王鑫，申傳安，趙東旭

（1.錦州醫(yī)科大學解放軍總醫(yī)院第一附屬醫(yī)院培養(yǎng)基地，遼寧 錦州121001；2.解放軍總醫(yī)院第一附屬醫(yī)院 燒傷整形科，北京 100048）

醫(yī)學生物的實驗研究一般由分子細胞生物研究到動物實驗，最終進入臨床實驗，其中動物實驗的研究通常是模擬人體實驗，是進行臨床實驗不可替代的準備環(huán)節(jié)[1]。在動物實驗研究中，大鼠具有經濟實惠、容易取得、抗病能力強、繁殖快、方便飼養(yǎng)等優(yōu)點，經常被作為醫(yī)學疾病實驗模型研究對象。創(chuàng)面組織修復研究領域有眾多關于大鼠創(chuàng)面模型的報道[2-3]，然而嚙齒類動物深度創(chuàng)面的愈合方式主要靠皮膚收縮，與人類創(chuàng)面通過肉芽組織形成和表皮細胞再生的愈合機制不同[4]。另外，大鼠身體柔韌，可以舔咬自身創(chuàng)面，其創(chuàng)面敷料、移植皮片及縫合線容易被咬掉。既往研究應用胸骨鋼絲阻隔圈，避免皮膚攣縮和自咬現象影響創(chuàng)面實驗效果[5]。本實驗就具體的實驗操作細節(jié)再次進行深入探究。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及分組

選取健康成年的清潔級SD雌性大鼠24只，體重230～250 g，由解放軍總醫(yī)院第一附屬醫(yī)院動物實驗室提供。隨機分為A、B、C組，每組8只。A組為傳統(tǒng)抗攣縮創(chuàng)面并進行植皮；B組為改良方法復制創(chuàng)面并進行植皮；C組為空白對照，為改良方法復制創(chuàng)面但不植皮。

1.2 主要儀器

采用直徑0.7 mm胸骨鋼絲制成3.6 cm×3.6 cm的鋼絲框，4號絲線，7號絲線，縫合針，手術器械。

1.3 動物創(chuàng)面模型的復制

實驗大鼠經腹腔注射3%戊巴比妥鈉（0.10～0.15 ml/100 g）麻醉，背部涂抹溫肥皂水，用剃刀刮毛，用Mark筆在背部畫邊長為3.6 cm的正方形。A組位置標記在背部近尾端（見圖1A）；B組位置標記在背部近頭端（見圖1B）；C組為空白對照，創(chuàng)面位置同B組，不進行植皮。碘伏消毒2遍，鋪無菌洞巾，用手術刀切開皮膚，剪下標記的正方形皮膚，創(chuàng)面暴露至深筋膜層，用生理鹽水紗布包裹所剪皮膚備用。另外，將3 cm×3 cm紗布用生理鹽水浸濕后，覆蓋創(chuàng)面進行保護。將滅菌的3.6 cm×3.6 cm鋼圈埋于創(chuàng)緣皮膚下。A組用4號絲線直接縫合一圈，縫針由皮膚外側穿透皮膚，由皮膚內側出針越過鋼絲，再從內側進針穿出皮膚，在外側打結剪線，即可將鋼圈固定，針距約6 mm（見圖2A）。B組用7號絲線改良縫合方法縫合鋼圈，先行單純固定鋼圈縫合（同A組），在完成打結固定后暫不剪線，越過創(chuàng)緣由內側再次進針，進針點在鋼圈外側，穿透皮膚后由外側出針，再次進行打結后剪線（見圖2B）；C組縫合鋼圈同B組（見圖2C）。A、B組均縫合24針固定鋼圈。修剪所取皮膚的皮下組織并制成1∶6放大的MEEK微型皮片，剪下3.6 cm×3.6 cm粘貼有邊長為3 mm小皮片的MEEK縐紗，用生理鹽水浸濕后回植創(chuàng)面。用0號絲線在靠近4個角和中心部的無皮片區(qū)進行縫合，以固定縐紗。C組縫合鋼圈后不植皮，直接油紗覆蓋。3組最后用多層紗布覆蓋后再進行打包固定。術后每只大鼠腹腔注射10 ml生理鹽水補液，單籠飼養(yǎng)。

圖1 A、B組大鼠創(chuàng)面位置

圖2 3組大鼠創(chuàng)面抗攣縮框縫合效果

1.4 觀察指標

1.4.1 創(chuàng)面收縮情況 術后7、14和21 d對創(chuàng)面進行拍照，運用ImageJ Fiji圖像分析軟件測量創(chuàng)面面積，計算創(chuàng)面收縮率。創(chuàng)面收縮率=四周皮膚越過鋼圈生長面積/原創(chuàng)面面積×100%。

1.4.2 鋼圈脫出及線結脫落情況 術后21 d用ImageJ Fiji圖像分析軟件測量每只大鼠脫出的鋼絲圈長度，計數剩余線結數。

1.4.3 移植皮片生長情況 術后7、14和21 d觀察移植皮片存活及生長情況，計算術后21 d的MEEK皮片生長覆蓋創(chuàng)面面積。

1.5 統(tǒng)計學方法

數據分析采用SPSS 22.0統(tǒng)計軟件，計量資料以均數±標準差（±s）表示，比較用t檢驗、單因素方差分析或重復測量設計的方差分析，兩兩比較用LSD-t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 各組大鼠創(chuàng)面收縮率比較

A、B、C組術后7、14和21 d創(chuàng)面收縮率比較，采用重復測量設計的方差分析，結果：①不同時間點創(chuàng)面收縮率有差別（F=121.668，P=0.000）；②3組創(chuàng)面收縮率有差別（F=8.685，P=0.002），A組較B組創(chuàng)面收縮率高（P＜0.05），相對容易收縮；B組與C組的創(chuàng)面收縮率比較，差異無統(tǒng)計學（P＞0.05）；③3組創(chuàng)面收縮率變化趨勢有差別（F=7.408，P=0.000）。見附表和圖3。

2.2 3組大鼠鋼圈脫出及線結脫落情況

2.2.1 鋼圈脫出 術后21 d，A組大鼠鋼圈脫出嚴重，鋼絲脫出總長度35 cm；B組鋼圈基本保持原位，少量邊角脫出，鋼絲脫出總長度16 cm；C組情況與B組相似，鋼絲脫出總長度13 cm。

附表 3組大鼠各時間點創(chuàng)面收縮率比較（n =8，%，±s）

附表 3組大鼠各時間點創(chuàng)面收縮率比較（n =8，%，±s）

A組 11.7±5.8 27.4±4.4 58.2±14.7 B 組 8.5±2.5 27.0±9.2 37.2±8.0

圖3 3組大鼠創(chuàng)面收縮率變化趨勢 （n =8）

2.2.2 線結脫落 A組線結大量脫落，剩余線結（8.4±8.3）個；B組少許線結脫落，剩余線結（17.4±6.1個），C組剩余線結（20.0±4.8）個。3組剩余線結數比較，經方差分析，差異有統(tǒng)計學意義（F=6.864，P=0.005）。進一步兩兩比較經LSD-t檢驗，A組剩余線結數低于B、C組（P＜0.05）；B組與C組剩余線結數比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

2.3 3組大鼠移植皮片生長情況

術后7 d，A、B組皮片成活（見圖4A、5A）。術后14 d，A組皮片無明顯生長，B組皮片生長良好（見圖4B、5B）。術后21 d，A組皮片仍無生長，部分大鼠皮片被咬掉脫落，殘余移植皮片覆蓋創(chuàng)面，面積（1.9±0.5）cm2（見圖4C）；B組移植皮片進一步生長，逐漸覆蓋部分創(chuàng)面，面積（4.5±0.4）cm2（見圖5C），經獨立樣本t檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（t=4.033，P=0.001），B組覆蓋創(chuàng)面面積大于A組。C組為空白對照，未進行植皮，創(chuàng)面呈肉芽組織狀態(tài)（見圖6）。

圖4 A組術后各時間點移植皮片生長情況

圖5 B組術后各時間點移植皮片生長情況

圖6 C組術后各時間點創(chuàng)面修復情況

3 討論

創(chuàng)傷修復實驗動物模型常用的動物有大鼠、小型豬、兔等[6-7]。大鼠具有體型小、飼養(yǎng)方便、繁殖快、價格相對較低等優(yōu)點，因而成為最常用的實驗動物。有多種在大鼠背部皮膚復制全層缺損模型的方法：余剛等[8]提出C形阻隔圈；張穎等[9]應用硅膠環(huán)來固定創(chuàng)面；柴政[10]將塑料環(huán)植入大鼠背部皮膚缺損，以復制慢性皮膚潰瘍創(chuàng)面模型；王如然等[11]用直接打孔的方式在大鼠背部復制潰瘍創(chuàng)面，各種方法均有優(yōu)缺點。尚玉茹等[5]利用胸骨鋼絲固定創(chuàng)緣，復制抗攣縮創(chuàng)面模型。采用移植異體皮覆蓋創(chuàng)面，移植后的異體皮可以在創(chuàng)面存活生長，存活的異體皮具有占位效應，一定程度減小四周創(chuàng)緣的攣縮。3周后異體皮因排異反應脫落，創(chuàng)面開始出現明顯攣縮。本實驗基于上述研究結果，對創(chuàng)面的復制過程進一步細化研究。本實驗采用MEEK植皮技術所移植皮片可以存活，但每個微型皮片面積較小，皮片間有一定距離。與空白對照組創(chuàng)面邊緣收縮情況比較，MEEK植皮在術后3周不會因為皮片的成活而產生占位效應，進而抑制創(chuàng)緣向中心收縮。術后1周，3組大鼠創(chuàng)緣四周出現收縮趨勢，隨時間推移進一步收縮；術后3周明顯攣縮，A組收縮最嚴重，B、C組大鼠收縮程度較A組輕。結果表明，B、C組采用的改良方法對無異體皮覆蓋的全層損傷創(chuàng)面有提高抗攣縮的效果。

本研究通過改良復制創(chuàng)面的位置和縫合方法，有效地提高全層皮膚缺損抗攣縮模型的穩(wěn)定性。動物實驗中大鼠的依從性差，通常會自咬、自舔創(chuàng)面，改變創(chuàng)面位置可以有效避免此類情況發(fā)生，為創(chuàng)面的生長消除不利因素。術后3周，B組皮片生長情況優(yōu)于A組，表明改良方法有利于植皮修復實驗的進行。大鼠在自咬打包敷料及縫線時，可能造成鋼圈脫落。鋼圈脫落有2種方式：脫出體外和脫出線結但仍在皮下，2種方式脫出的鋼圈均不能發(fā)揮抗攣縮作用。鋼圈脫落的另一種原因是因為皮膚攣縮而掙脫線結。更換較粗縫線提高縫線的強度和改變縫合方式，將鋼圈更加牢靠地固定于皮下，能有效避免縫線和鋼圈脫落，起到抗攣縮作用。

復制合適的大鼠創(chuàng)面模型與植皮修復創(chuàng)面的療效關系密切[12]。對復制創(chuàng)面模型的細節(jié)進行深入探究，更有利于實際操作。成熟的復制動物模型技術可為創(chuàng)面修復實驗順利進行提供便利。