高煒，徐艷霞，劉圓圓，徐媺

青島市腫瘤醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合科，山東青島266042

肺癌是一種常見的惡性腫瘤，近年來，肺癌的發(fā)病率持續(xù)上升，病死率居高不下，是嚴重威脅人類生命健康的惡性腫瘤之一[1-2]。早期肺癌患者并無明顯癥狀，大多數(shù)患者僅出現(xiàn)一些常見的呼吸道癥狀，如咳嗽、胸悶等，大部分患者就診時已處于晚期，錯過了最佳治療時機，患者的5年生存率較低[3]。早期發(fā)現(xiàn)、及時診斷、盡快治療是降低肺癌患者病死率的根本方法[4]。甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子-1（thyroid transcription factor-1，TTF-1）是一種在肺組織表面活性蛋白表達過程中起重要作用的轉(zhuǎn)錄因子，其在多數(shù)肺腺癌中均有表達，因此，TTF-1在臨床上廣泛應(yīng)用于肺腺癌的常規(guī)病理診斷，但是目前對于TTF-1的表達與腫瘤發(fā)生、發(fā)展關(guān)系的研究較為少見[5]。本研究采用免疫組織化學(xué)染色法檢測肺腺癌組織和癌旁正常組織中TTF-1的表達情況，并分析TTF-1表達與肺腺癌患者臨床特征的關(guān)系，旨在為肺腺癌的血清學(xué)診斷提供新的參考指標，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2016年3月至2017年3月于青島市腫瘤醫(yī)院接受手術(shù)治療且經(jīng)手術(shù)病理證實的肺腺癌患者的臨床資料。納入標準：①肺腺癌的診斷標準參考2015版《中國原發(fā)性肺癌診療規(guī)范》[6]；②年齡為19～79歲；③均經(jīng)手術(shù)后病理學(xué)檢查證實為肺腺癌；④標本采集前未接受過放化療、免疫治療等；⑤臨床資料齊全。排除標準：①伴有嚴重的肝腎功能不全；②既往有放化療史、免疫治療史；③轉(zhuǎn)移性肺癌。根據(jù)納入和排除標準，本研究共納入75例肺腺癌患者，收集患者的肺腺癌組織標本75例及其相應(yīng)的癌旁正常組織（距離病灶邊緣3 cm）標本75例。75例肺腺癌患者中，男47例，女28例；年齡為41～78歲，平均年齡為（58.2±12.2）歲；解剖部位：中央型24例，周圍型51例；病灶直徑：≥5 cm 29例，＜5 cm 46例；TNM分期：I期16例，Ⅱ期29例，Ⅲ期22例，Ⅳ期8例；組織分化程度：高分化24例，中分化25例，低分化26例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移46例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移29例；表皮生長因子受體（epidermal growth factor receptor，EGFR）陽性36例，EGFR陰性39例。

1.2 免疫組織化學(xué)染色

將所有組織標本均采用10%中性福爾馬林固定，并均經(jīng)石蠟包埋后作連續(xù)切片，切片厚度為3～4 μm，嚴格按照說明書的步驟進行蘇木精-伊紅染色（hematoxylin-eosin staining，HE染色），并在5個高倍視野（×400）光鏡下觀察。將切片進行脫蠟，用pH為6.0的檸檬酸鹽緩沖溶液在高溫、高壓的環(huán)境下進行抗原修復(fù)，再加入3%的過氧化氫消化約10 min，去除內(nèi)源性過氧化物酶，在組織切片上滴加一抗，并在37℃環(huán)境下孵育1 h，再采用磷酸鹽緩沖液沖洗3次，加二抗在37℃環(huán)境下孵育0.5 h，用磷酸鹽緩沖液沖洗3次，沖洗完成后采用二氨基聯(lián)苯胺（diaminobenzidine，DAB）法顯色，顯色后進行脫水、透明、封片和鏡檢。

1.3 免疫組織化學(xué)染色結(jié)果判定

TTF-1定位于細胞核，當(dāng)出現(xiàn)黃色、棕黃色、褐色顆粒時提示為TTF-1蛋白陽性表達。根據(jù)染色強度評分：無色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色、黑色為3分。根據(jù)陽性細胞數(shù)目所占百分比評分：陽性細胞數(shù)目所占百分比≤10%為1分，11%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分。根據(jù)染色強度評分和陽性細胞數(shù)目所占百分比評分的乘積判斷免疫組織化學(xué)染色結(jié)果，＜3分為TTF-1蛋白表達陰性（-），≥3分為TTF-1蛋白表達陽性。其中，3～5分為TTF-1蛋白表達弱陽性（+）；6～9分為TTF-1蛋白表達中等陽性（++）；＞9分為TTF-1蛋白表達強陽性（+++）。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 16.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。計量資料采用均數(shù)±標準差（±s）表示，組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料以例數(shù)或率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 肺腺癌組織和癌旁正常組織中TTF- 1陽性表達率的比較

肺腺癌組織中TTF-1的陽性表達率為77.3%（58/75），明顯高于癌旁正常組織中的10.7%（8/75），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=67.641，P＜0.01）。（表1）

表1 肺腺癌組織和癌旁組織中TTF- 1的表達情況

2.2 肺腺癌組織中TTF- 1表達與肺腺癌患者臨床特征的關(guān)系

中高分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期為I+Ⅱ期肺腺癌患者肺腺癌組織中TTF-1的陽性表達率均明顯高于低分化、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期為Ⅲ+Ⅳ期肺腺癌患者肺腺癌組織中TTF-1的陽性表達率，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；不同病灶直徑、EGFR表達的肺腺癌患者肺腺癌組織中TTF-1陽性表達率比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。（表2）

表2 不同臨床特征肺腺癌患者肺腺癌組織中TTF- 1蛋白的陽性表達情況比較（ n=75）

3 討論

近年來，肺癌的發(fā)病率和病死率均呈現(xiàn)逐年上升的趨勢，目前已成為全球病死率最高的惡性腫瘤[7-8]。目前認為，吸煙是引發(fā)肺癌的最重要的高危因素，同時，輻射、肺部感染和遺傳等也是引發(fā)肺癌的重要因素[9-10]。已有研究證明，長期且大量吸煙的人群患肺癌的概率是不吸煙人群的10～20倍，吸煙者的年齡越小，肺癌的發(fā)病率越高[11-12]。肺癌患者在患病早期多無特殊癥狀，常表現(xiàn)為胸部脹痛、咳痰、低熱和咳嗽等癥狀，往往在胸部放射檢查中偶爾發(fā)現(xiàn)[13]。肺癌晚期癥狀則表現(xiàn)為呼吸困難、體重驟減、咳嗽嚴重、咯血等。目前，肺癌的治療主要包括化療、放療和外科手術(shù)治療，盡管近年來放療、化療和外科手術(shù)治療等技術(shù)不斷提高，但大多數(shù)患者在就診時已處于肺癌晚期，腫瘤多已發(fā)生了轉(zhuǎn)移，患者失去了最佳的治療時機，導(dǎo)致肺癌的5年生存率未明顯提高[14]。有研究發(fā)現(xiàn)，原發(fā)性肺腺癌多起源于Ⅱ型肺泡上皮和支氣管無纖毛分泌細胞（即clara細胞），Ⅱ型肺泡上皮細胞功能復(fù)雜，除了分泌表面活性物質(zhì)、Ⅳ型膠原（基底膜成分）和一些重要的酶類物質(zhì)外，還具有分裂增殖的能力[15]。

TTF包括TTF-1和TTF-2兩種亞型[16]。TTF-l是在胚胎期和發(fā)育成熟的甲狀腺、肺上皮細胞中表達的一種38 kD的轉(zhuǎn)錄因子。TTF-1基因位于人染色體14q13位點，含有3個外顯子和1個內(nèi)含子[17]。有研究表明，肺組織中，TTF-1控制表面蛋白A（surface protein A，SPA）、表面蛋白B（surface protein B，SPB）、表面蛋白C（surface protein C，SPC）和clara細胞分泌蛋白基因[18]。TTF-1是一種在肺的表面活性蛋白表達過程中起重要作用的轉(zhuǎn)錄因子，在多數(shù)肺腺癌中都有表達[19]。關(guān)于TTF-l的表達與NSCLC患者生存期關(guān)系的機制尚不十分清楚，已有研究表明，TTF-1蛋白的表達可用于鑒別肺腺癌與肺鱗癌、原發(fā)性肺癌與轉(zhuǎn)移性肺癌，尤其在原發(fā)性肺癌的診斷中，TTF-1的表達具有較高靈敏度和特異度[20-21]。

目前對TTF-1的表達與腫瘤發(fā)生、發(fā)展關(guān)系的研究并不多見。本研究采用免疫組織化學(xué)染色法檢測肺腺癌組織和癌旁正常組織中TTF-1蛋白的表達情況，并分析肺腺癌患者TNM分期、組織分化程度、病灶直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、EGFR表達情況與肺腺癌組織中TTF-1蛋白表達的關(guān)系。本研究結(jié)果顯示，在肺腺癌組織及癌旁正常組織中均可以發(fā)現(xiàn)TTF-1蛋白的陽性表達，提示TTF-1蛋白可能參與肺腺癌的發(fā)生、發(fā)展。肺腺癌組織中TTF-1蛋白的陽性表達率明顯高于癌旁正常組織（P＜0.01），提示TTF-1在促進肺癌發(fā)生的過程中發(fā)揮了重要作用，表明其對肺癌的診斷具有一定的價值。此外，本研究結(jié)果還顯示，中高分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期為I+Ⅱ期肺腺癌患者肺腺癌組織中TTF-1蛋白的陽性表達率均明顯高于低分化、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期為Ⅲ+Ⅳ期肺腺癌患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），提示TTF-1與腫瘤分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況關(guān)系密切。不同病灶直徑、EGFR表達的肺腺癌患者肺腺癌組織中TTF-1蛋白的陽性表達率比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），提示TTF-1蛋白的陽性表達對病灶大小和EGFR的表達無影響。

綜上所述，TTF-1蛋白在肺腺癌組織中陽性表達率高，并且與患者的TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況及組織分化程度密切相關(guān)。TTF-1蛋白在肺腺癌的發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮了重要的作用，對于肺腺癌患者的診斷及病情評估具有一定的參考價值，值得臨床深入探討。