徐瑞彤，徐艷玲，王彤，成紅艷，戴冠群

南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院全科醫(yī)學(xué)科，南京210029

肺癌是在目前各種腫瘤疾病中發(fā)病率和病死率最高的惡性腫瘤，據(jù)統(tǒng)計(jì)，2014年美國(guó)新發(fā)肺癌患者約占全部腫瘤患者的13%，而在新發(fā)腫瘤病死的患者中，肺癌的病死率約占27%[1]。多數(shù)肺癌患者被確診時(shí)已屬于中晚期，錯(cuò)失了行根治性外科手術(shù)的機(jī)會(huì)，這也是造成肺癌預(yù)后差的根本原因[2]。腫瘤標(biāo)志物是指特征性存在于惡性腫瘤細(xì)胞中，或是由惡性腫瘤細(xì)胞異常產(chǎn)生的物質(zhì)，或是宿主對(duì)腫瘤的刺激反應(yīng)而產(chǎn)生，并能夠反映腫瘤發(fā)生發(fā)展、監(jiān)測(cè)腫瘤對(duì)治療的反應(yīng)的一類物質(zhì)。臨床中常規(guī)推薦的肺癌相關(guān)腫瘤標(biāo)志物具體如下：癌胚抗原（carcinoembryonic antigen，CEA）、神經(jīng)元特異性烯醇化酶（neuron specific enolase，NSE），細(xì)胞角質(zhì)蛋白19片段抗原21-1（cyto-keratin 19 fragment antigen 21-1，CYFRA21-1）、胃泌素釋放肽前體（progastrin-releasing peptide，ProGRP）以及鱗狀上皮細(xì)胞癌抗原（squamous cell carcinoma antigen，SCCAg）等[3]。鑒于這些腫瘤標(biāo)志物在肺癌診斷中的靈敏度和特異度相對(duì)較低[4-5]，因此，確定能夠協(xié)助診斷肺癌的新型腫瘤標(biāo)志物迫在眉睫。腫瘤異常蛋白（tumor abnormal protein，TAP）是各種正常細(xì)胞惡變時(shí)產(chǎn)生的標(biāo)志性物質(zhì)和共性物質(zhì)，作為早期診斷腫瘤的腫瘤標(biāo)志物，其具有特異度、靈敏度高的特點(diǎn)。TAP檢測(cè)技術(shù)通過“糖蛋白質(zhì)變”，即“糖蛋白中糖鏈結(jié)構(gòu)的異常變化”輔助診斷腫瘤，而現(xiàn)有的腫瘤標(biāo)志物通過“糖蛋白量變”輔助診斷腫瘤，二者相互結(jié)合、綜合判斷，可以顯著提高對(duì)腫瘤輔助診斷的準(zhǔn)確性[6-7]。本研究通過檢測(cè)肺癌患者及健康者外周血中TAP的表達(dá)水平，探討TAP在肺癌組織中的表達(dá)及臨床意義，旨在為臨床中肺癌的早期診斷與篩查提供科學(xué)、有效的方法，從而對(duì)目前的肺癌篩查技術(shù)進(jìn)行有益的補(bǔ)充，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

選取2016年7月至2017年12月于南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院全科醫(yī)學(xué)科經(jīng)組織病理學(xué)檢查確診為肺癌的初治患者125例為肺癌組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)組織病理學(xué)確診為肺癌；②所有患者均未接受放療、化療、靶向藥物治療或手術(shù)治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并嚴(yán)重心、肝、腎功能不全；②合并免疫系統(tǒng)疾病；③合并心腦血管疾?。虎芎喜⒃煅到y(tǒng)疾??；⑤合并嚴(yán)重感染性疾病。選取同期于本院體檢的120例健康者作為健康對(duì)照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡＞18歲；②全身體檢基本正常。排除標(biāo)準(zhǔn)：①有惡性腫瘤既往史及現(xiàn)病史；②合并嚴(yán)重感染性疾病或疾病急性加重；③合并肺部基礎(chǔ)疾?。虎苄夭縓片表現(xiàn)異常者。125例肺癌患者中，男91例，女34例；年齡為39～90歲，平均年齡為（65.0±10.6）歲，年齡＜60歲者34例，≥60歲者91例；TNM分期：I+Ⅱ期54例（43.2%），Ⅲ+Ⅳ期71例（56.8%）；病理類型：肺腺癌88例，肺鱗癌25例，小細(xì)胞肺癌12例。120例健康者中，男性85例，女性35例；年齡為41～88歲，平均年齡為（65.0±14.2）歲，年齡＜60歲者45例，≥60歲者75例。兩組患者的性別、年齡等基線資料比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有研究對(duì)象均對(duì)本研究知情同意并自愿簽署知情同意書。

1.2 標(biāo)本采集及檢測(cè)方法

入組前，于清晨空腹?fàn)顟B(tài)下采集兩組研究對(duì)象的外周靜脈血25 μl，制作成3份血涂片，自然晾干。待血涂片晾干后將試劑搖勻并靜置10 min，使用膠頭滴管吸取上清液，垂直滴加3滴至血涂片上，靜置待干2 h，在4倍物鏡下觀察TAP凝聚顆粒。TAP檢測(cè)綜合診斷儀和TAP凝聚助劑由浙江瑞生醫(yī)療科技有限公司提供，檢測(cè)嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作。

1.3 評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

鏡下觀察可見不規(guī)則圓形晶型顆粒，呈淡綠色、淡黃色或棕黃色，顆粒中心色淡且亮，有屈光性，四周混合物較多且呈棕黑色或墨綠色，則判斷為TAP表達(dá)陽性；若未觀察到上述顆粒，則判斷為TAP表達(dá)陰性。TAP凝聚物面積＜121 μm2，判斷為TAP表達(dá)陰性，或表示無明顯凝聚物；121 μm2≤凝聚物面積＜225 μm2，判斷為TAP表達(dá)陽性，或表示凝聚物較??；凝聚物面積≥225 μm2，判斷為TAP表達(dá)陽性，或表示凝聚物面積較大。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 TAP陽性表達(dá)率的比較

肺癌組患者肺癌組織中TAP的陽性表達(dá)率為66.4%（83/125），明顯高于健康對(duì)照組健康者正常組織中的15.0%（18/120），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=66.757，P＜0.01）。

2.2 不同臨床特征肺癌患者TAP表達(dá)情況的比較

Ⅲ+Ⅳ期肺癌組織中的TAP的陽性表達(dá)率明顯高于I+Ⅱ期肺癌組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；不同性別、年齡、組織學(xué)分型肺癌患者的肺癌組織中TAP的陽性表達(dá)率比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。（表1）

表1 不同臨床特征肺癌患者肺癌組織中TAP的表達(dá)情況

3 討論

近年來，肺癌的發(fā)病率、病死率呈逐年升高趨勢(shì)，嚴(yán)重威脅了人類的生命健康和安全，且早期肺癌缺乏特異性的臨床表現(xiàn)，患者確診時(shí)多已處于肺癌晚期，因此，尋求對(duì)早期肺癌的診斷方法對(duì)提高患者的生存率至關(guān)重要。TAP是惡性腫瘤發(fā)展過程中具有共同特征的糖蛋白。與正常的糖鏈蛋白相比，TAP具有較長(zhǎng)的糖鏈、更復(fù)雜的分支結(jié)構(gòu)、異常的質(zhì)量和數(shù)量，外周血中TAP的表達(dá)水平可以間接地反映腫瘤細(xì)胞的數(shù)量和腫瘤的惡性程度[8-10]。

目前，大部分肺癌患者死于轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)，早期診斷并且及時(shí)發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移對(duì)于延長(zhǎng)患者的生存時(shí)間和提高患者的生活質(zhì)量非常重要。盡管CT掃描和超聲波檢查可以被用來識(shí)別肺癌患者的轉(zhuǎn)移，但它們也具有一定的局限性[11-12]。正電子發(fā)射斷層顯像-計(jì)算機(jī)斷層掃描（positron emission tomography-computed tomography，PET-CT）對(duì)于局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的評(píng)估價(jià)值較高，但費(fèi)用亦較高，大多數(shù)患者難以負(fù)擔(dān)[13]。腫瘤標(biāo)志物對(duì)于早期發(fā)現(xiàn)并診斷肺癌具有一定的臨床價(jià)值，然而目前臨床廣泛應(yīng)用的肺癌相關(guān)血清學(xué)腫瘤標(biāo)志物的靈敏度和特異度有限。對(duì)于肺癌高危人群，傾向于聯(lián)合檢測(cè)多種腫瘤標(biāo)志物，從而達(dá)到對(duì)肺癌患者早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷的目的。TAP檢測(cè)技術(shù)在1個(gè)反應(yīng)體系中對(duì)幾十種糖鏈異常的腫瘤標(biāo)志物進(jìn)行綜合檢測(cè)，在促凝劑的幫助下，TAP凝集，形成特殊的晶型顆粒，繼而測(cè)量凝聚物面積。這顯著提高了腫瘤檢測(cè)的靈敏度和準(zhǔn)確性，即TAP檢測(cè)比傳統(tǒng)腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)的靈敏度、特異度更高，彌補(bǔ)了傳統(tǒng)腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)“漏檢現(xiàn)象嚴(yán)重，無法早期發(fā)現(xiàn)腫瘤”的不足，且費(fèi)用低、無創(chuàng)傷，更適宜腫瘤篩查[14]。

本研究結(jié)果顯示，肺癌組患者的肺癌組織中TAP的陽性表達(dá)率為66.4%，明顯高于對(duì)照組的15.0%，且TNM分期較晚的肺癌患者肺癌組織中TAP的陽性表達(dá)率明顯高于TNM分期較早的肺癌患者（P＜0.01），表明TAP的表達(dá)水平與肺癌的發(fā)生可能有關(guān)。這可能是由于在肺癌的發(fā)生過程中，惡性腫瘤組織產(chǎn)生多種異常的糖鏈蛋白，從而表現(xiàn)為TAP表達(dá)水平的升高。

綜上所述，TAP可以作為早期發(fā)現(xiàn)肺癌的重要指標(biāo)，結(jié)合患者的癥狀、體征、其他腫瘤標(biāo)志物和影像學(xué)檢查等，可在一定程度上提高對(duì)肺癌的檢出率。但本研究仍存在一定的局限性，例如樣本量相對(duì)較少，并且未對(duì)患者進(jìn)行隨訪觀察。后續(xù)擬擴(kuò)大樣本并且進(jìn)行前瞻性的研究，從而進(jìn)一步證實(shí)并豐富該研究的結(jié)果。有些研究指出TAP可以作為評(píng)估腫瘤患者化療效果的重要指標(biāo)[15-16]，其可能的機(jī)制是由于在化療的過程中，對(duì)于治療有效的患者，其腫瘤細(xì)胞發(fā)生了縮小或者凋亡，惡性腫瘤組織產(chǎn)生的異常糖鏈蛋白減少，TAP的形成也隨之減少。但是其能否作為評(píng)估肺癌患者治療效果的指標(biāo)，仍需要更進(jìn)一步深入的研究。