余忠華 ，何世明 ，塔英 ，吳錦波 ，林寶山 ，羅昌俊 ，譚武 ，黎軍

（1.四川省阿壩州畜牧科學(xué)技術(shù)研究所，四川 紅原 624402；2.四川省阿壩州動物疫病預(yù)防控制中心，四川 馬爾康 624000；3.四川省紅原縣農(nóng)業(yè)畜牧和水務(wù)局，四川 紅原 624400；4.四川省阿壩縣農(nóng)業(yè)畜牧和水務(wù)局，四川 阿壩 624600）

羊棘球蚴?。òx?。┦且环N嚴(yán)重危害人體健康，制約畜牧業(yè)發(fā)展的重要人畜共患寄生蟲病[1]。該病重則直接引起牲畜死亡，輕則降低牲畜生產(chǎn)性能、增加飼養(yǎng)成本[2]。為了更好地防制該病，本試驗(yàn)項(xiàng)目組開展了羊棘球蚴（包蟲）病基因工程疫苗（Eg95）免疫效果評估研究，旨在為川西北高寒牧區(qū)西藏羊的包蟲病防控工作提供指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動物 本試驗(yàn)在阿壩州的阿壩縣、若爾蓋縣、紅原縣、壤塘縣、小金縣、汶川縣、茂縣各選取一個(gè)試驗(yàn)點(diǎn)，每個(gè)試驗(yàn)點(diǎn)各挑選60只西藏羊共計(jì)420只作為試驗(yàn)對象，將各個(gè)試驗(yàn)點(diǎn)的西藏羊隨機(jī)分成2組：對照組20只，免疫組40只。所有試驗(yàn)羊均佩戴溯源耳標(biāo)。

1.2 試驗(yàn)試劑 試驗(yàn)疫苗為羊棘球蚴（包蟲）病基因工程亞單位疫苗，購于重慶澳龍生物制品有限公司；羊棘球蚴（Eg95）ELISA抗體檢測試劑盒，購于重慶澳龍生物制品有限公司；羊包蟲病快速檢測試紙，購于上?？祆`生物科技有限公司。

1.3 方法

1.3.1 羊包蟲病感染情況檢測 采集420只西藏羊首免前的血液制備血清，使用羊包蟲病快速檢測試紙檢測。

1.3.2 免疫方法 免疫組西藏羊按說明書劑量（1頭份）頸部皮下注射羊棘球蚴（包蟲）病基因工程亞單位疫苗，28d后再加強(qiáng)免疫一次；對照組不免疫。免疫組西藏羊分別于首免前、首免后28d、加強(qiáng)免疫后30d采血并分離血清，同時(shí)在相同時(shí)間段采集對照組西藏羊的血清，應(yīng)用羊包蟲病ELISA抗體檢測試劑盒按說明書要求檢測Eg95特異性免疫抗體，分別計(jì)算各組群體抗體陽性率。

1.3.3 剖解試驗(yàn)羊統(tǒng)計(jì)包囊數(shù)量 加強(qiáng)免疫30d后分別在每個(gè)試驗(yàn)點(diǎn)隨機(jī)挑選6只試驗(yàn)羊，其中免疫組3只、對照組3只，解剖試驗(yàn)羊取出完整的肝臟、肺臟等器官，仔細(xì)觀察。發(fā)現(xiàn)白色囊狀物后，將其割開，如發(fā)現(xiàn)有囊壁、囊液以及鈣化的包囊，則記為棘球蚴病陽性。

2 結(jié)果

2.1 羊包蟲病感染情況 用羊包蟲病快速檢測試紙對420份血清進(jìn)行檢測，結(jié)果表明該地區(qū)羊包蟲病的感染率為6.7%～46.7%，且每個(gè)試驗(yàn)點(diǎn)的感染率不同（見表1）。

表1 羊包蟲病快速檢測試紙檢測結(jié)果

2.2 各組免疫抗體檢測結(jié)果 免疫組西藏羊的免疫抗體在首免前與對照組無顯著差異（P＞0.05），首免后28 d、加強(qiáng)免疫后30 d，免疫組西藏羊Eg95特異性免疫抗體的陽性率分別為77.9%、95.4%，明顯高于對照組（P＜0.05）；加強(qiáng)免疫后30 d的抗體陽性率比首免后28 d的陽性率提高了22.5%，差異顯著（P＜0.05）。詳見表 2。

表2 西藏羊各時(shí)期抗體陽性率

免疫組經(jīng)加強(qiáng)免疫后，其最低保護(hù)率為88.3%（紅原縣），最高可達(dá)100%（茂縣）。不同試驗(yàn)點(diǎn)的免疫保護(hù)率有差異（詳見表3），這可能與海拔高度、試驗(yàn)羊個(gè)體差異、注射方法等因素有關(guān)。

表3 7個(gè)試驗(yàn)點(diǎn)各時(shí)段的抗體陽性率

2.3 試驗(yàn)羊剖檢結(jié)果 羊感染包蟲病后主要寄生于肺臟、肝臟等實(shí)質(zhì)器官，在加強(qiáng)免疫30 d后隨機(jī)抽選各個(gè)試驗(yàn)點(diǎn)免疫組和對照組的羊進(jìn)行剖解、觀察。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，剖檢對照組的21只羊，其中有19只羊在肝臟、肺臟發(fā)現(xiàn)大量包囊，檢出率達(dá)90.7%；剖檢免疫組的21只羊，其中有5只羊在肺臟、肝臟發(fā)現(xiàn)包囊，檢出率為23.8%。免疫組的包囊檢出率明顯低于對照組，免疫保護(hù)率達(dá)到國家標(biāo)準(zhǔn)75.0%。表明用羊棘球蚴（包蟲）病基因工程亞單位疫苗（Eg95）免疫西藏羊，能產(chǎn)生良好的免疫應(yīng)答，免疫效果確實(shí)。

3 討論

四川省包蟲病主要分布于甘孜州和阿壩州的31個(gè)縣，其中26個(gè)重點(diǎn)疫區(qū)在藏族牧區(qū)[3-4]。2010年四川省動物疫控中心對理塘、色達(dá)和若爾蓋3個(gè)縣進(jìn)行了包蟲病流行病學(xué)調(diào)查，結(jié)果顯示牛包蟲病平均感染率為21.7%，羊包蟲病平均感染率為29.5%，犬細(xì)粒棘球絳蟲的平均感染率為14.5%[5]。近年來，對細(xì)粒棘球絳蟲六鉤蚴階段的抗原進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)有25KD左右的蛋白（Eg95）為特異性保護(hù)抗原，用其免疫試驗(yàn)羔羊可獲得93.0%的保護(hù)率[6]。因此，本試驗(yàn)選用含Eg95蛋白的羊棘球蚴（包蟲）病基因工程亞單位疫苗對試驗(yàn)羊進(jìn)行免疫接種，結(jié)果測得免疫保護(hù)率高達(dá)95.0%。由于動物血清抗體水平與包囊數(shù)量顯著相關(guān)[7]，故說明本試驗(yàn)中西藏羊經(jīng)加強(qiáng)免疫后產(chǎn)生的抗體水平能對羊群整體產(chǎn)生保護(hù)作用。

4 結(jié)論

鑒于羊包蟲病快速檢測試紙卡的靈敏度較好，建議作為包蟲病臨床初步篩選用；從抗體檢測結(jié)果以及輔助剖檢結(jié)果來看，給羊注射棘球蚴（包蟲）病基因工程亞單位疫苗具有良好的免疫效果，可以作為防制羊棘球蚴病的重要手段。