)行免疫，能夠有效的誘導(dǎo)抗一HAV IgG的產(chǎn)生，顯著增強(qiáng)HAV抗原誘導(dǎo)的特異性體液免疫效果。IgG是畜禽免疫球蛋白的主要成分(約占總量的60%～80%)，在機(jī)體中發(fā)揮免疫保護(hù)作用[28]。初次體液免疫應(yīng)答過程中就有IgM的產(chǎn)生，其是近期感染的標(biāo)志[28]。本試驗(yàn)中，各試驗(yàn)組IgG和IgM均高于對(duì)照組，說明KON-MOS對(duì)生長(zhǎng)獺兔的體液免疫有一定的增強(qiáng)作用。這與金亞東等[29]在犢牛、高林[30]在肉雞飼糧中添加甘露寡糖得到的結(jié)果相近；甘露寡糖還可以刺激肝臟分泌甘露結(jié)合蛋白，甘露結(jié)合蛋白可以通過識(shí)別結(jié)合甘露糖，活化補(bǔ)體，從而發(fā)揮調(diào)理和天然抗免疫作用[31]。補(bǔ)體C4參與補(bǔ)體的經(jīng)典激活途徑，其可以被C1s水解為C4a和C4b，它們?cè)诖龠M(jìn)吞噬，活化補(bǔ)體等多方面發(fā)揮重要作用。本試驗(yàn)結(jié)果表明，各試驗(yàn)組補(bǔ)體C4水平均高于對(duì)照組，說明各試驗(yàn)組在活化補(bǔ)體，增強(qiáng)吞噬作用等方面有一定的改善。免疫器官和免疫活性因子是免疫系統(tǒng)的重要組成部分，免疫器官的充分發(fā)育和免疫活性因子水平的提升有助于機(jī)體抗病能力的提高。

4 結(jié)論

① KON-MOS可以提高生長(zhǎng)獺兔對(duì)DM、GE、CP和CF等營(yíng)養(yǎng)素的表觀消化率。

②KON-MOS可以通過促進(jìn)胸腺指數(shù)和脾臟指的提升以及提高血清中IgG、IgM和補(bǔ)體C4的水平，提高生長(zhǎng)獺兔抗病能力，改善健康水平。