楊修鎮(zhèn) 張呈軍 劉少寧 陳玲 （山東省獸藥質(zhì)量檢驗所 山東省畜產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)測與風險評估重點實驗室 濟南 250022）

?

氫化物發(fā)生－原子熒光光譜法測定雄黃中三氧化二砷的含量

楊修鎮(zhèn) 張呈軍 劉少寧 陳玲 （山東省獸藥質(zhì)量檢驗所 山東省畜產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)測與風險評估重點實驗室 濟南 250022）

為完善雄黃質(zhì)量標準，采用氫化物發(fā)生－原子熒光光譜法對雄黃中三氧化二砷的含量測定進行了研究。載流為3.0%鹽酸溶液，還原劑為含0.5%氫氧化鉀的1%硼氫化鉀溶液，氬氣載氣流量為600ml/ml，砷空心陰極燈電流為60 mA。砷元素進樣濃度在0~100ng/ml范圍內(nèi)與熒光強度值呈良好的線性關系(r2＝0.9999)；樣品平均回收率為96.2%，RSD為1.9%。本方法簡便、準確度高、重復性好，為進一步控制止痢散的質(zhì)量提供了依據(jù)。

氫化物發(fā)生－原子熒光光譜法 雄黃 三氧化二砷

雄黃收載于《中華人民共和國獸藥典》2010年版2部，具有解毒殺蟲，燥濕殺蟲的功能[1]。雄黃屬有毒中藥材，內(nèi)服宜慎，不可久用，孕畜禁用。其主要成分是二硫化二砷，其中夾雜有劇毒可溶性砷鹽三氧化二砷[2]。三價砷可與多種重要的巰基酶結(jié)合，導致酶失活，從而阻止細胞的正常呼吸和代謝，造成細胞損害[3]。雄黃受熱會部分轉(zhuǎn)化為三氧化二砷[4]，盡管雄黃的粉碎采用水飛法[5]，藥典對三氧化二砷的量仍進行嚴格控制。雄黃標準中三氧化二砷檢查法為古蔡氏法，采用與標準砷斑所顯顏色比較的方法進行控制，這種方法無法精確定量且當樣品所顯砷斑與標準砷斑較為接近時僅憑肉眼是難以判定的。為了更好的控制本品質(zhì)量，本試驗對雄黃中三氧化二砷的含量測定方法進行了研究。

1 儀器和材料

Afs-930雙道原子熒光光度計(北京吉天儀器有限公司)，1000μg/ml砷標準儲備液(國家有色金屬及電子材料分析測試中心，12530-1)。雄黃(批號20160301、20160324、20160514、20170801、20170901、20171001、20171112購自濟南建聯(lián)中藥店，批號160401、160902、161203購自濟南漱玉平民大藥房。所有雄黃均經(jīng)鑒定為正品)。鹽酸為優(yōu)級純，水為超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 儀器條件 根據(jù)參考文獻[6]方法，載流為3.0%鹽酸溶液，還原劑為含0.5%氫氧化鉀的1%硼氫化鉀溶液，氬氣載氣流量為600ml/min，砷空心陰極燈電流為60mA。

2.2 供試品溶液制備 根據(jù)參考文獻[1]方法，取本品適量，研細，精密稱取0.94g，加稀鹽酸(取鹽酸234ml，加水稀釋至1000ml，即得)20ml，不斷攪拌30min，濾過，殘渣用稀鹽酸洗滌2次，每次10ml，攪拌10min。洗液與濾液合并，置500ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，精密量取1ml，置200ml量瓶中加入硫脲2g，加3.0%鹽酸溶液至刻度，搖勻，放置30min以上，即得。

2.3 空白樣品溶液制備 除不取樣品外，其余按供試品溶液制備方法制備空白樣品溶液。

2.4 工作曲線的繪制 取砷標準儲備液，用3.0%的鹽酸溶液逐級稀釋成含砷0、10、20、40、80、100ng/ml的系列工作標準溶液，每100ml砷工作標準溶液加入硫脲1g，搖勻，放置30min以上[6]，在上述儀器條件下進行測定，以熒光強度值(y)為縱坐標，砷工作標準溶液(x，ng/ml)為橫坐標，進行線性回歸分析，回歸方程為：y＝143.75x－8.1767(r2＝0.9999)，結(jié)果表明砷元素進樣濃度在0~100 ng/ml范圍內(nèi)與熒光強度值呈良好的線性關系。

附圖 砷元素進樣濃度與熒光強度值曲線圖

2.5 精密度試驗 （1）儀器精密度試驗：取10ng/ml砷工作標準溶液，注入原子熒光光度計，在上述儀器條件下進行測定，連續(xù)測定11次，熒光強度值RSD為1.2%，表明有儀器有良好的精密度。（2）重復性試驗：分別稱取同一雄黃樣品，按供試品溶液制備項制備樣品溶液，制備6份，分別注入原子熒光光度計，在上述儀器條件下進行測定，三氧化二砷含量(以砷計)RSD為1.5%，表明重復性好。

2.6 回收率試驗 分別取已知三氧化二砷含量的雄黃0.47g，精密稱定，加入1000μg/ml砷標準儲備液1.20ml，自“加稀鹽酸20ml，不斷攪拌30min”起按供試品溶液制備項制備樣品溶液，平行6份，注入原子熒光光度計，在上述儀器條件下進行測定，三氧化二砷(以砷計)平均回收率為96.2%，RSD為1.9%，結(jié)果見表1。

表1 回收率試驗 (mg/g、g、mg、%)

2.7 檢出限與定量限 取空白樣品溶液，注入原子熒光光度計，在上述儀器條件下進行測定，連續(xù)測定11次，計算3倍11次空白樣品溶液測量值的標準偏差與工作曲線的斜率的比值[7]，得檢出限為0.01mg/g。計算10倍11次空白樣品溶液測量值的標準偏差與工作曲線的斜率的比值，得定量限為0.03mg/g。

2.8 耐用性試驗 （1）供試品溶液的穩(wěn)定性：取同一供試品溶液，于制備后0、1、2、4、8、16、24、48h分別注入原子熒光光度計，在上述儀器條件下進行測定，熒光強度值的RSD為1.5%，表明樣品溶液在48 h內(nèi)穩(wěn)定。（2）儀器條件的微小變動：取同一供試品溶液，將載流調(diào)整為2.5%、3.5%鹽酸溶液；還原劑調(diào)整為含0.45%氫氧化鉀的0.95%硼氫化鉀溶液、含0.55%氫氧化鉀的1.05%硼氫化鉀溶液；將載氣流量調(diào)整為590、610ml/min；砷空心陰極燈電流調(diào)整為55、65mA，分別進行測定，同時在相應條件下重繪標準曲線，計算三氧化二砷(以砷計)含量。三氧化二砷(以砷計)含量的相對相差為1.9%，表明儀器條件的微小變動對測量結(jié)果無明顯影響。（3）供試品溶液制備條件的微小變動：取同一雄黃樣品將稀鹽酸用量調(diào)整±5%，攪拌時間調(diào)整±5%，制備供試品溶液，分別進行測定，三氧化二砷(以砷計)含量的相對相差為1.5%，表明供試品溶液制備條件的微小變動對測量結(jié)果無明顯影響。

2.9 10批樣品含量測定 取不同批號的雄黃，按供試品溶液制備方法制備樣品溶液，注入原子熒光光度計，在上述儀器條件下進行測定，計算雄黃中三氧化二砷的含量(以砷計)。10批雄黃中三氧化二砷(以砷計)含量在0.75~4.32mg/g之間，結(jié)果見表2。

表2 10批樣品含量測定結(jié)果 (mg/g)

3 討論與小結(jié)

（1）測定雄黃中三氧化二砷的含量應首先排除二硫化二砷的干擾，傳統(tǒng)的干消解法、濕消解法以及微波消解法都無法有效實現(xiàn)三氧化二砷與二硫化二砷的分離，利用三氧化二砷易溶于稀鹽酸二硫化二砷不溶于稀鹽酸的性質(zhì)，參考雄黃標準中三氧化二砷檢查法制備供試品溶液避免了消解不完全趕酸不徹底等因素的干擾，回收率大大優(yōu)化了。（2）古蔡氏法系以碘化鉀、氯化亞錫將高價砷還原為三價砷然后與鋅粒和鹽酸產(chǎn)生的新生態(tài)氫生成砷化氫氣體，再與溴化汞試紙生成黃色至橙色的色斑，色斑的深淺與砷的量呈一定的關系。該方法易于操作，但無法精確定量且用肉眼觀察難免受主觀影響。氫化物發(fā)生－原子熒光光譜法測砷系在鹽酸介質(zhì)中，硼氫化鉀將砷轉(zhuǎn)化為砷化氫，以氬氣作載氣將砷化氫導入石英爐原子化器中進行原子化，以砷特種空心陰極燈激發(fā)出熒光，熒光強度在一定范圍內(nèi)與砷的含量成正比。該方法可精確定量且簡便、準確、重現(xiàn)性好。雄黃標準中三氧化二砷檢查法規(guī)定供試品所顯砷斑顏色不得深于標準砷斑，但20170901批樣品在使用古蔡氏法檢查時樣品所顯砷斑與標準砷斑較為接近難以判定結(jié)果。采用氫化物發(fā)生－原子熒光光譜法測定20170901批樣品三氧化二砷(以砷計)含量為4.32mg/g，并未超過標準的要求。（3）本文建立的氫化物發(fā)生－原子熒光光譜法測定雄黃中三氧化二砷的含量的方法，簡便、準確度高、重復性好，為進一步控制雄黃的質(zhì)量提供了依據(jù)。

[1] 中華人民共和國獸藥典委員會. 中華人民共和國獸藥典[S]. 2015(2): 492-493.

[2] 劉小蘭. 中國藥典雄黃炮制方法與中成藥三氧化二砷含量[J]. 北京中醫(yī), 2000, 19(1): 42-44.

[3] 徐智, 黃可龍﹒砷的代謝及毒性機制的相關性研究[J]. 藥學專論, 2009, 18(12): 19-21.

[4] 潘雪英. 探討溫度對雄黃中三氧化二砷含量的影響[J]. 中國藥師, 2005, 8(9): 797-799.

[5] 原思通, 張廣強. 雄黃炮制新工藝的探討[J]. 中成藥, 1996, 18(1): 22-23.

[6] 方躍強, 馬冰潔, 徐群英等. 氫化物原子熒光法測定生活飲用水中砷的不確定度評價[J]. 中國衛(wèi)生檢驗雜志, 2008, 18(3): 542-543.

[7] 王濱, 王耀成, 江永圣. 氫化物發(fā)生原子熒光法測定食品中無機砷[J]. 理化檢驗－化學分冊, 2004, 40(11): 687-688.

（2018–01–03）

S853.92

A

1007-1733(2018)06-0012-02