董艷 孫藝 紀(jì)鎮(zhèn)華 鄭華

Klotho蛋白基因表達(dá)缺陷的老鼠會出現(xiàn)類似人類衰老一系列變化, 如動脈硬化、骨質(zhì)疏松、糖能力代謝異常、生殖器官萎縮, 也被稱為抗衰老蛋白［1-3］。膜型Klotho蛋白主要功能是調(diào)節(jié)腎臟分泌磷酸鹽并合成活性維生素D(VitD), 與成纖維細(xì)胞生長因子23(FGF23)協(xié)同完成, 最終導(dǎo)致血鈣水平的降低, 導(dǎo)致出現(xiàn)骨質(zhì)疏松,骨折, 甚至影響患者的生存期［4］。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年4～11月本院收治的60例CKD3期、CKD4期、CKD5期腎性骨病患者作為實驗組, 另選同期60例非腎性骨病患者作為對照組。其中男67例, 女53例, 平均年齡(46.76±13.44)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①對照組(非CKD)：年齡40～60歲, 血肌酐及尿蛋白檢測正常的人群；②實驗組：年齡40～60歲, CKD合并腎性骨病(未接受血液凈化治療), 并根據(jù)Ccr分為CKD3期(20例)、CKD4期(23例)、CKD5期(17例)3個亞組(根據(jù)GC公式分別計算Ccr值, 根據(jù)KDIGO 2013指南標(biāo)準(zhǔn), 確診的CKD分期)；③征得患者同意并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①急性腎衰竭；②既往存在骨質(zhì)疏松病史及口服鈣片及骨化三醇膠藥物。

1.2 方法 ①所有對象：收集患者的一般資料, 如年齡、性別、體重, CKD患者的原發(fā)病、腎功能異常病、有無骨質(zhì)疏松及用藥史。②標(biāo)本收集：受試者均禁食8 h以上, 空腹抽取靜脈血2 ml, 即刻以3000 r/min離心10 min, 取上清送檢。③檢測指標(biāo)：用羅氏全自動生化分析儀檢測血Ccr、鈣(Ca)、磷(P)、甲狀旁腺激素, Ellisa 法檢測Klotho蛋白, 應(yīng)用骨密度分析儀測得骨密度|T|值。

1.3 觀察指標(biāo) 比較兩組患者Klotho蛋白及骨密度|T|值,實驗組各亞組中Klotho蛋白與骨密度|T|值的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS20.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示, 采用t檢驗；相關(guān)性檢驗采用Pearson相關(guān)分析法。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清Klotho蛋白、骨密度|T|值比較 實驗組血清Klotho蛋白、骨密度|T|值顯著低于對照組, 差異有統(tǒng)計學(xué)意義 (P＜0.05)。見表 1。

表1 兩組血清Klotho蛋白、骨密度|T|值比較( ±s)

表1 兩組血清Klotho蛋白、骨密度|T|值比較( ±s)

注：與對照組比較, aP＜0.05

對照組 60 418.04±37.21 2.94±0.46實驗組 60 259.09±49.27a 1.95±0.42a t 19.941 12.311 P＜0.05 ＜0.05

2.2 60例實驗組Klotho蛋白水平與各指標(biāo)的相關(guān)分析 實驗組Klotho蛋白與血鈣、Ccr、骨密度|T|值等指標(biāo)呈正相關(guān),與血磷、甲狀旁腺激素呈負(fù)相關(guān)(P＜0.05)。見表2。

表2 60例實驗組血清Klotho蛋白水平與各指標(biāo)的相關(guān)分析

2.3 60例實驗組各亞組中, Klotho蛋白與骨密度|T|值相關(guān)性分析 實驗組各亞組中Klotho蛋白與骨密度|T|值呈顯著正相關(guān)(P＜0.05)。見圖1。

圖1 60例實驗組Klotho蛋白與骨密度|T|值相關(guān)性分析

3 討論

本研究結(jié)果顯示 , 實驗組血清Klotho蛋白、骨密度|T|值顯著低于對照組, 差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05), Hu等［5］人的實驗也驗證了這一結(jié)果。Klotho基因缺陷鼠可出現(xiàn)一系列與人類衰老相似的表型變化, 如生長阻滯和壽命縮短、活動減少和步態(tài)紊亂、生殖器官萎縮、動脈硬化和異位鈣化、骨質(zhì)疏松、皮膚萎縮、肺氣腫、糖和能量代謝異常、免疫功能異常等。年齡、氧化應(yīng)激、急性缺血等可影響Klotho蛋白基因表達(dá)。

調(diào)節(jié)鈣磷平衡和維生素D代謝是Klotho蛋白的重要功能之一, Klotho蛋白聯(lián)合FGF23在腎臟近端小管上皮細(xì)胞與成纖維細(xì)胞生長因子受體(FGFRs)結(jié)合形成FGF-23-Klotho復(fù)合物, 抑制磷的重吸收, 遠(yuǎn)端小管上皮細(xì)胞通過穩(wěn)定瞬時受體電位V5-鈣(TRPV5-Ca2+)通道調(diào)節(jié)鈣的重吸收, 并抑制腎臟1-α-25羥化酶活性, 下調(diào)骨化三醇水平。本研究結(jié)果顯示, 實驗組klotho蛋白與血鈣、Ccr、骨密度|T|值等指標(biāo)呈正相關(guān), 與血磷、甲狀旁腺激素呈負(fù)相關(guān)(P＜0.05)。提示Klotho蛋白可能在腎性骨病骨質(zhì)疏松中發(fā)揮重要作用。提示隨著Ccr的降低, 腎功能的進(jìn)展惡化, Klotho蛋白水平逐漸降低, CKD患者腎臟Klotho表達(dá)水平減少, Klotho-FGFRs復(fù)合物水平下降, 不能充分結(jié)合FGF-23使其失去生物學(xué)效應(yīng)；磷排泄減少并潴留, 鈣重吸收發(fā)生障礙, 高磷、又進(jìn)一步加重低鈣, 由此形成惡性循環(huán)。

在臨床中, 目前骨質(zhì)疏松的臨床診斷應(yīng)用骨密度|T|值,而骨密度|T|值的檢測受到年齡, 口服激素, 口服鈣劑及骨化三醇膠等藥物的影響, 在排除了上述因素后, 通過本實驗的研究, Klotho蛋白與骨密度|T|值呈顯著正相關(guān)(P＜0.05)。進(jìn)而推斷患者骨質(zhì)疏松程度受Klotho蛋白的調(diào)節(jié)。在CKD患者中, 腎損傷后, Klotho蛋白表達(dá)進(jìn)一步減少, 骨質(zhì)疏松程度加重。

綜上所述, Klotho蛋白表達(dá)水平隨著CKD進(jìn)展逐漸下降,其在腎性骨病患者中水平降低可能是導(dǎo)致鈣代謝失調(diào), 進(jìn)而加重骨質(zhì)疏松原因之一, 為進(jìn)一步的深入研究提思路。