王林林， 姜亞玲， 劉秋偉

(鄭州工業(yè)應用技術(shù)學院 藥學院， 河南 鄭州 451100)

0 引 言

單硝酸異山梨酯屬于硝酸酯類抗心絞痛藥，為硝酸異山梨酯的活性代謝產(chǎn)物，是新一代長效抗心絞痛藥物，藥理作用與機制和硝酸甘油十分類似[1]，主要通過擴張外周靜脈、動脈和冠狀動脈發(fā)揮作用。本品水溶性增大，不易透過血腦屏障，故與脂溶性大的硝酸異山梨酯比較中樞神經(jīng)系統(tǒng)不良反應較輕，但本品起效較慢，不宜用于心絞痛急性發(fā)作，適用于冠心病的長期治療和預防心絞痛發(fā)作[2-3]。單硝酸異山梨酯緩釋片采用特別工藝，達到一天一次用藥即可有效控制心絞痛疾病發(fā)作的效果，極大改善病人對藥物的順應性。緩釋片使長期用藥變得十分方便，對醫(yī)生和患者都很有幫助。本研究是為了給仿制藥單硝酸異山梨酯緩釋片建立一種科學、合理的含量檢測方法，要求證明采用的方法適合于相應的檢測需求，準確度、重復性、精密度、專屬性、線性和范圍以及溶液穩(wěn)定性都達到2010版藥典的相關(guān)要求[4-5]。

1 實驗部分

1.1 儀器和試劑

實驗所用儀器和試劑分別見表1和表2。

表1 儀器

1.2 含量檢查

1.2.1 溶液的制備

1.2.1.1 供試品溶液

取本品適量，研細，加流動相溶解并稀釋制成每1 mL中約含單硝酸異山梨酯5 μg的溶液，作為供試品溶液；取本品20片，精密稱定，研細，精密稱取適量(約相當于單硝酸異山梨酯25 mg)，置250 mL量瓶中，加流動相適量，振搖20 min，使單硝酸異山梨酯溶解，用流動相稀釋至刻度，搖勻，過濾，作為供試品溶液[6-7]。

1.2.1.2 對照溶液

精密量取供試品適量，用流動相定量稀釋制成每1 mL中約含單硝酸異山梨酯5 μg的溶液作為對照溶液。

1.2.2 測定法

試驗操作：精密量取供試品溶液20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。另取單硝酸異山梨酯對照品適量，同法測定[8-10]。按外標法以峰面積計算。

計算公式：

式中：A樣/A對---- 供試品/對照品溶液中單硝酸異山梨酯的峰面積；

W樣/W對----供試品/對照品溶液的稱樣量，g；

D樣/D對----供試品/對照品溶液的稀釋倍數(shù)；

W平----平均片重，g；

規(guī)格----60 mg。

1.2.3 含量結(jié)果

含量方法學(1)驗證結(jié)果見表3。

表3 含量方法學(1)驗證結(jié)果

1.3 含量方法學建立

1.3.1 色譜條件的選擇

參照文獻[16]單硝酸異山梨酯片的含量測定，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-水(25∶75)為流動相；檢測波長為210 nm；柱溫為35 ℃。

1.3.2 干擾試驗

取本品輔料適量，精密稱定，加水溶解并定量稀釋制成相當于每1 mL中約含單硝酸異山梨酯0.1 mg的溶液，分別精密量取此溶液、水、流動相20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。

本品空白輔料、流動相、溶劑水在單硝酸異山梨酯峰附近無吸收峰，故本品輔料、流動相、溶劑水不干擾本品含量測定[11]。

1.3.3 線性試驗與范圍

取單硝酸異山梨酯原料0.025 5 g，置50 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液，精密量取貯備液1、2、4、5、6、7.5 mL分別置25 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得[12]，分別取上述溶液20 μL注入液相色譜儀，照含量測定方法在210 nm波長處測定，記錄色譜圖。以濃度(μg/mL)對峰面積進行線性回歸，結(jié)果見表4和圖1。

表4 單硝酸異山梨酯測定的線性范圍考察結(jié)果

試驗表明，單硝酸異山梨酯在20.40～153.00 μg/mL濃度范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

圖1 單硝酸異山梨酯線性關(guān)系

1.3.4 準確度試驗

1.3.4.1 對照品溶液的制備

精密稱定單硝酸異山梨酯對照品25 mg，置50 mL量瓶中，加水振搖使之溶解后，再用水稀釋至刻度，搖勻，精密量取溶液5 mL置25 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液[13-14]。

1.3.4.2 樣品溶液的制備

分別取單硝酸異山梨酯原料20、25、30 mg，精密稱定，置250 mL量瓶中，再按處方加相應輔料，加水約200 mL，振搖20 min，使單硝酸異山梨酯溶解，用水稀釋至刻度，使溶液中含主藥為處方量的80%、100%、120%，過濾，搖勻，即得樣品溶液(1)、 (2) 、(3)，每個濃度平行制備3份樣品溶液，按照含量測定方法在210 nm的波長處測定峰面積，計算樣品的回收率及其RSD%，測定結(jié)果見表5。

表5 回收率測定結(jié)果

由試驗結(jié)果可知，本方法測定單硝酸異山梨酯緩釋片的含量，平均回收率為99.88%，RSD為0.54%，且回收率均在98.0%～102.0%范圍內(nèi)，本方法測定單硝酸異山梨酯準確度良好。

1.3.5 重復性試驗

取本品細粉適量(約為單硝酸異山梨酯25 mg)，精密稱定6份樣品，分別置250 mL容量瓶中，加水約200 mL，振搖使之溶解，再用水稀釋至刻度，搖勻，過濾，為樣品溶液。另取單硝酸異山梨酯對照品適量，加水振搖至單硝酸異山梨酯溶解，用水稀釋制成每1 mL中約含0.1 mg的溶液，搖勻，為對照品溶液[15-16]。分別精密量取6份對照品和樣品溶液20 μL，依次注入液相色譜儀，記錄色譜圖。按照含量測定方法測定樣品峰面積，計算其RSD%，見表6。

表6 重復性測定結(jié)果

由試驗結(jié)果可知，此方法測定本品含量時重復性良好。

2 結(jié) 語

由上述試驗可知，對本含量測定方法進行的線性、精密度、重復性、溶液穩(wěn)定性、回收率等驗證,試驗結(jié)果均符合藥品質(zhì)量標準分析方法驗證指導原則(文獻[16]附錄XIXA)的要求，表明此含量測定方法精密度好，準確度高，適用于本品的含量測定。