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        不同布氏菌病活疫苗免疫抗體消長規(guī)律試驗(yàn)

        2018-12-19 02:41:14趙丹彤吳梅花侯振宇楊春魯燕吳詠梅范秀麗魏學(xué)峰劉國英
        畜牧獸醫(yī)科學(xué) 2018年17期
        關(guān)鍵詞:布氏頭份布魯氏菌

        趙丹彤,吳梅花,侯振宇,楊春,魯燕,吳詠梅,范秀麗,魏學(xué)峰,劉國英

        (金宇保靈生物藥品有限公司,呼和浩特 010030)

        0 引言

        布魯氏菌?。╞rucellosis 又稱布氏菌病或布氏桿菌病,簡稱“布病”)是由布魯氏菌(brucella)引起的人畜共患傳染病,廣泛分布于世界各地,多種動(dòng)物和禽類對(duì)布魯氏菌均有不同程度的易感性[1]。自然感染以羊、牛和豬常見,其特征為生殖器官、胎膜及多種器官組織發(fā)炎、壞死和肉芽腫的形成,在臨床上主要表現(xiàn)為波浪熱、流產(chǎn)、不孕、睪丸及關(guān)節(jié)炎等癥狀[2]。但近年羊布氏菌病感染率呈明顯上升趨勢,不但嚴(yán)重危害我國畜牧業(yè)(包括養(yǎng)羊業(yè)在內(nèi))的健康發(fā)展,還嚴(yán)重威脅國內(nèi)部分地區(qū)人們的健康、食品安全以及全社會(huì)的公共衛(wèi)生安全。

        1 材料與方法

        1.1 疫苗

        實(shí)驗(yàn)室制備的布氏菌病活疫苗(Rev.1株),批號(hào)為53003,布氏菌病活疫苗(S2株),批號(hào)為5393032,均由金宇保靈生物藥品有限公司提供。

        1.2 檢測試劑

        布魯氏菌病試管凝集試驗(yàn)抗原、陽性對(duì)照、陰性對(duì)照、布魯氏菌病虎紅凝集試驗(yàn)抗原,均購自中國獸醫(yī)微生物菌種保藏管理中心。

        1.3 試驗(yàn)動(dòng)物

        試驗(yàn)動(dòng)物來源于定點(diǎn)供應(yīng)基地,經(jīng)布魯氏菌病虎紅平板凝集試驗(yàn)檢測為陰性的綿羊70只。

        1.4 試驗(yàn)分組與免疫

        第1組為布氏菌活病疫苗(Rev.1株)免疫組,共計(jì)30只綿羊。將疫苗用布氏菌活病疫苗(Rev.1株)專用稀釋液溶解稀釋至20頭份/mL(按每頭份為1滴,1滴約0.05 mL計(jì)算),用專用滴眼器進(jìn)行眼結(jié)膜接種,每只羊滴眼1頭份(0.05 mL),含1×109CFU/頭份。

        第2組為布氏菌病活疫苗(S2株)免疫組,共計(jì)30只綿羊。將疫苗用生理鹽水溶解稀釋至1頭份/mL,進(jìn)行口服免疫,每只羊口服1頭份,含1×1010CFU/頭份。

        第3組為空白對(duì)照組,共計(jì)10只,不接種疫苗,相同條件下隔離飼養(yǎng)。

        1.5 試驗(yàn)步驟

        所有試驗(yàn)羊分別于免疫前、免疫后14、21、28、49、60、90、120、150 d采血,分離血清,采用虎紅平板凝集試驗(yàn)(RBT)和試管凝集試驗(yàn)(SAT)試驗(yàn)進(jìn)行抗體測定。

        2 結(jié)果

        2.1 虎紅平板凝集試驗(yàn)(RBT)抗體檢測

        2.1.1 判定標(biāo)準(zhǔn)

        虎紅平板凝集試驗(yàn)是國內(nèi)外常用的一種診斷技術(shù)。在一次性虎紅平板凝集反應(yīng)板上加0.03 mL被檢血清,再加入RBPT抗原0.03 mL,充分混勻,在5 min內(nèi)觀察結(jié)果,出現(xiàn)凝集即為陽性。

        2.1.2 檢測結(jié)果

        2組疫苗免疫后14 d,檢測抗體陽性率均能達(dá)到70%以上,免疫后21~28 d達(dá)到抗體最高峰,120 d下降至20%以下?;⒓t平板凝集試驗(yàn)見圖1,檢測結(jié)果見表1,2種疫苗免疫后抗體消長情況見圖2。

        表1 虎紅平板凝集試驗(yàn)(RBT)檢測結(jié)果 單位:%

        2.2 試管凝集試驗(yàn)(SAT)抗體檢測

        2.2.1 判定標(biāo)準(zhǔn)

        將被檢血清用生理鹽水倍比稀釋,從1∶25至1∶3 200依次稀釋成不同的稀釋度,然后加入等量適當(dāng)稀釋的布魯氏菌凝集反應(yīng)抗原,混勻,放37 ℃溫箱中18~20 h,取出溫室放2 h后觀察結(jié)果,綿羊、山羊、豬和犬等家畜為1∶50,“++”以上為陽性。

        圖1 虎紅平板凝集試驗(yàn)

        圖2 2種疫苗免疫后抗體的消長情況

        2.2.2 檢測結(jié)果

        兩組疫苗免疫后21~28 d,檢測抗體達(dá)到抗體高峰,且Rev.1株疫苗組在21 d抗體滴度達(dá)到最高值1∶3 200,但S2株疫苗組一直未達(dá)到1∶3 200。試管凝集試驗(yàn)見圖3,檢測結(jié)果見表2,2種疫苗免疫后抗體消長情況見圖4。

        表2 試管凝集試驗(yàn)(SAT)檢測結(jié)果 單位:%

        圖3 試管凝集試驗(yàn)

        圖4 2種疫苗免疫后抗體的消長情況

        3 討論與結(jié)論

        免疫結(jié)果表明,2種疫苗接種羊只后均沒有出現(xiàn)明顯不良反應(yīng)。布氏菌活病疫苗(Rev.1株)免疫14 d后,抗體陽性率達(dá)到93%,21~28 d抗體達(dá)到高峰,抗體陽性率平均為97%,49 d后抗體逐漸下降,開始轉(zhuǎn)陰,90 d抗體平均陽性率下降至40%,轉(zhuǎn)陰率約為50%,210 d抗體幾乎全部轉(zhuǎn)陰(抗體陽性率3%)。布氏菌病活疫苗(S2株)免疫14 d后,抗體陽性率達(dá)到70%,21~28 d抗體達(dá)到高峰,平均79%,49 d后抗體逐漸下降,開始轉(zhuǎn)陰,90 d抗體平均陽性率下降至13%,210 d抗體幾乎全部轉(zhuǎn)陰(抗體陽性率7%)[3]。

        結(jié)果表明,2種疫苗免疫羊只后均產(chǎn)生較好的免疫效果。免疫14~120 d抗體消長期間,布氏菌活病疫苗(Rev.1株)比布氏菌病活疫苗(S2株)抗體陽性率高20%,而且羊只接種布氏菌病活疫苗(Rev.1株)后,抗體轉(zhuǎn)陽快,轉(zhuǎn)陽率高,轉(zhuǎn)陰快,便于鑒別疫苗的免疫和自然感染,有利于布病凈化。

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