■ 周昭希 楊 柳 高立杰 高 明 劉玉芝*

(1.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，河北保定071000；2.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，河北保定071000)

中草藥在我國(guó)應(yīng)用歷史悠久，其療效持久、作用廣泛，是預(yù)防治療疾病的理想藥物。隨著人們對(duì)綠色無(wú)污染肉、蛋、奶需求量的日益增加，中草藥也因其具有純天然、無(wú)抗藥性、無(wú)藥物殘留等優(yōu)點(diǎn)成為國(guó)內(nèi)外畜禽養(yǎng)殖業(yè)疾病防治的研究熱點(diǎn)[1]。盡管有關(guān)中草藥在禽類中的應(yīng)用試驗(yàn)屢見(jiàn)報(bào)道，但在家禽養(yǎng)殖業(yè)中仍有許多中草藥有待被開(kāi)發(fā)利用。菟絲子（Cuscuta chi?nensis Lam.）又名吐絲子，為旋花科植物菟絲子的干燥成熟種子，具有補(bǔ)益肝腎、益精壯陽(yáng)、明目、止瀉之功效[2]。菟絲子主要含有甾醇、黃酮、多糖等成分，另外還有氨基酸、鐵、銅、錳等微量元素，其中主要藥用成分是黃酮類和多糖類化合物[3]。菟絲子的藥理作用主要表現(xiàn)在免疫、抗氧化和抗衰老、營(yíng)養(yǎng)神經(jīng)以及保肝等方面[4-5]。因此菟絲子在家禽養(yǎng)殖業(yè)中具有很高的開(kāi)發(fā)利用價(jià)值，而目前少見(jiàn)或未見(jiàn)菟絲子單方對(duì)肉雞免疫和抗氧化指標(biāo)的專門研究。本試驗(yàn)通過(guò)在肉雞飼料中添加菟絲子飼喂肉雞，分析菟絲子對(duì)肉雞免疫和抗氧化指標(biāo)的影響，旨在為菟絲子在家禽養(yǎng)殖業(yè)的應(yīng)用提供新的參考。

1 材料

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

180只1日齡健康、體重相近的愛(ài)拔益加肉仔雞（保定市清苑養(yǎng)雞場(chǎng)提供）。

1.2 藥品

菟絲子購(gòu)自保定市藥材公司。

1.3 主要試劑

試驗(yàn)所用試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

2 方法

2.1 試驗(yàn)動(dòng)物分組與給藥

將菟絲子用酒浸72 h，將酒炙的和未酒炙的菟絲子分別炒干，40目粉碎備用[6]。選用1日齡健康、體重相近的愛(ài)拔益加肉仔雞180只，隨機(jī)分為3組，每組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10只雞。對(duì)照組（DZ組）：飼喂基礎(chǔ)飼糧（見(jiàn)表1）；菟絲子試驗(yàn)組（TS組）：飼喂基礎(chǔ)飼糧+2%菟絲子；酒炙菟絲子試驗(yàn)組（JTS組）：飼喂基礎(chǔ)飼糧+2%酒炙菟絲子。試驗(yàn)雞進(jìn)行常規(guī)飼養(yǎng)管理，自由采食和飲水。試驗(yàn)期為42 d。

2.2 樣品的采集與制備

在第21 d和第42 d，每個(gè)重復(fù)分別隨機(jī)抽取1只雞，稱重后，頸靜脈采血，一部分血液用肝素鈉抗凝分離血漿，另一部分不抗凝，靜置過(guò)夜后離心得血清，血清和血漿收集在EP管中置于-20℃冰箱保存，分別用于測(cè)定免疫指標(biāo)和抗氧化指標(biāo)。將雞只放血致死解剖，分別迅速摘除脾、胸腺、法氏囊，去除附著組織分別稱鮮重，計(jì)算免疫器官指數(shù)；再胸肌取樣，放于4℃冰箱冷藏，24 h后，研磨再用冷生理鹽水稀釋制成10%的組織勻漿液，用于測(cè)定胸肌中抗氧化指標(biāo)。

2.3 測(cè)定指標(biāo)與方法

2.3.1 血清免疫指標(biāo)的測(cè)定

血清球蛋白（GLB）含量用總蛋白含量和白蛋白含量之差計(jì)算；總蛋白（TP）含量用雙縮脲法測(cè)定；白蛋白（ALB）含量用溴甲酚綠比色法測(cè)定；血清溶菌酶（LZM）活性用比濁法測(cè)定；血清與應(yīng)用菌液反應(yīng)后，根據(jù)透光度計(jì)算溶菌酶含量。

2.3.2 免疫器官指數(shù)的測(cè)定

免疫器官指數(shù)（%）=器官重量/活體體重×100

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

2.3.3 血漿和胸肌抗氧化指標(biāo)的測(cè)定

血漿和胸肌中總超氧化物歧化酶（T-SOD）活性用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定；谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSHPx）活性以催化谷胱甘肽（GSH）的反應(yīng)速度來(lái)表示；胸肌勻漿蛋白質(zhì)測(cè)定采用考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定；丙二醛（MDA）含量用硫代巴比妥酸比色法測(cè)定。上述試劑盒均購(gòu)自于南京建成生物工程研究所，嚴(yán)格按說(shuō)明書進(jìn)行操作。

2.4 數(shù)據(jù)分析

采用SPSS 17.0軟件中One Way ANOVA對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，試驗(yàn)數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，差異顯著性用LSD法進(jìn)行多重比較，P＜0.05為差異顯著水平。

3 結(jié)果與分析

3.1 菟絲子對(duì)肉仔雞血清免疫指標(biāo)的影響(見(jiàn)表2)

由表2可知，在21日齡，酒炙菟絲子組肉仔雞血清LZM活性顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），在42日齡，酒炙菟絲子組和菟絲子組血清TP和GLB水平均顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）。

3.2 菟絲子對(duì)肉仔雞免疫器官指數(shù)的影響(見(jiàn)表3)

表2 菟絲子對(duì)肉仔雞血清免疫指標(biāo)的影響

表3 菟絲子對(duì)肉仔雞免疫器官指數(shù)的影響（%）

由表3可知，在21日齡，酒炙菟絲子組肉仔雞胸腺指數(shù)顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）和菟絲子組（P＜0.05）。在42日齡，酒炙菟絲子組肉仔雞脾臟指數(shù)顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）。

3.3 菟絲子對(duì)肉仔雞抗氧化指標(biāo)的影響（見(jiàn)表4）

由表4可知，在42日齡，酒炙菟絲子組和菟絲子組的肉仔雞血漿GSH-Px活性都顯著升高（P＜0.05）；胸肌MDA含量都顯著低于對(duì)照組（P＜0.05）。

表4 菟絲子對(duì)肉仔雞抗氧化指標(biāo)的影響

4 討論

4.1 菟絲子對(duì)肉仔雞免疫指標(biāo)的影響

免疫球蛋白是血清中GLB的主要組成成分，血清中GLB含量反映了機(jī)體免疫力的高低。LZM是廣泛存在于生物體液、血清和巨噬細(xì)胞中的一種水解酶，在免疫中發(fā)揮重要作用，其活性體現(xiàn)了機(jī)體細(xì)胞免疫和機(jī)體抗感染的能力[7]。本試驗(yàn)中，和對(duì)照組相比，酒炙菟絲子顯著提高了21日齡肉仔雞的血清LZM活性和42日齡的血清GLB含量。徐何方等[8]試驗(yàn)結(jié)果顯示，菟絲子乙醇提取物能提高大鼠的血清免疫球蛋白水平，而張慶平等[9]試驗(yàn)證實(shí)菟絲子的乙醇提取物提高了小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬能力,說(shuō)明菟絲子是一種能夠增強(qiáng)體液免疫及細(xì)胞免疫的免疫增強(qiáng)劑。脾臟、胸腺和法氏囊是禽類的主要免疫器官,參與機(jī)體的體液免疫和細(xì)胞免疫,其指數(shù)是評(píng)價(jià)家禽免疫力的重要指標(biāo)。本試驗(yàn)中，和對(duì)照組相比，酒炙菟絲子顯著提高了21日齡肉仔雞的胸腺指數(shù)和42日齡的脾臟指數(shù)，說(shuō)明酒炙菟絲子促進(jìn)了胸腺和脾臟的發(fā)育，能提高機(jī)體的細(xì)胞免疫機(jī)能。與菟絲子組相比，酒炙菟絲子組21日齡肉仔雞胸腺指數(shù)顯著升高，而其他指標(biāo)均無(wú)顯著差異。說(shuō)明酒炙菟絲子增強(qiáng)機(jī)體免疫力的作用比菟絲子更好。本試驗(yàn)中酒炙菟絲子和菟絲子都提高了42日齡肉雞血清TP含量，說(shuō)明菟絲子可以促進(jìn)肉雞體內(nèi)蛋白質(zhì)的沉積作用。菟絲子對(duì)肉仔雞的免疫增強(qiáng)作用應(yīng)該主要和菟絲子中含有的大量黃酮類物質(zhì)有關(guān)。黃酮類化合物因?yàn)榻Y(jié)構(gòu)類型多、作用機(jī)理復(fù)雜，其免疫調(diào)節(jié)作用及其機(jī)制的研究還有待新的試驗(yàn)逐漸被揭示闡明[10]。

4.2 菟絲子對(duì)肉仔雞抗氧化指標(biāo)的影響

抗氧化酶系統(tǒng)的功能是清除物質(zhì)代謝過(guò)程中產(chǎn)生的活性中間產(chǎn)物，特別是清除自由基，保護(hù)細(xì)胞免受損傷。SOD是體內(nèi)清除自由基的關(guān)鍵物質(zhì)，能對(duì)抗自由基和修復(fù)受損細(xì)胞。GSH-Px是一種重要的催化過(guò)氧化氫分解的酶，催化GSH變?yōu)镚SSG的同時(shí)，使有毒的過(guò)氧化氰還原成無(wú)毒的化合物，從而保護(hù)細(xì)胞不受損害。機(jī)體內(nèi)MDA的含量是反映機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化程度高低的指標(biāo)。檢測(cè)SOD、GSH-Px活性和MDA的含量可以反映機(jī)體抗氧化的能力及細(xì)胞受損的程度。張培全等[11]試驗(yàn)證明菟絲子的乙酸乙酯、正丁醇提取物以及90%醇沉多糖能清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基（DPPH·）和超氧陰離子自由基（O2-·），且菟絲子乙酸乙酯、正丁醇提取物比GSSG清除自由基的能力還強(qiáng)。本試驗(yàn)中，酒炙菟絲子和菟絲子都能顯著升高42日齡肉仔雞的血漿GSH-Px活性而降低胸肌MDA含量，說(shuō)明菟絲子是天然抗氧化劑的良好來(lái)源。但本試驗(yàn)血漿和胸肌T-SOD活性升高都未達(dá)顯著水平，這也許和試驗(yàn)所用菟絲子劑量有關(guān)。本試驗(yàn)設(shè)計(jì)中由于酒炙菟絲子添加劑量單一，因此不能確定2%是否為最佳劑量，關(guān)于酒炙菟絲子的適宜添加劑量還需要后續(xù)新的試驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證，而菟絲子活性成分抗氧化作用的機(jī)制有待進(jìn)一步研究[12]。

4.3 菟絲子酒炙的作用

菟絲子入藥有生品和炮制品之分，其生品質(zhì)地較硬比較難以粉碎，且其中的有效化學(xué)成分難以溶出，因此臨床上宜將菟絲子炮制后再入藥。菟絲子炮制歷史悠久，方法有多種，其中酒制又分為酒浸、酒煮、酒蒸和酒炙等[13]。將凈選或切制后的藥物，加入一定量的液體輔料拌炒的炮制方法稱炙法?，F(xiàn)代菟絲子炮制以清炒、鹽炙、酒炙、制餅為主。中藥經(jīng)酒制，不但有助于有效成分溶出，增加療效、還能引藥上行、增強(qiáng)活血通絡(luò)作用、改變藥物性味、矯臭去腥以及降低藥物的毒副作用等，如生黃連中小檗堿的溶出率為58.17%,經(jīng)酒制后，溶出率為85%，說(shuō)明酒制促進(jìn)了黃連中小檗堿在煎液中的溶出率[14]。菟絲子除了含有氨基酸、鐵、銅、錳等微量元素外，其主要含有甾醇、黃酮、多糖類成分，主要藥用成分是黃酮類和多糖類化合物。肖嵐等[15]報(bào)道，菟絲子經(jīng)清炒、鹽制、酒制后，其中的5種黃酮類物質(zhì)包括槲皮素、金絲桃苷、山奈酚、綠原酸、異鼠李素含量均比生品菟絲子高，且酒制菟絲子中，金絲桃苷含量比清炒菟絲子增加3.47%；比鹽制菟絲子增加10.25%，比生品菟絲子增加37.78%[15]。試驗(yàn)證實(shí)，酒炙菟絲子多糖含量是清炒菟絲子的1.62倍，是生菟絲子的1.98倍，說(shuō)明酒炙能顯著提高菟絲子中多糖的含量[16]，而多糖具有提高免疫力和抗氧化抗衰老作用[17]，本試驗(yàn)將酒浸菟絲子和生菟絲子對(duì)比，試驗(yàn)結(jié)果表明酒炙菟絲子增強(qiáng)機(jī)體免疫力的作用比菟絲子更好，與肖嵐等[15]的試驗(yàn)結(jié)果相符合。而菟絲子炮制作用機(jī)理還有待進(jìn)一步研究。

5 結(jié)論

菟絲子能提高肉雞的免疫力和抗氧化能力并促進(jìn)肉雞蛋白質(zhì)沉積，酒炙菟絲子效果更好。