張軍麗，涂 杜，彭新宇，黃 婷，袁明貴，徐志宏*

（1.廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院動(dòng)物衛(wèi)生研究所，廣東 廣州 510000；2.廣東省畜禽疫病防治研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510000；3.廣東省獸醫(yī)公共衛(wèi)生公共實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510000）

腸道微生物是被忽視的“微生物器官”[1]，越來(lái)越多的研究發(fā)現(xiàn)，腸道微生態(tài)失調(diào)與人類的健康有著或多或少的關(guān)系，除了與人體的消化有關(guān)之外，還與腸道疾病有著聯(lián)系[2-5]。

腸道菌群存在著一種平衡，一旦這種平衡被疾病打破之后，可以用微生態(tài)制劑治療恢復(fù)腸道菌群的平衡，或者使用藥物輔助治療。益生菌不僅可提高機(jī)體免疫力[6]，且能產(chǎn)生確切具有健康功效的次級(jí)代謝產(chǎn)物，從而改善宿主微生態(tài)的平衡、發(fā)揮有益作用，還可以維持腸道內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)、拮抗腸道致病菌、重建失調(diào)的腸道菌群、遏制毒性因子對(duì)腸道的損害、保證腸道營(yíng)養(yǎng)代謝等[7-10]，中藥與腸道菌群相互作用的研究已經(jīng)起步，并越來(lái)越得到眾多中醫(yī)藥學(xué)者的關(guān)注。中藥可直接調(diào)整腸道菌群結(jié)構(gòu)進(jìn)而影響健康，同時(shí)腸道菌群也會(huì)通過(guò)影響口服中藥在體內(nèi)的吸收代謝轉(zhuǎn)化等而改變中藥療效的發(fā)揮[11-13]。有研究發(fā)現(xiàn)，多酚以及其被腸道菌群代謝的產(chǎn)物，能選擇性調(diào)節(jié)腸道中易感微生物的生長(zhǎng)，選擇性促進(jìn)有益菌群（如乳酸菌）生長(zhǎng)，抑制有害菌的增殖，即引發(fā)腸道微生態(tài)的改變，這種改變對(duì)宿主產(chǎn)生重要影響[14]。

腸道中微生物的變化與糞便菌群的構(gòu)成密切相關(guān)，因此對(duì)糞便菌群多樣性的研究可以幫助人們深入了解腸道菌群的變化[15]。本研究的目的在于灌胃蓖麻油來(lái)建立小鼠腹瀉的模型[16]，使腸道菌群失調(diào)，通過(guò)聯(lián)合使用益生菌和荔枝多酚，達(dá)到既能增強(qiáng)免疫力，又能促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)吸收的雙重效果，進(jìn)而為益生菌和中藥有效成分的聯(lián)合應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物、材料與試劑

SPF級(jí)昆明種小鼠，雌雄各半，購(gòu)自北京華阜康生物科技股份有限公司，許可證號(hào)：SCXK（京）2014-0004。

嗜酸乳桿菌（Lactobacillus acidophilus）GIMCC GIM1.730、丁酸梭菌（Clostridium butyricum）GIMCC GIM1.676 廣東省微生物研究所微生物菌種保藏中心；MRS培養(yǎng)基、梭菌增菌培養(yǎng)基 廣東環(huán)凱微生物科技有限公司；荔枝多酚（荔枝皮提取，純度為95%） 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院實(shí)驗(yàn)室；蓖麻油 湖北科田藥業(yè)有限公司；洛哌丁胺 西安楊森制藥有限公司；聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）試劑 寶生物工程（大連）有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

LRH-150F型系列生化培養(yǎng)箱 上海一恒科學(xué)儀器有限公司；5804R型低溫高速離心機(jī) 德國(guó)Eppendorf公司；變性梯度凝膠電泳（denaturing gradient gel electrophoresis，DGGE）套裝、凝膠成像儀、智能梯度PCR儀 美國(guó)Bio-Rad公司；CKX31倒置顯微鏡 日本Olympus公司；RM2255切片機(jī) 德國(guó)Leica公司。

1.3 方法

1.3.1 動(dòng)物飼養(yǎng)條件

小鼠養(yǎng)于屏障環(huán)境中，雌雄分開(kāi)，正壓通風(fēng)，空調(diào)調(diào)節(jié)溫度為（26±1）℃，光照周期12 h明12 h暗，小鼠自由飲食與飲水，適應(yīng)性飼養(yǎng)一周。

1.3.2 菌種培養(yǎng)

嗜酸乳桿菌活化后，接種量為5%于MRS培養(yǎng)基中，培養(yǎng)時(shí)間為12 h，丁酸梭菌活化后接種量為5%于梭菌增菌培養(yǎng)基中，培養(yǎng)時(shí)間為24 h，溫度均為37 ℃。在上述培養(yǎng)條件下均達(dá)到穩(wěn)定期，分別采用MRS培養(yǎng)基、梭菌增殖培養(yǎng)基3 次重復(fù)進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)，嗜酸乳桿菌濃度近似可達(dá)1010～1011CFU/mL，丁酸梭菌濃度近似可達(dá)105～106CFU/mL。按時(shí)培養(yǎng)后直接灌胃小鼠。

1.3.3 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)分組與處理

本實(shí)驗(yàn)選用96 只體質(zhì)量為18～22 g的SPF級(jí)昆明小鼠，雌雄各半，隨機(jī)分為8 個(gè)處理組：正常組、模型組、洛哌丁胺組、嗜酸乳桿菌組、丁酸梭菌組、荔枝多酚組、復(fù)合菌、復(fù)合菌-荔枝多酚組，實(shí)驗(yàn)周期為14 d。每天各組定時(shí)按10 mL/kg體質(zhì)量灌胃藥物或無(wú)菌去離子水，其中正常組、模型組給予無(wú)菌去離子水，洛哌丁胺組按3 mg/kg灌胃；荔枝多酚組按 300 mg/kg灌胃；嗜酸乳桿菌組灌胃濃度1010～1011CFU/mL的嗜酸乳桿菌培養(yǎng)液；丁酸梭菌組灌胃濃度105～106CFU/mL丁酸梭菌培養(yǎng)液；復(fù)合菌組按上述丁酸梭菌和嗜酸乳桿菌菌液以體積比1∶1混合灌胃；復(fù)合菌-荔枝多酚組：將上述丁酸梭菌和嗜酸乳桿菌溶液按體積比1∶1混合灌胃，每天下午3：00復(fù)合菌-荔枝多酚組再按10 mL/kg的體質(zhì)量灌胃300 mg/kg的荔枝多酚，其他組灌胃等劑量的無(wú)菌去離子水。第10 天每只按0.5 mL灌胃蓖麻油，之后每天仍按時(shí)喂藥。第14天采集小腸組織，無(wú)菌采集糞便后，按照實(shí)驗(yàn)動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn)處死小鼠。

1.3.4 樣品的采集與處理

于實(shí)驗(yàn)第14天后，將實(shí)驗(yàn)小鼠頸椎脫臼處死，剖腹，無(wú)菌操作，收集每組4 只小鼠的新鮮直腸糞便樣本，置于-80 ℃下保存?zhèn)溆谩Ｔ俜謩e采取十二指腸（幽門(mén)后2～3 cm處）、空腸中段（幽門(mén)后約25 cm處）和回腸（離回盲口3 cm處）。每段腸管取2～3 cm，迅速用新配制的生理鹽水洗去腸內(nèi)容物后，放在體積分?jǐn)?shù)10%福爾馬林溶液中固定。按常規(guī)方法脫水、透明、石蠟包埋，連續(xù)橫斷切片，切片厚6 μm。每隔10 張切片取1 張，常規(guī)蘇木精-伊紅（hematoxylin-eosin，HE）染色。倒置顯微鏡20 倍物鏡下仔細(xì)觀察和比較小腸黏膜形態(tài)和結(jié)構(gòu)的變化。選取5 張切片，每張切片取5 根最長(zhǎng)且走向平直伸展良好的絨毛，應(yīng)用明美數(shù)碼成像處理軟件，測(cè)量其絨毛長(zhǎng)度（從絨毛基底部到絨毛頂端的距離）、最深的隱窩深度（隱窩基底部到絨毛基底部的距離）。計(jì)算絨毛長(zhǎng)度與隱窩深度的比值（V/C）。

1.3.5 DNA的提取與PCR

采用QIAamp DNA Stool Mini Kit糞便提取試劑盒，提取糞便總DNA對(duì)細(xì)菌的16S rDNA的V3區(qū)片段進(jìn)行PCR[17]，PCR引物為帶有GC夾子的上下游引物（357-F：5’-GCCGCCCGCCGCGCGCGGCGGGCGGGGCGGG GGCACGGGGGGCCTACGGGAGGCAGCAG-3’；518-R：5’-ATTACCGCGGCTGCTGG-3’）。PCR體系為：DNA模板2 μL、5×buffer 8 μL、dNTPs 1 μL、上游引物（10 mmol/L）1 μL、下游引物（10 mmol/L）1 μL，Phusion超保真DNA聚合酶0.8 U，加無(wú)菌水至40 μL（以上均在冰上操作）。PCR程序：94 ℃預(yù)變性2 min，94 ℃變性30 s，56 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，25 個(gè)循環(huán)，最后72 ℃延伸5 min反應(yīng)結(jié)束，取3 μL于質(zhì)量分?jǐn)?shù)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，結(jié)果顯示擴(kuò)增條帶唯一，長(zhǎng)度在250 bp左右。

對(duì)細(xì)菌16S rDNA的V3可變區(qū)的擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行DGGE分析，采用質(zhì)量分?jǐn)?shù)8%聚丙烯酰胺凝膠，其中尿素質(zhì)量分?jǐn)?shù)梯度為48%～65%。電泳采用1×TAE緩沖液，200 V電壓下預(yù)電泳10 min，隨后在70 V的固定電壓下電泳15.5 h，電泳結(jié)束后，置于磁鋼容器中，加入400 mL BioLinker DNA Red染色液染色40 min，置于凝膠成像系統(tǒng)中觀察拍照。

將DGGE圖譜中清晰的優(yōu)勢(shì)條帶標(biāo)記后，在暗室中，紫外激發(fā)條件下，用無(wú)菌手術(shù)刀割膠回收，置于已標(biāo)記的200 μL PCR管中，送上海生工生物公司進(jìn)行測(cè)序。將測(cè)序結(jié)果在GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行BLAST比對(duì)分析，找到親緣關(guān)系最近的已知菌屬。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

用Quantity One 4.6.2軟件進(jìn)行菌群相似性和多樣性分析，包括豐富度指數(shù)（richness，S）（即DGGE圖譜每條泳道的條帶數(shù)）和均勻度指數(shù)（evenness，E），微生物區(qū)系多樣性指數(shù)即Shannon指數(shù)（H’），按照如下公式進(jìn)行計(jì)算[18]。

式中：H’為Shannon指數(shù)，H’值越大，說(shuō)明群落多樣性越高；S為DGGE圖譜中條帶數(shù)量，S值越大，說(shuō)明物種多樣性越高；Pi為第i條帶灰度占該樣品總灰度的比率。

微生物區(qū)系相似性指數(shù)采用NTSYS 2.10軟件進(jìn)行聚類分析。多組間比較采用單因素方差分析（One-way ANOVA），兩兩比較采用Duncan法，使用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件分析。結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，P＜0.05為差異有顯著性意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 復(fù)合菌-荔枝多酚對(duì)腸道組織結(jié)構(gòu)的影響

2.1.1 復(fù)合菌-荔枝多酚對(duì)小鼠十二指腸結(jié)構(gòu)的影響

表1 復(fù)合菌-荔枝多酚對(duì)小鼠十二指腸結(jié)構(gòu)的影響Table1 Effect of composite probiotics-litchi polyphenol on duodenum morphology of mice

由表1可知，除了洛哌丁胺組其他組小鼠十二指腸的絨毛長(zhǎng)度均大于模型組，差異顯著（P＜0.05），其中復(fù)合菌組與正常組無(wú)顯著差異（P＞0.05）；嗜酸乳桿菌組隱窩深度顯著低于模型組（P＜0.05），與正常組無(wú)顯著差異，其他組與模型組差異不顯著（P＞0.05）；V/C值表現(xiàn)為嗜酸乳桿菌組和復(fù)合菌組均顯著大于模型組（P＜0.05），其他組間差異不顯著（P＞0.05）。可以看出腹瀉小鼠灌胃益生菌或荔枝多酚后，能明顯提高小鼠十二指腸的絨毛長(zhǎng)度和V/C值，其中嗜酸乳桿菌和復(fù)合菌效果最佳。

圖1 十二指腸組織病理學(xué)變化（×200）Fig.1 Histopathological change of duodenum (× 200)

由圖1可知，正常組十二指腸腸壁層次清晰、絨毛結(jié)構(gòu)完整、排列緊密，嗜酸乳桿菌組和復(fù)合菌組絨毛修長(zhǎng)、豐滿，荔枝多酚組和復(fù)合菌-荔枝多酚組絨毛纖細(xì)，可以明顯看出嗜酸乳桿菌組和復(fù)合菌組對(duì)蓖麻油腹瀉小鼠十二指腸的影響最大。

2.1.2 復(fù)合菌-荔枝多酚對(duì)小鼠空腸結(jié)構(gòu)的影響

表2 復(fù)合菌-荔枝多酚對(duì)小鼠空腸結(jié)構(gòu)的影響Table2 Effect of composite probiotics-litchi polyphenol on jejunum morphology of mice

由表2可知，洛哌丁胺組小鼠空腸絨毛長(zhǎng)度小于模型組，差異顯著（P＜0.05），其他組間差異不顯著（P＞0.05），且均顯著低于正常組（P＜0.05）。6 個(gè)處理組小鼠空腸的隱窩深度均顯著低于模型組（P＜0.05），而且組間差異不顯著（P＞0.05）。V/C值表現(xiàn)為嗜酸乳桿菌組、丁酸梭菌組、復(fù)合菌組和復(fù)合菌多酚組均顯著大于模型組（P＜0.05），丁酸梭菌組與正常組無(wú)顯著差異（P＞0.05）?？梢钥闯龈篂a小鼠灌胃復(fù)合菌-荔枝多酚后，能明顯提高小鼠十二指腸的絨毛長(zhǎng)度和V/C值。

圖2 空腸組織病理學(xué)變化（×200）Fig.2 Histopathological change of jejunum (× 200)

由圖2可知，模型組和洛哌丁胺組絨毛寬且短小，嗜酸乳桿菌組、復(fù)合菌組和復(fù)合菌-荔枝多酚組絨毛修長(zhǎng)、整齊，表明嗜酸乳桿菌組、丁酸梭菌組、復(fù)合菌組和復(fù)合菌-荔枝多酚組有助于腹瀉小鼠空腸腸黏膜損傷修復(fù)。2.1.3 復(fù)合菌-荔枝多酚對(duì)小鼠回腸結(jié)構(gòu)的影響

表3 復(fù)合菌-荔枝多酚對(duì)小鼠回腸結(jié)構(gòu)的影響Table3 Effect of composite probiotics-litchi polyphenol on ileum morphology of mice

從表3可以看出，嗜酸乳桿菌組和復(fù)合菌-荔枝多酚組小鼠回腸絨毛長(zhǎng)度大于模型組，差異顯著（P＜0.05），與正常組無(wú)顯著差異（P＞0.05）。所有組小鼠隱窩深度與模型組均差異不顯著（P＞0.05）。V/C值表現(xiàn)為嗜酸乳桿菌組、復(fù)合菌組和復(fù)合菌-荔枝多酚組均顯著大于模型組（P＜0.05），與正常組無(wú)顯著差異（P＞0.05），表明腹瀉小鼠灌胃益生菌或荔枝多酚后，能明顯提高小鼠十二指腸的絨毛長(zhǎng)度和V/C值，其中嗜酸乳桿菌和復(fù)合菌效果最佳。

由圖3可知，模型組和洛哌丁胺組絨毛比較短小，嗜酸乳桿菌組、復(fù)合菌組和復(fù)合菌-荔枝多酚組絨毛修長(zhǎng)、整齊，可以看出嗜酸乳桿菌組、復(fù)合菌組、復(fù)合菌多酚組對(duì)蓖麻油腹瀉小鼠回腸腸黏膜損傷有修復(fù)作用。

圖3 小鼠回腸組織病理學(xué)變化（×200）Fig.3 Histopathological change of ileum (× 200)

2.2 復(fù)合菌-荔枝多酚對(duì)小鼠腸道菌群的影響

通過(guò)PCR-DGGE對(duì)小鼠糞便腸道菌群進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)DGGE圖譜上所顯示的優(yōu)勢(shì)條帶進(jìn)行回收，送生工生物工程（上海）股份有限公司克隆并且進(jìn)行測(cè)序，最后對(duì)測(cè)序的結(jié)果進(jìn)行BLAST比對(duì)、NTSYS 2.10相似性聚類分析及圖譜多樣性指數(shù)分析。

圖4 小鼠糞便細(xì)菌微生物區(qū)系16S rDNA V3區(qū)DGGE圖譜Fig.4 DGGE profiles obtained with universal primers for V3 of 16S rDNA of fecal microbiota

如圖4所示，各組有個(gè)別條帶發(fā)生了輕微的變化，如條帶2、6、8是灌胃復(fù)合菌-荔枝多酚后新出現(xiàn)的，條帶3是灌胃復(fù)合菌后新出現(xiàn)的，條帶10是灌胃丁酸梭菌、嗜酸乳桿菌后新出現(xiàn)的，條帶9是嗜酸乳桿菌組和丁酸梭菌組的優(yōu)勢(shì)菌種，而條帶1、4、7、11、12、13是所有組的優(yōu)勢(shì)菌種。

為進(jìn)一步了解各組對(duì)小鼠結(jié)腸中微生物群落的影響，對(duì)DGGE圖譜中相關(guān)條帶進(jìn)行了測(cè)序分析。由表4可知，其中，條帶2鑒定為膽型螺旋桿菌（Helicobacter bilis），條帶6、8鑒定為梭狀芽孢桿菌（[Clostridium]polysaccharolyticum）、條帶3鑒定為[真細(xì)菌]哈利菌（[Eubacterium] hallii），條帶10鑒定為乳酸菌（Lactobacillus taiwanensis），條帶9鑒定為擬桿菌（Bacteroides chinchillae），條帶1、4、7、11、12、13分別鑒定為擬桿菌（Bacteroides chinchillae）、艾克曼菌（Akkermansia muciniphila）、洛氏普雷沃菌（Prevotella loescheii）、長(zhǎng)雙歧桿菌（Stomatobaculum longum）、Alistipes senegalensis、費(fèi)格森埃希菌（Escherichia fergusonii）。

表4 DGGE圖譜中特異條帶的測(cè)序比對(duì)結(jié)果Table4 Sequence alignment of specific bands in DGGE profile

圖5 小鼠糞便微生物系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)Fig.5 Phylogenetic tree of mouse fecal microorganisms

采用NTSYS 2.10軟件對(duì)DGGE圖進(jìn)行數(shù)字化和聚類分析，聚類分析的結(jié)果如圖5所示。發(fā)現(xiàn)正常組和其他各組形成了一定程度的分界，樹(shù)狀圖明顯分成了兩大簇，其中正常組全部聚在了一簇，組內(nèi)比較集中，個(gè)體差異不大；相似性系數(shù)大于75%，而其他組聚成另外一簇，相似性系數(shù)都大于73%，表明蓖麻油腹瀉后的小鼠的腸道菌群結(jié)構(gòu)組成有了明顯的變化。給藥各組內(nèi)比較分散，個(gè)體差異比較大。其中復(fù)合菌-荔枝多酚組比較分散，沒(méi)有形成一簇，說(shuō)明個(gè)體差異比較大。

由表5可以看出，嗜酸乳桿菌組、復(fù)合菌組和復(fù)合菌-荔枝多酚組能增加蓖麻油腹瀉后小鼠腸道菌群的豐富度，均顯著大于模型組和正常組（P＜0.05），說(shuō)明嗜酸乳桿菌、復(fù)合菌和復(fù)合菌-荔枝多酚能增加菌群的數(shù)量；復(fù)合菌組和復(fù)合菌-荔枝多酚組的菌群均勻度顯著大于模型組和正常組（P＜0.05），從中可以看出灌胃復(fù)合菌、復(fù)合菌-荔枝多酚的小鼠腸道菌群的微生態(tài)穩(wěn)定性有所增強(qiáng)，復(fù)合菌組的Shannon指數(shù)顯著大于模型組和正常組（P＜0.05），其他組之間差異并不顯著，說(shuō)明小鼠腸道中的菌群多樣性增大，群落的復(fù)雜程度增高。丁酸梭菌組和荔枝多酚組的豐富度指數(shù)、均勻度指數(shù)、Shannon指數(shù)與模型組和正常組均差異不顯著（P＞0.05），說(shuō)明小鼠腸道中的菌群豐富度、多樣性、復(fù)雜程度增高是嗜酸乳桿菌在起主導(dǎo)作用。

表5 小鼠腸道菌群DGGE圖譜多樣性指數(shù)分析Table5 Diversity indices based on DGGE profile of intestinal microflora in mice

3 討 論

小腸絨毛的發(fā)育狀況決定了營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收和利用的情況，因?yàn)槟c道內(nèi)小腸吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的主要部位，絨毛高度越高，成熟的細(xì)胞就越多，吸收能力就會(huì)越強(qiáng)，反之，吸收能力就越差[19-21]，V/C值可以綜合反映小腸營(yíng)養(yǎng)吸收的狀況，絨毛長(zhǎng)度增加，隱窩深度降低，V/C值就會(huì)增大，營(yíng)養(yǎng)吸收的能力就會(huì)增加[23]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，嗜酸乳桿菌和復(fù)合菌能提高十二指腸、空腸的V/C值，丁酸梭菌能增加空腸的V/C值，復(fù)合菌-荔枝多酚能增加空腸和回腸的V/C值。已有研究發(fā)現(xiàn)益生菌（嗜酸乳桿菌和鼠李糖乳桿菌）可以在小鼠的腸道內(nèi)壁黏附、定植，產(chǎn)生有益物質(zhì)改善腸道菌群，還能夠通過(guò)增長(zhǎng)腸絨毛的高度、降低小腸隱窩的深度，促進(jìn)機(jī)體對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收[24-25]。本研究結(jié)果與前人相似，說(shuō)明復(fù)合菌與荔枝多酚聯(lián)用可在一定程度上增進(jìn)腸道的消化吸收能力。

人體內(nèi)腸道菌群如果失衡，腸道內(nèi)環(huán)境就會(huì)發(fā)生變化，從而引起宿主代謝和免疫紊亂[22]，使人體處于亞健康狀態(tài)，甚至引發(fā)糖尿病和高血壓等慢性疾病[26]。已有報(bào)道表明乳酸菌可以提高腸道內(nèi)免疫力，促進(jìn)腸道菌群恢復(fù)平衡狀態(tài)的作用[27]。對(duì)比整個(gè)DGGE圖譜可見(jiàn)，嗜酸乳桿菌、復(fù)合菌和復(fù)合菌-荔枝多酚能增加蓖麻油腹瀉后小鼠菌群的數(shù)量，增強(qiáng)腸道菌群的微生態(tài)穩(wěn)定性，而且復(fù)合菌還能增高群落的復(fù)雜程度。復(fù)合菌與荔枝多酚聯(lián)用未增加群落的復(fù)雜程度，可能是荔枝多酚具有抑菌、提高機(jī)體免疫力、預(yù)防疾病的作用[28]，從而抑制了有害菌的生長(zhǎng)，導(dǎo)致菌群多樣性、群落的復(fù)雜程度降低。這與唐艷等研究相一致，中草藥所含的有效成分可以抑制有害菌：大腸桿菌、沙門(mén)氏菌的增殖等，最終會(huì)降低有害菌的數(shù)量[29]。本研究測(cè)序結(jié)果顯示，各給藥組條帶與正常組和模型組相比，增加了優(yōu)勢(shì)條帶，復(fù)合菌組和復(fù)合菌-荔枝多酚組還出現(xiàn)了新的條帶，說(shuō)明復(fù)合菌和復(fù)合菌-荔枝多酚不僅能有效地提高小鼠腸道的豐富度，增加小鼠腸道微生物的多樣性，還能夠促進(jìn)腸道內(nèi)部某些菌群的生成，優(yōu)化小鼠腸道微生物菌群結(jié)構(gòu)，所有給藥組中復(fù)合菌體現(xiàn)出了更好的效果。