金桂花 劉 匯 張 琳

（延邊州食品藥品檢驗(yàn)所，吉林 延吉 133000）

胭脂紅（英文名：PONCEAU 4R），化學(xué)式：C20H11N2Na2O10S3，又名食用赤色102號(hào)（日本）、使用紅色7號(hào)、麗春紅4R、大紅、亮猩紅，為水溶液偶氮類著色劑。胭脂紅是目前我國(guó)使用最廣泛、用量最大的一種單偶氮類人工合成色素。因近年來(lái)，有報(bào)道指出，胭脂紅與歐盟標(biāo)準(zhǔn)禁用的蘇丹紅I 同屬于偶氮類色素，偶氮化合物在體內(nèi)可代謝生成致突變?cè)绑w－－芳香胺類化合物。我國(guó)規(guī)定的適用范圍和使用量均和莧菜紅相同。測(cè)量不確定度，可以檢測(cè)、校準(zhǔn)、評(píng)估數(shù)據(jù)，它是一種能夠合理賦予測(cè)量對(duì)象的分析性，建立測(cè)量對(duì)象分析因素與因素之間關(guān)聯(lián)性的分析方法[1-2]，這種方法的應(yīng)用機(jī)制為測(cè)量不確定度評(píng)定能給出測(cè)量結(jié)果的置信度和置信區(qū)間，不僅對(duì)于測(cè)量結(jié)果的評(píng)價(jià)具有重要作用，還可以通過(guò)對(duì)每個(gè)不確定度分量大小的分析，明確檢測(cè)過(guò)程中影響不確定度因素的主次。將HPLC法應(yīng)用在葡萄酒的胭脂紅檢測(cè)中的原因，是因?yàn)殡僦t與其他合成色素著著關(guān)聯(lián)性，如它能調(diào)配出類似于紫葡萄色或其他偶氮類合成著色劑，通過(guò)分析色譜，了解色譜檢測(cè)結(jié)果的關(guān)聯(lián)性，可以分析出葡萄酒中是否含有胭脂紅合成色素[3]。本文對(duì)高效液相色譜法測(cè)定葡萄酒中胭脂紅含量的測(cè)量不確定度進(jìn)行評(píng)定，通過(guò)實(shí)驗(yàn)的方法找出該方法中影響測(cè)量結(jié)果不確定度的主要因素，說(shuō)明因素之間的主要觀聯(lián)與關(guān)聯(lián)結(jié)果反映出的檢測(cè)結(jié)果分析。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器。BT125D型電子天平：賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司；LDZ5-2型離心機(jī)：北京醫(yī)用離心機(jī)廠；Waters-e2695型高效液相色譜儀：美國(guó)沃特斯公司。

1.2 試劑。胭脂紅標(biāo)準(zhǔn)溶液：0.5 mg/mL，批號(hào)：12001，購(gòu)于中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院；甲醇色譜醇；乙酸銨分析純；水均為去離子水。

1.3 HPLC實(shí)驗(yàn)條件及系統(tǒng)適用性。色譜柱：依利特C18（4.6 mm×250 mm、10 μm）；檢測(cè)器：紫外檢測(cè)器；波長(zhǎng)：254 nm；柱溫：28 ℃；流速：1.0 mL/min；流動(dòng)相：甲醇-乙酸銨溶液（0.02 mol/L，pH=4）梯度洗脫。見(jiàn)表1。

表1 HPLC實(shí)驗(yàn)條件及系統(tǒng)適用性

1.4 測(cè)定方法。標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備：精密吸取胭脂紅標(biāo)準(zhǔn)溶液1 mL，置50 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，制成每1 mL含胭脂紅10 μg/mL的溶液。

供試品溶液的制備：精密吸取混合均勻的供試品5 mL，置離心管中，稱定重量，于2500轉(zhuǎn)/分鐘，離心5 min，取上清液經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，作為供試品溶液。

測(cè)定：分別精密吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液與供試品溶液各10μl，注入高效液相色譜儀，根據(jù)保留時(shí)間定性，外表峰面積法定量。

2 結(jié) 果

2.1 不確定度數(shù)學(xué)模型

P：樣品中胭脂紅的含量（mg/kg）；Cs：胭脂紅標(biāo)準(zhǔn)品濃度0.5 mg/mL；Ax：供試品峰面積；As：標(biāo)準(zhǔn)品峰面積；Wx：供試品質(zhì)量 g；Vx進(jìn)、Vs進(jìn)：供試品與標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)樣量 μL。

2.2 不確定度來(lái)源分析及分量計(jì)算

2.1 供試品溶液的制備

2.1.1 取樣（樣品的均勻性）：樣品均勻，忽略不計(jì)。

2.1.2 稱重過(guò)程。BT125D型電子天平：感量為萬(wàn)分之一，a=±0.1 mg；天平校準(zhǔn)：U1（m樣/對(duì)）= a／k=0.05774 mg（服從矩形分布；天平重復(fù)：U2（m樣／對(duì)）=0.05 mg （公式：0.5×最后一位有效數(shù)字，萬(wàn)分之一天平：0.1 mg）；天平引起的合成不確定天平引起相對(duì)不確定度：Urel

2.1.3 吸取過(guò)程：5 mL移液管引入的不確定度：容量允差，服從矩形分布：K＝√3 ：u1（V5）=a/K＝0.00866 mL；溫度引起的不確定度：u2（V5）=a/K ＝0.00306 mL；合成不確定度：U（V5）=相對(duì)不確定度：U rel×100%＝0.187%；供試品溶液制備過(guò)程引入的不確定度：u rel （P樣）=0.187%

2.2 標(biāo)準(zhǔn)品溶液配制

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)品的純度：說(shuō)明書(shū)未提供不確定度，在此不參加計(jì)算。

2.2.2 溶解稀釋過(guò)程：1 mL移液管引入：合成不確定度：U（VX）相對(duì)不確定度：U rel （V1）容量瓶引入：合成不確定度：相對(duì)不確定度：Urel因此標(biāo)準(zhǔn)品溶液配制過(guò)程引入的不確定度：u rel （P對(duì)）= = 0.417%。

2.3 供試品和標(biāo)準(zhǔn)溶液峰面積引入的不確定度：U rel （A樣）= U rel（A對(duì)）= 0.577%。

2.4 液相色譜儀引入的不確定度：U（儀）= 0.0404%。

2.5 結(jié)果的重復(fù)測(cè)定：測(cè)量結(jié)果相對(duì)不確定度：u rel （P平均）=0.340%；合成相對(duì)不確定度：u rel （P）=0.996%；合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度：u （P）=P平均×u rel （P）=10.5×0.996% = 0.105 mg/kg；擴(kuò)展不確定度：U=k u （P）=2×0.105 =0.21≈0.2 mg/kg （k=2）；報(bào)告結(jié)果：供試品中胭脂紅的含量： P=（10.5±0.2）mg/kg （k=2）。

3 探 討

當(dāng)前國(guó)家規(guī)定不允許在葡萄酒中添加胭脂紅合成色素，為了了解葡萄酒質(zhì)量是否達(dá)到國(guó)家制訂的標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)行胭脂紅不確定分析有非常重要的意義。HPLC法是一種提取方法軟件簡(jiǎn)便、檢測(cè)時(shí)受到干擾的因素少、檢測(cè)成本投入不高的技術(shù)方法。對(duì)HPLC法測(cè)定葡萄酒中胭脂紅含量的不確定度分析技術(shù)進(jìn)行分析。HPLC法測(cè)定的內(nèi)容包括應(yīng)用不確定度分析分量的來(lái)源、分量對(duì)結(jié)果影響的程度、不確定度對(duì)檢測(cè)方法的影響、對(duì)其他拓展因素的影響這項(xiàng)項(xiàng)內(nèi)容。通過(guò)分項(xiàng)這四項(xiàng)結(jié)果，可以了解葡萄酒中胭脂紅的含量。評(píng)估脂胭紅含量的參數(shù)為置信概念、不確定度這兩項(xiàng)，而不確定度包含標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度、標(biāo)準(zhǔn)曲線線性擬和、重復(fù)測(cè)定、樣品制備這四項(xiàng)，它們對(duì)不確定度的貢獻(xiàn)為依次為降序排列。影響結(jié)果的主要因素重復(fù)測(cè)定因素，在99.6%的置信概率下得到其擴(kuò)展不確定度為0.2 mg/ kg。