陳光宇 瞿昊宇 何 群 羅麗華 李路丹 謝夢洲*

（1 湖南省藥食同源功能性食品工程技術(shù)研究中心，湖南 長沙 410208；2 湖南中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)診斷研究所，湖南 長沙 410208；3 湖南口味王集團(tuán)有限責(zé)任公司，湖南 益陽 413000）

檳榔為棕櫚科植物檳榔（Areca Catechu L.）的干燥成熟種子，含生物堿0.3%～0.6%，以檳榔堿為主（0.1%～0.5%）。長期的臨床實(shí)踐證明，檳榔具有健胃消食、行氣利水、殺蟲瀉下、利濕除疸等功效。近年來，研究發(fā)現(xiàn)檳榔具有較好的興奮作用[1-4]，特別是口味王和成天下檳榔及口味王精制青果服用檳榔，備受消費(fèi)者喜愛和青睞[5-8]。但口味王和成天下檳榔、口味王精制青果服用檳榔的興奮作用與經(jīng)典的、公認(rèn)的、興奮作用最好的即溶咖啡飲料和紅牛維生素功能飲料究竟有何區(qū)別？口味王和成天下檳榔、口味王精制青果服用檳榔單次（短期）與多次（長期）興奮作用有何區(qū)別？口味王和成天下檳榔、口味王精制青果服用檳榔興奮作用的特色是什么？皆不清楚。故本實(shí)驗(yàn)通過觀察并尋找4種產(chǎn)品單次及多次服用興奮作用（小鼠自主活動(dòng)次數(shù)）與服用時(shí)間的相關(guān)性，為廣大消費(fèi)者進(jìn)一步深入了解、選擇和服用口味王和成天下檳榔及口味王精制青果檳榔提供依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 受試物樣品 口味王和成天下檳榔、口味王精制青果服用檳榔、即溶咖啡飲料、紅牛維生素功能飲料皆由湖南口味王集團(tuán)有限責(zé)任公司提供；蒸餾水本部門自制。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)ICR小鼠50只，雄雌各半，從湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司購進(jìn)，小鼠在SPF級(jí)動(dòng)物室喂養(yǎng)，空調(diào)恒溫（25±2）℃，相對濕度40%～60%，照明時(shí)間隨同自然變化；全價(jià)顆粒飼料從實(shí)驗(yàn)動(dòng)物專用飼料廠家購進(jìn)。

1.3 儀器設(shè)備 YLS-1A多功能小鼠自主活動(dòng)記錄儀（山東醫(yī)學(xué)科學(xué)院設(shè)備站產(chǎn)品）；YAZD-3/5/10/10不銹鋼電熱蒸餾水器（溫州標(biāo)諾儀器有限公司）、KM-250 DE中文液晶臺(tái)式超聲波清洗器（昆山美美超聲儀器有限公司）；YP-B50001電子天平（上海光正醫(yī)療儀器有限公司）、RHP-400型高速多功能粉碎機(jī)（浙江永康市榮浩工貿(mào)有限公司）。

1.4 造模試劑 0.4%戊巴比妥鈉，用重蒸餾水配制（臨用現(xiàn)配）。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法所用軟件為DPSv9.50標(biāo)準(zhǔn)版，具體統(tǒng)計(jì)學(xué)方法為數(shù)學(xué)建模。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 動(dòng)物分組 健康成年SPF級(jí)ICR小鼠，一級(jí)，體質(zhì)量18～22 g，由湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK（湘）2016-0002；動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)：43004700038539；實(shí)驗(yàn)單位使用許可證編號(hào)：SYXK（湘）2013-0005，小鼠50只，雄雌各半，隨機(jī)分成5組，每組10只，分別為口味王和成天下檳榔組、口味王精制青果檳榔組、咖啡飲料陽性對照組、紅牛維生素功能飲料陽性對照組、蒸餾水空白對照組。

2.2 給藥劑量 口味王和成天下檳榔、口味王精制青果檳榔皆制成提取濃縮液，灌胃量0.1 mL/10 g；給予樣品液體積為10 mL/kg；即溶咖啡飲料制成液體，灌胃量0.1 mL/10 g；給予樣品液體積為10 mL/kg；紅牛維生素功能飲料原液，灌胃量0.1 mL/10 g；給予樣品液體積為10 mL/kg；純化水灌胃量10 mL/kg。

2.3 4種樣品灌胃液體的制備方法

2.3.1 口味王和成天下檳榔、口味王精制青果檳榔 取10只小鼠單次灌胃用量的口味王和成天下檳榔及口味王精制青果檳榔產(chǎn)品，分別粉碎成絲狀粗粉，分別超聲提取2次，第1次超聲提取加50倍量蒸餾水超聲提取60 min，過濾，濾渣第2次超聲提取加40倍量蒸餾水超聲提取40 min，過濾，濾渣棄去，合并2次提取液，濾液50℃分別濃縮成灌胃用濃度。

2.3.2 即溶咖啡飲料 取10只小鼠單次灌胃用量的即溶咖啡飲品15 g，加278 mL 95℃蒸餾水，保溫下不斷攪拌30 min，冷至室溫，調(diào)成灌胃用濃度。

2.3.3 紅牛維生素功能飲料 取紅牛維生素功能飲料原液。2.4檳榔等5組樣品單次（短期）服用興奮作用觀察 小鼠灌胃給予樣品液后測定10 min時(shí)（0～10 min）小鼠自主活動(dòng)次數(shù)Y值、累積30 min后，再測定10 min內(nèi)（累積30 min～累積40 min） 小鼠自主活動(dòng)次數(shù)Y值，記錄各次測定結(jié)果，見表1，以Y平均值作直方圖，見圖1。

表1 檳榔等5組樣品單次（短期）服用興奮作用每段測定結(jié)果（n=10）

圖1 檳榔等5組樣品單次（短期）服用興奮作用Y平均值直方圖

由表1、圖1結(jié)果可知，95%置信區(qū)間重疊，差別無統(tǒng)計(jì)意義，小鼠灌胃給予樣品液后10 min時(shí)（0～10 min）Y值由大到小排序?yàn)椋嚎谖锻蹙魄喙麢壚啤悼谖锻鹾统商煜聶壚啤旨慈芸Х蕊嬈贰旨t牛維生素功能飲料〉蒸餾水（類似于給藥前小鼠自主活動(dòng)次數(shù)）；小鼠灌胃給予樣品液后累積30 min～累積40 min時(shí)Y值由大到小排序?yàn)椋杭慈芸Х蕊嬈贰悼谖锻蹙魄喙麢壚啤悼谖锻鹾统商煜聶壚啤导t牛維生素功能飲料≈蒸餾水；口味王精制青果檳榔、即溶咖啡飲品興奮作用皆較強(qiáng)（95%可信區(qū)間重疊，差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義），但口味王精制青果檳榔興奮作用10 min內(nèi)興奮作用最佳，即溶咖啡飲品30～40 min內(nèi)興奮作用最佳；口味王和成天下檳榔、口味王精制青果檳榔和紅牛維生素功能飲料10 min內(nèi)Y值優(yōu)于30～40 min內(nèi)Y值；即溶咖啡飲品30 min內(nèi)Y值優(yōu)于10 min內(nèi)Y值。

2.5 檳榔等5組樣品多次（長期）服用興奮作用觀察 小鼠連續(xù)灌胃給予樣品液7 d，于末次給予樣品液后30 min時(shí)記錄10 min內(nèi)小鼠的自主活動(dòng)次數(shù)，將原始數(shù)據(jù)首先進(jìn)行異常值檢驗(yàn)，舍去異常值，再進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，滿足正態(tài)性（P〉0.05），最后進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，即溶咖啡飲品偏差較大，導(dǎo)致5組間方差不齊，故只能采用95%置信區(qū)間重疊法統(tǒng)計(jì)分析，實(shí)驗(yàn)過程中，各種因素導(dǎo)致小鼠死亡，所以動(dòng)物數(shù)不一致，結(jié)果見表2。

表2 檳榔等5組樣品多次（長期）服用興奮作用測定結(jié)果

由表2結(jié)果可知，95%置信區(qū)間重疊，差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，故口味王精制青果檳榔、即溶咖啡飲品、紅牛維生素功能飲料興奮作用（Y平均值）相同，口味王和成天下檳榔與口味王精制青果檳榔、即溶咖啡飲品、紅牛維生素功能飲料興奮作用（Y平均值） 差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，所以檳榔等5組樣品多次（長期）服用興奮作用（Y平均值）排序?yàn)椋嚎谖锻鹾统商煜聶壚啤悼谖锻蹙魄喙麢壚啤旨慈芸Х蕊嬈贰旨t牛維生素功能飲料〉蒸餾水。

2.6 檳榔等5組樣品對小鼠戊巴比妥鈉睡眠潛伏期及睡眠持續(xù)時(shí)間的影響 小鼠連續(xù)灌胃給予樣品液7 d，于末次給予樣品液后30 min時(shí)，各小鼠腹腔注射戊巴比妥鈉20 mg/kg，觀察小鼠的睡眠潛伏期及睡眠持續(xù)時(shí)間（從注射戊巴比妥鈉到翻正反射消失所需時(shí)間為睡眠潛伏期，從翻正反射消失到其恢復(fù)的時(shí)間為睡眠持續(xù)時(shí)間），記錄結(jié)果，采用95%可信區(qū)間重疊法計(jì)算誤差，見表3。

表3 檳榔等5組樣品多次（長期）服用興奮作用測定結(jié)果（x±s）

由表3結(jié)果可知如下情況：（1） 各組睡眠潛伏期：口味王和成天下檳榔與口味王精制青果檳榔、紅牛功能飲料95%可信區(qū)間未重疊，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，口味王精制青果檳榔與紅牛維生素功能飲料95%可信區(qū)間重疊，差別無統(tǒng)計(jì)意義，口味王和成天下檳榔、口味王精制青果檳榔、紅牛維生素功能飲料與蒸餾水95%可信區(qū)間未重疊，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，故各組睡眠潛伏期由長到短為：口味王和成天下檳榔〉口味王精制青果檳榔≈紅牛功能飲料〉蒸餾水。

（2）各組睡眠持續(xù)時(shí)間：各組95%可信區(qū)間皆未重疊，差別皆有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，故各組睡眠持續(xù)時(shí)間由短到長為：口味王和成天下檳榔〉口味王精制青果檳榔〉紅牛功能飲料〉蒸餾水。

（3）即溶咖啡飲品小鼠雄雌差別太大，睡眠潛伏期：雄性未睡眠；雌性與蒸餾水相當(dāng)（3.904 min）；睡眠持續(xù)時(shí)間：雄性未睡眠；雌性睡不醒。

3 小結(jié)與討論

3.1 給藥劑量的確定 預(yù)實(shí)驗(yàn)中對小鼠灌胃劑量進(jìn)行了探索，研究了3個(gè)劑量，即人體服用劑量、人體服用二分之一劑量、人體服用四分之一劑量，發(fā)現(xiàn)口味王和成天下檳榔與口味王精制青果檳榔采用人體服用四分之一劑量時(shí)興奮作用最佳，劑量增加反而興奮作用下降；而即溶咖啡飲品和紅牛功能飲料采用人體服用二分之一劑量時(shí)興奮作用最佳，劑量減少興奮作用下降。3.2測定時(shí)間的確定 文獻(xiàn)[3]中系小鼠每天灌胃1次，連續(xù)給藥7 d后30 min時(shí)測定10 min內(nèi)小鼠自主活動(dòng)次數(shù)，預(yù)試中發(fā)現(xiàn)，每種樣品小鼠自主活動(dòng)次數(shù)最大值的時(shí)間不同，同一樣品不同時(shí)間測定的小鼠自主活動(dòng)次數(shù)差別也很大，故不同樣品設(shè)幾個(gè)時(shí)間測定小鼠自主活動(dòng)次數(shù)才能得到客觀、公正的可比性結(jié)果。

3.3 給藥劑型的分析 口味王和成天下檳榔、口味王精制青果檳榔、紅牛維生素功能飲料3種樣品灌胃液體為溶液型液體藥劑，因而興奮作用起效快，而即溶咖啡飲品系混懸液，內(nèi)容物有一個(gè)溶出過程，所以興奮作用起效慢。

3.4 單次與多次的意義 單次反映短期服用的興奮作用效果，多次反映長期服用的興奮作用效果，在第2次服用時(shí)第1次服用的樣品尚未出全排除體外，有一定量的蓄積，連續(xù)服用后興奮作用達(dá)到穩(wěn)態(tài)，測定誤差減少；不同時(shí)間段測得的結(jié)果差別較大，單次測得的結(jié)果不能作為判斷各樣品興奮作用的優(yōu)劣。本實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析采用95%可信區(qū)間重疊法進(jìn)行比較，比完全隨機(jī)t檢驗(yàn)法更加直觀、清晰、一目了然，特別適用于多組樣本相互之間的比較分析，值得推廣。