仇登高，溫 憑，林 琪，朱志煌，吳水清， 劉銀華，陳新明，邱峰巖

(1.福建省水產(chǎn)研究所，福建 廈門 361013； 2.福建省海洋生物增養(yǎng)殖與高值化利用重點(diǎn)實(shí)驗室，福建 廈門 361013； 3.福建省淡水水產(chǎn)研究所，福建 福州 350002； 4.廈門小嶝水產(chǎn)科技有限公司，福建 廈門 361104)

珍珠龍膽石斑魚(Epinephelusfuscoguttatus♀ ×E.lanceolatus♂)，又稱珍珠斑、龍虎斑，是將雄性鞍帶石斑魚精子與雌性棕點(diǎn)石斑魚卵子人工授精而培育得到的雜交新品種石斑魚[1-3]。珍珠龍膽石斑魚的肉質(zhì)細(xì)膩、味道鮮美、膠原蛋白含量豐富，加之其抗逆性較強(qiáng)和生長速度快等優(yōu)勢，深受廣大消費(fèi)者和養(yǎng)殖戶的青睞，是一種值得推廣養(yǎng)殖的石斑魚品種[4]。近年來，工廠化循環(huán)水養(yǎng)殖作為現(xiàn)代漁業(yè)的一種新型養(yǎng)殖模式，因其具有環(huán)境友好、資源節(jié)約、設(shè)施設(shè)備先進(jìn)和產(chǎn)品質(zhì)量可追溯等特點(diǎn)，被公認(rèn)為是現(xiàn)代海水養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的重要發(fā)展方向[5]。福建、廣東、海南、山東、天津等沿海地區(qū)采取循環(huán)水養(yǎng)殖珍珠龍膽石斑魚，從中獲得的經(jīng)濟(jì)、社會和生態(tài)效益均十分顯著。

隨著珍珠龍膽石斑魚循環(huán)水養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的快速推進(jìn)，對飼料的科學(xué)性投喂水平也日益提高，筆者在生產(chǎn)中發(fā)現(xiàn)，投喂頻次過多或過少，不僅會導(dǎo)致珍珠龍膽石斑規(guī)格大小參差不齊，還會影響生物濾池的處理效率，進(jìn)而影響?zhàn)B殖產(chǎn)量。因此，開展循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)下不同投喂頻率對珍珠龍膽石斑魚生長及抗應(yīng)激酶活力的研究十分必要。目前，國內(nèi)外關(guān)于魚類投喂頻率方面的研究已有一些報道，如紀(jì)文秀等[6]研究了投喂頻率對網(wǎng)箱養(yǎng)殖點(diǎn)帶石斑魚(E.malabaricus)生長、食物利用及飼料氮、磷排放的影響；王成桂等[7]比較了不同投喂頻率對龍虎斑(Epinepheluslanceolatus♂×E.fuscoguttatus♀)幼魚生長和餌料利用的影響；García-Mesa等[8]分析了不同投喂頻率對大西洋白姑魚(Argyrosomusregius)生產(chǎn)性能和生理指標(biāo)影響的變化規(guī)律；Tian等[9]探討了團(tuán)頭魴(Megalobramaamblycephala)幼魚的最佳投喂頻率。然而，有關(guān)循環(huán)水養(yǎng)殖模式下投喂頻率對珍珠龍膽石斑魚生長和血漿抗應(yīng)激酶活力影響的研究未見報道。鑒于此，本文以珍珠龍膽石斑魚為研究對象，探討了不同投喂頻率對工廠化循環(huán)水系統(tǒng)中珍珠龍膽石斑魚生長和血漿抗應(yīng)激酶活力的影響，篩選出工廠化循環(huán)水系統(tǒng)養(yǎng)殖珍珠龍膽石斑魚的最佳投喂頻率，為工廠化循環(huán)水養(yǎng)殖珍珠龍膽石斑魚的飼料投喂管理提供理論依據(jù)和生產(chǎn)指導(dǎo)。

1 材料和方法

1.1 試驗材料

珍珠龍膽石斑魚由福建省水產(chǎn)研究所小嶝島實(shí)驗基地提供，選擇初始體質(zhì)量(297.79±59.94)g、全長(25.36±1.82)cm、體長(22.45±1.78)cm的珍珠龍膽石斑魚作為實(shí)驗魚。

試驗選擇健馬牌石斑魚顆粒飼料，質(zhì)量指標(biāo)：灰分≤16.0%，水分≤12.0%，粗蛋白質(zhì)≥48.0%，賴氨酸≥2.1%，脂肪≥7.0%，纖維≤6.0%。

養(yǎng)殖系統(tǒng)：采用1套工廠化循環(huán)水養(yǎng)殖生產(chǎn)系統(tǒng)，系統(tǒng)由17個養(yǎng)殖池、固液分離裝置、物理過濾池、蛋白質(zhì)分離器、生物濾池、紫外線消毒裝置等單元組成(圖1)。試驗選用17個池中的6個池，每個池為八邊形切角的磚混結(jié)構(gòu)，尺寸為5 500 mm×5 500 mm，切角1 000 mm×1 000 mm，坡度為1.5%，池高1 350 mm，有效水深為1 200 mm，單個養(yǎng)殖池面積為28.25 m2。每個魚池有效養(yǎng)殖水體為33.9 m3，進(jìn)水通過2根直徑75 mm 的帶孔PVC管道沿魚池壁側(cè)向射流，同時池底中心設(shè)置一個飛碟狀的污物捕獲器、魚池外安裝一個漩渦分離器，形成固液分離裝置，以便排出匯集在養(yǎng)殖池中心處的殘餌和糞便。

1.2 試驗設(shè)計與管理

1.3 樣品采集

試驗結(jié)束時，實(shí)驗魚饑餓36 h，每個重復(fù)處理組隨機(jī)取30尾測量魚體質(zhì)量、全長和體長，統(tǒng)計實(shí)驗魚存活數(shù)量以及攝食量，計算各試驗組生長和攝食指標(biāo)。同時，每個處理組隨機(jī)取3尾空腹魚進(jìn)行尾椎靜脈抽取血液，血液樣品先分別注入置于碎冰中的含肝素鈉抗凝的5 mL離心管內(nèi)，接著以6 000 rpm離心10 min，然后取血漿放置于-70℃下保存，待測過氧化氫酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)和堿性磷酸酶(AKP)活力。

1.4 血漿抗應(yīng)激酶活力的測定

血漿抗應(yīng)激酶包括過氧化氫酶、超氧化物歧化酶和堿性磷酸酶活性，均采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒進(jìn)行測定。

1.5 測定指標(biāo)計算公式

成活率(Survival rate，SR)：SR(%)=100×Nf/Ni

肥滿度(Condition factor，CF)：CF=BW/BL3

日增質(zhì)量(Daily weight gain， DWG)：DWG(g/d)=(BW2-BW1)/(T2-T1)

相對增質(zhì)量(Relative weight gain，RWG)：RWG(%)=100×BW2/BW1

體質(zhì)量變異系數(shù)(Coefficient of size variation，SV)：SV=100×SD/X

特定生長率(Specific growth rate，SGR)：SGR(%/d)=100×(lnBW2-lnBW1)/(T2-T1)

日攝食率(Food intake，F(xiàn)I)：FI(%/d)=100×F/[0.5×(BW2+BW1)×(T2-T1)]

飼料轉(zhuǎn)化效率(Food conversion efficiency， FCE)：FCE(%)=100×(BW2-BW1)/F

飼料系數(shù)(Food conversion ratio，F(xiàn)CR)：FCR=F/(BW2-BW1)

式中，Ni、Nf分別為初始魚尾數(shù)和最終魚尾數(shù)；BW為每尾魚的體質(zhì)量(g)；BL為每尾魚體長(cm)；BW1、BW2分別為試驗初始體質(zhì)量和最終體質(zhì)量(g)；T1、T2分別為BW1、BW2時所對應(yīng)時間；SD為標(biāo)準(zhǔn)差；X為處理組魚的平均體質(zhì)量(g)；F為總攝食量(g)。

1.6 數(shù)據(jù)處理

試驗數(shù)據(jù)采用EXCEL 2010進(jìn)行常規(guī)數(shù)值計算后，使用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行單因素方差(0ne-way ANOVA)分析，組間差異采用LSD法進(jìn)行多重比較。試驗數(shù)值以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean±SD)表示，顯著性水平設(shè)為P<0.05。

2 結(jié)果分析

2.1 不同投喂頻率對珍珠龍膽石斑魚成活率的影響

由表1可知，在本試驗設(shè)置的投喂頻率下珍珠龍膽石斑魚的成活率均在96%以上，A1組(1次/2d)顯著高于A2組(1次/d)和A3組(2次/d)(P<0.05)，A2組、A3組間差異不顯著(P>0.05)，平均成活率由高至低順序為A1(1次/2d)>A3(2次/d)>A2(1次/d)。

2.2 不同投喂頻率對珍珠龍膽石斑魚生長的影響

在不同投喂頻率梯度下，試驗結(jié)束時工廠化循環(huán)水養(yǎng)殖珍珠龍膽石斑魚生長性能的統(tǒng)計分析結(jié)果見表1。在循環(huán)水養(yǎng)殖模式下，平均特定生長率、相對增質(zhì)量、日增質(zhì)量和肥滿度由高至低的順序均為A3(2次/d)>A2(1次/d)>A1(1次/2d)，平均體質(zhì)量變異系數(shù)由低至高依次為A1(1次/2d)、A2(1次/d)、A3(2次/d)。然而，試驗設(shè)定的投喂頻率A1組(1次/2d)、A2組(1次/d)、A3組(2次/d)對珍珠龍膽石斑魚特定生長率、相對增質(zhì)量、日增質(zhì)量、肥滿度和體質(zhì)量變異系數(shù)的影響均無顯著性差異(P>0.05)。

表1 不同投喂頻率對珍珠龍膽石斑魚生長的影響

注：A1、A2、A3分別表示1次/2d、1次/d、2次/d三個不同投喂頻率梯度；表中數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示；同一行數(shù)據(jù)上標(biāo)字母相同者表示差異不顯著(P>0.05)，不相同者表示差異顯著(P<0.05)。下表同此。

Notes： A1，A2，A3was once every two days，one time per day，and two times per day of three varied feeding frequency gradients,respectively. The datas in the table were presented as means±standard deviation. Values with the same superscripts in the same line indicated insignificant difference (P>0.05)，values with different superscripts indicated significant difference (P<0.05). The same as below.

2.3 不同投喂頻率對珍珠龍膽石斑魚攝食的影響

試驗結(jié)束時，珍珠龍膽石斑魚攝食指標(biāo)的計算結(jié)果如表2所示，從表2可以看出，平均日攝食率、飼料轉(zhuǎn)化效率由高至低依次為A3組(2次/d)、A1(1次/2d)、A2(1次/d)，平均飼料系數(shù)由小至大順序為A1(1次/2d)=A3組(2次/d)0.05)。

表2 投喂頻率對珍珠龍膽石斑魚攝食指標(biāo)的影響

2.4 不同投喂頻率對珍珠龍膽石斑魚血漿抗應(yīng)激酶活力的影響

經(jīng)過60 d的生長試驗，不同投喂頻率下循環(huán)水養(yǎng)殖珍珠龍膽石斑魚的堿性磷酸酶、過氧化氫酶和超氧化物歧化酶活力變化見表3。不同投喂頻率試驗組間的珍珠龍膽石斑魚堿性磷酸酶、過氧化氫酶和超氧化物歧化酶活力均無顯著性差異(P>0.05)。

表3 投喂頻率對珍珠龍膽石斑魚血漿中抗應(yīng)激酶活力的影響

3 討論

3.1 不同投喂頻率對珍珠龍膽石斑魚生長性能的影響

紀(jì)文秀等對體質(zhì)量(137.0±1.0)g點(diǎn)帶石斑魚投喂頻率研究結(jié)果表明，各試驗組成活率都在90%以上，不同處理組間成活率差異不顯著[6]。冒樹泉等報道了不同梯度投喂頻率對許氏平鲉(Sebastesschlegeli)幼魚生長性能的影響試驗，指出各處理組許氏平鲉幼魚成活率均為100%[10]。王偉等開展了投喂頻率對花鱸(Lateolabraxmaculatus)幼魚生長性能影響的研究，結(jié)果顯示投喂頻率對花鱸幼魚存活率沒有顯著性影響，平均存活率均在93.33%以上[11]。仇登高等研究了投喂頻率對初始平均體質(zhì)量為858.73 g鞍帶石斑魚生長的影響，結(jié)果表明：不同投喂頻率試驗組對鞍帶石斑魚存活率無顯著性影響，各組存活率均在99.40%～99.80%之間波動[12]。在本試驗條件下，各投喂頻率組珍珠龍膽石斑魚的成活率均在96%以上，1次/2d組投喂頻率顯著高于1次/d組和2次/d組(P<0.05)，平均成活率從高到低順序為1次/2d組>2次/d組>1次/d組。這與對點(diǎn)帶石斑魚[6]、許氏平鲉[10]、非洲鯰魚(Clariasgariepinus)[13]的研究結(jié)果有相似之處，也有一些不同，說明在工廠化循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)中，可以通過采用1次/2d的投喂頻率來提高珍珠龍膽石斑魚養(yǎng)殖成活率。在本試驗的工廠化循環(huán)水養(yǎng)殖模式下，投喂頻率對珍珠龍膽石斑魚特定生長率、相對增質(zhì)量、日增質(zhì)量、肥滿度和體質(zhì)量變異系數(shù)等生長指標(biāo)影響差異不顯著(P>0.05)。本試驗結(jié)論與Biswas等對麥鯪(Cirrhinusmrigala)、南亞野鯪(Labeorohita)的研究結(jié)果[14]相似，但與紀(jì)文秀等對網(wǎng)箱養(yǎng)殖點(diǎn)帶石斑魚[6]、董桂芳等對初始平均體質(zhì)量約4.5g斑點(diǎn)叉尾鮰(Ictaluruspunctatus)[15]、吳耀華等對體質(zhì)量為(84.5±12.9)g龍虎斑[16]的研究結(jié)果不一致，造成這種差異的原因可能與不同養(yǎng)殖模式、養(yǎng)殖品種和規(guī)格大小等因素有關(guān)。

不同投喂頻率對硬骨魚類飼料利用指標(biāo)(如攝食率、飼料轉(zhuǎn)化效率和飼料系數(shù))的影響有所不同。駱季安等研究了飼喂頻率對體質(zhì)量(26.86±1.69)g日本黃姑魚(Nibeajaponica)生長的影響，結(jié)果顯示2次/d組攝食率極顯著大于1次/d組，顯著大于3次/d組、4次/d組，3次/d組、4次/d組均顯著大于1次/d組；2次/d組、3次/d組、4次/d組食物轉(zhuǎn)化率均極顯著大于1次/d組，而2次/d組、3次/d組和4次/d組之間沒有顯著差異[17]。劉偉等探討了投喂頻率對初始體質(zhì)量為(16.13±0.13)g吉富羅非魚(Oreochromisniloticus)生長的影響，認(rèn)為1次/d組、2次/d組和3次/d組的投喂頻率均顯著影響吉富羅非魚飼料效率和攝食率[18]。朱曉芳等研究了投喂頻率對自制小型循環(huán)水系統(tǒng)養(yǎng)殖體質(zhì)量為(35.50±4.58)g珍珠龍膽石斑魚影響的養(yǎng)殖試驗，結(jié)果表明：在0～15 d、16～30 d、31～45 d各養(yǎng)殖階段內(nèi)，隨著投喂頻率的提高，飼料轉(zhuǎn)化效率呈現(xiàn)先顯著上升、接著顯著下降的趨勢[19]。在本試驗中，不同投喂頻率處理組對工廠化循環(huán)水養(yǎng)殖珍珠龍膽石斑魚日攝食率、飼料轉(zhuǎn)化效率和飼料系數(shù)均沒有產(chǎn)生顯著的影響(P>0.05)，類似的結(jié)果在麥鯪和南亞野鯪研究[14]中也有發(fā)現(xiàn)，但是本試驗結(jié)論與在花鱸[11]、日本黃姑魚[17]、吉富羅非魚[18]上的研究結(jié)果不一致，這可能與生長的水環(huán)境、實(shí)驗魚種類、養(yǎng)殖階段等條件不同有關(guān)。

3.2 不同投喂頻率對珍珠龍膽石斑魚血漿抗應(yīng)激酶活力的影響

堿性磷酸酶(AKP)是生物機(jī)體代謝過程中重要的調(diào)控金屬酶，能作為反映魚類應(yīng)激、脅迫的指示因子[20-21]。過氧化氫酶(CAT)是催化機(jī)體內(nèi)過氧化氫(H2O2)分解成水(H2O)和氧氣(O2)的重要酶，以保持機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定[22]。超氧化物歧化酶(SOD)為金屬酶家族，是硬骨魚類體內(nèi)重要的抗氧化性酶，可將機(jī)體內(nèi)過多的自由基轉(zhuǎn)化成水分子，從而保護(hù)機(jī)體免受氧化傷害[23]。陳文霞等研究了投喂頻率對凡納濱對蝦免疫酶活力的影響，結(jié)果表明投喂頻率5次/d、6次/d處理組堿性磷酸酶(AKP)、超氧化物歧化酶(SOD)活力較2次/d組、3次/d組和4次/d組高[24]。竇艷君等開展了不同投喂頻率對室內(nèi)工廠化車間養(yǎng)殖點(diǎn)帶石斑魚血漿抗氧化指標(biāo)的影響研究，結(jié)果顯示：第28 d時，1次/d、2次/d、3次/d投喂頻率處理組對血漿總超氧化物歧化酶(T-SOD)、過氧化氫酶(CAT)活力沒有顯著影響；第56 d時，1次/d組血漿T-SOD顯著高于3次/d組，最高值達(dá)到87.38 U/mL，而投喂頻率對血漿CAT活力無顯著影響；第84 d時，2次/d組的血漿T-SOD、CAT均顯著高于1次/d組、3次/d組[25]。在本試驗條件下，不同投喂頻率對工廠化循環(huán)水養(yǎng)殖珍珠龍膽石斑魚的堿性磷酸酶(AKP)、過氧化氫酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)活力均沒有產(chǎn)生顯著性差異變化(P>0.05)。本試驗結(jié)論與在流水養(yǎng)殖鞍帶石斑魚[12]上的研究結(jié)果相似，表明不同投喂頻率對工廠化循環(huán)水養(yǎng)殖珍珠龍膽石斑魚不會產(chǎn)生應(yīng)激脅迫作用，但是此試驗結(jié)果與在凡納濱對蝦[24]、點(diǎn)帶石斑魚[25]上研究結(jié)論存在一些差異，這可能是由不同的養(yǎng)殖模式、實(shí)驗對象和養(yǎng)殖時間等因素引起的。

4 結(jié)論

在本試驗條件下，不同投喂頻率(1次/d、2次/d、1次/2d)對工廠化循環(huán)水養(yǎng)殖珍珠龍膽石斑魚的特定生長率、肥滿度、相對增質(zhì)量、日增質(zhì)量、體質(zhì)量變異系數(shù)、日攝食率、飼料轉(zhuǎn)化效率、飼料系數(shù)以及堿性磷酸酶、過氧化氫酶和超氧化物歧化酶影響均無顯著性差異(P>0.05)，但是投喂頻率1次/2d組的成活率顯著高于1次/d組和2次/d組(P<0.05)，說明在飽食飼喂大規(guī)格珍珠龍膽石斑魚的過程中，可采用1次/2d的投喂頻率來提高工廠化循環(huán)水養(yǎng)殖珍珠龍膽石斑魚的成活率。